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《天津医科大学》 2007年
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环维黄杨星D对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用的研究

陈爱芳  
【摘要】: 目的:研究环维黄杨星D(Cyclovirobuxine D,CVB-D)对缺氧复氧损伤所致培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。 方法:采用体外培养乳鼠心肌细胞,制备缺氧复氧心肌细胞损伤模型。心肌细胞随机分为四组:空白对照组(Control);缺氧-复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)组将心肌细胞放入低氧(3%O_2、5%CO_2、92%N_2)孵箱培养16h后转入正常孵箱继续培养4h;CVB-D组在培养液中加入CVB-D 1×10~(-5)mol/L,继续培养20h;CVB-D+H/R组,在缺氧前30min加入CVB-D 1×10~(-5)mol/L,然后缺氧16h,复氧4小时。用比色法测定培养液中LDH活性;硫代巴比妥酸(Thibabituric AcidTBA)法测定MDA含量;黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力;Caspase-Glo(?)3/7 Reagent测定Caspase-3蛋白酶活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果: 1.LDH活性:与Control组比较,H/R组的LDH活性明显升高(27.2±14.2 vs97.8±13.0 U/L,P<0.01);与H/R组相比,H/R+CVB-D组的LDH活性明显降低(126.0±23.8 vs 227.2±14.2 U/L,P<0.01);CVB-D组与Control组比较无统计学差异。 2.凋亡率:与Control组比较,H/R组心肌细胞凋亡率明显升高,从0.7±0.1%升高到13.2±1.1%(P<0.01);与H/R组相比,H/R+CVB-D组的细胞凋亡率显著降低(3.0±0.3 vs 13.2±1.1%,P<0.01);CVB-D组与Control组比较无统计学差异。 3.MDA含量及SOD活力:与Control组比较H/R组培养上清液中MDA含量显著增加,由0.76±0.13μmol·L~(-1)增至3.21±0.17μmol·L~(-1)(P<0.01),SOD活力明显降低,由284.30±13.20 U·ml~(-1)降至165.22±11.67 U·ml~(-1)(P<0.01)。与H/R组相比,CVB-D预处理组可明显降低缺氧/复氧所致MDA含量增加的程度,MDA含量为1.36±0.08μmol·L~(-1)(P<0.01),减弱SOD活力下降的程度,SOD的活力为267.40±14.52(P<0.01)。只加CVB-D处理组无明显变化。 4.Caspase-3活性:与Control组比较,H/R组的Caspase-3蛋白酶活性升高,从1.10±0.08升高到1.42±0.07(P<0.01);与H/R组相比,H/R+CVB-D组的Caspase-3蛋白酶活性降低(1.12±0.08 vs 1.42±0.07,P<0.01);CVB-D组与Control组比较无统计学差异。 结论: 1.CVB-D可减轻细胞内乳酸脱氢酶的漏出,提示CVB-D有维持心肌细胞膜完整性的作用; 2.CVB-D可以降低缺氧/复氧后心肌细胞MDA含量,提高缺氧/复氧后心肌细胞SOD活力,提示其心肌细胞保护作用与抗氧化、清除自由基作用有关; 3.CVB-D具有抑制缺氧/复氧所诱导的心肌细胞凋亡的作用。这一作用的产生与CVB-D降低Caspase-3蛋白酶活性有关,Caspase-3可能是CVB-D的一个有效药物作用靶点。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

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