叶酸、维生素B_6、B_（12）对脑缺血大鼠保护作用的研究

【摘要】：目的 研究叶酸(folic acid)、维生素B_6(Vitamin B_6,VB_6)及维生素B_(12)(VitaminB_(12),VB_(12))对局灶性脑缺血大鼠的保护作用,并探讨其机制,为研究维生素防治脑血管疾病提供科学依据。 方法 1.高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)方法的建立:血浆Hcy经硼氢化钠还原后与SBD-F进行衍生化反应。反应产物经C18反相色谱柱分离,等度洗脱,荧光检测器测定,以峰面积进行定量。2.叶酸、VB_6、VB_(12)对脑缺血大鼠抗氧化作用的研究:选用SD成年大鼠,分为四组,假手术组(SO),灌胃生理盐水10 ml/(kg bw·d);缺血组(IM),灌胃生理盐水10 ml/(kg bw·d);缺血+叶酸组(IM+FA),灌胃叶酸4 mg/(kg bw·d);缺血+复合维生素组(IM+CV),灌胃叶酸4mg/(kg bw·d),VB_612 mg/(kg bw·d),VB_(12)24μg/(kg bw·d)。每组8只,雌雄各半。灌胃28 d后制备大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,造成局灶性脑缺血。分别于灌胃前后和缺血后测定大鼠血浆Hcy浓度及血清抗氧化指标。在缺血后测定大鼠的学习记忆能力及脑组织抗氧化指标,并进行脑部磁共振(megnetic resonance imaging,MRI)扫描和脑组织光镜病理观察。3.叶酸、VB_6、VB_(12)对脑缺血大鼠脑组织血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1和HO-2 mRNA表达作用的研究:缺血后取鼠脑,采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术,以β-actin为内参基因,测定脑组织HO-1、HO-2 mRNA的相对表达量。 结果 1.HPLC测定血浆Hcy,Hcy浓度在0-50μmol/L范围内与绝对峰面积呈线性关系,回收率为96.40-104.30%,样内差异变异系数范围2.45-3.64%,日内差异变异系数范围2.56-3.91%,日间差异变异系数范围3.19-3.96%。2.①灌胃前,各组大鼠各项指标均无显著性差异(P0.05)。②灌胃后及缺血后,IM+FA组和IM+CV组血浆Hcy均低于灌胃前和SO、IM组(P0.05或P0.01),且