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低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达及细胞凋亡的影响

戈海泽  
【摘要】: 第一部分:低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达的影响 为探讨甲状腺功能低下对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达的影响,我们复制了胚胎期和生后发育临界期碘缺乏致甲低的大鼠模型,取孕16天、新生及20日龄仔鼠为实验动物,(分别相当于人胚胎发育的早、中、晚期)利用荧光实时定量PCR技术检测正常及低碘仔鼠脑组织中Nkxs表达水平。发现随着年龄增长,Nkx-2.1表达水平迅速下降,各年龄段表达水平差别有统计学意义;各年龄组低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义,孕16天正常大鼠Nkx—2.1表达水平明显高于低碘大鼠,而新生及20日龄低碘大鼠却明显高于正常大鼠。正常大鼠Nkx-2.2在新生期表达水平最低;低碘大鼠随年龄增长表达水平迅速增高,各年龄组表达水平差别有统计学意义。Nkx-6.1在孕16天表达水平最高,低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义,新生期、20日龄低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义;各年龄段正常大鼠表达水平差别有统计学意义;低碘大鼠在孕16天与新生、20日龄表达水平差别有统计学意义,而新生与20日龄之间表达差别无统计学意义。Nkx—6.2在孕16天及新生期表达水平都很低,20日龄表达水平明显高于前两组育期;孕16天、20日龄低碘与正常大鼠表达水平差别有统计学意义,新生期低碘与正常大鼠表达水平差别无统计学意义。结果表明:甲状腺激素与同源盒基因Nkx之间确实存在相关关系,其相关性在孕16天胎鼠中就已表现出来,而此时胎鼠的甲状腺组织尚未发育成熟,提示母鼠甲状腺激素对胎鼠发育的重要作用。 第二部分:甲状腺激素对原代培养大鼠神经胶质细胞Nkxs表达水平的影响 为了解THs对大鼠神经胶质细胞Nkxs基因表达的刺激作用,我们利用正常Wistar大鼠脑组织的原代神经胶质细胞为研究对象,加入一定剂量的THs(T_3和T_4),在给药后0、12、24、48和72小时分别收获细胞,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞中Nkxs各亚型mRNA水平,动态观察THs对Nkxs表达水平的影响。结果发现在0h、12h、24h10~(-8)M T_3对神经胶质细胞Nkx-2.1表达量无明显刺激作用,48h在T_3刺激作用下Nkx-2.1表达量明显低于对照组,72h其表达量反馈性增高,明显高于对照组;在T_4刺激作用下,Nkx—2.1表达量在12h、24h、48h都明显低于对照组,72h其表达量也反馈性增高。Nkx-2.2在T_3刺激12h后,其表达量明显低于对照组,24h后,其表达量明显高于对照组,48h后其表达量逐渐下降,,72h后,其表达量又反馈性增高,与对照组比较差别有统计学意义;T_4对于神经胶质细胞中Nkx-2.2表达的刺激作用在0h、12h、24h、72h与T_3刺激作用相似,在48h对Nkx-2.2表达的下调作用比T_3作用更明显。Nkx-6.1在12h、24h对于在T_3、T_4刺激作用下都有明显的下调作用,其表达量都明显低于对照组,48时在T_3、T_4刺激作用下,其表达量都反馈性增高,都明显高于对照组,T_3的上调作用要高于T_4作用,而72h T_4刺激作用明显增高,其表达量明显高于对照组及T_3作用组。Nkx-6.2在T_3、T_4刺激作用12h后其表达量高于对照组,24h、48h后其表达量逐渐下调,T_3、T_4刺激作用72h后,其表达量都明显高于对照组。结果表明:THs对于大鼠神经胶质细胞中Nkxs各亚型都有不同程度的刺激作用,但这种作用趋势不是很明显,可能与低激素血清作用时间过短以及细胞收获时间点的选择有关。此外T_4不仅仅是一种激素原,其刺激作用有时也明显高于T_3刺激作用。 第三部分:低碘膳食对大鼠脑组织细胞凋亡的影响 为了解正常和碘缺乏大鼠脑组织细胞凋亡是否存在差异,我们利用已经复制好的低碘及正常大鼠脑组织制作冰冻切片,采用原位细胞凋亡检测试剂盒(Tunnel试剂盒)检测新生期低碘及正常大鼠脑组织细胞凋亡情况。结果发现,新生期低碘与正常大鼠脑组织细胞凋亡差别有统计学意义,推测低碘导致的脑发育迟滞与其引起的细胞凋亡增加有关,最终导致脑组织不可逆性损伤。


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