人外周血单个核细胞体外诱导成为破骨细胞样细胞及鉴定

【摘要】：目的:探讨可行的获取人破骨细胞样细胞以供进一步研究的方法。 方法:从健康志愿者抽取外周静脉血,以密度梯度离心方法获得单个核细胞,在预先种植了UMR106细胞的盖玻片及骨片上,用含1,25(OH)_2D_3、地塞米松和M-CSF的DMEM培养液进行培养,而在未种植UMR106细胞的盖玻片上进行培养者作为对照组。每3—4天更换一次培养液并进行观察。培养至20天,盖玻片上培养的细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色鉴定,以含有至少3个核且抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性者为破骨细胞样细胞。骨片上培养的细胞进行甲苯胺蓝染色及电镜扫描鉴定。 结果:培养第3天,大部分的单个核细胞贴壁,培养第7天,单个核细胞呈伸展状态,部分呈多角形,部分细胞胞浆内颗粒增多,细胞的形态变化与胞浆内颗粒增多并不一致,培养第10天,实验组部分细胞体积较前明显增大,胞浆内颗粒进一步增多,少许细胞出现多核。对照组单个核细胞仅有少数变成多角形或梭形,细胞体积增大及胞浆颗粒增多现象较少。培养第13天,实验组中体积有变化者进一步增大,细胞颗粒进一步增多,未出现此类表现者无明显变化;对照组变化不明显。在第20天,实验组有3%的细胞变为胞体较大的多核细胞(MNC)且抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性,甲苯胺蓝染色及扫描电镜(SEM)检查发现骨磨片上有吸收陷窝形成,SEM发现骨磨片上出现有伪足、多核的巨噬细胞;而对照组没有出现多核巨噬细胞,没有出现抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性细胞。 结论:在1,25(OH)_2D_3、地塞米松和M-CSF存在下,人外周血单个核细胞与UMR106细胞共培养,约3%的单个核细胞可被诱导成为具有骨吸收能力且抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的破骨细胞样细胞。