收藏本站
《天津医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

RNA干扰HIF-1α对食管癌放射敏感性影响的实验研究

任鹏  
【摘要】: 目的: 研究食管鳞状细胞癌及正常食管组织中HIF-1α和VEGF的表达情况,两者表达的相关性及其与临床病理特征和放疗反应之间的关系;检测RNA干扰HIF-1α后HIF-1α和VEGF的变化、及其对细胞增殖、细胞周期的影响;通过体外和体内实验检查KYSE-150细胞在RNA干扰后放射敏感性的变化,初步探讨其影响放射敏感性的机制,为食管癌放射增敏及基因治疗提供新的靶点。 方法: 选取42例接受手术的食管鳞状细胞癌新鲜标本,通过实时定量PCR、免疫组化检查癌组织和正常组织中的HIF-1α及VEGF的表达情况,分析其相关性及与临床病理特征的联系;另选接受单纯放疗的食管癌标本60例,免疫组化检测HIF-1α及VEGF的表达,分析其与放射反应及预后的关系。针对HIF-1α基因的mRNA序列设计三个siRNA序列构建质粒,转染KYSE-150食管癌细胞系,潮霉素筛选获得稳定表达siRNA的细胞克隆,实时定量PCR、Western-blot方法检测细胞中HIF-1αmRNA及蛋白表达,验证干扰效果并筛选能够成功沉默HIF-1α的序列;实时定量PCR、Western-blot方法检测RNA干扰后VEGF的变化,MTT法、流式细胞仪检测siRNA对细胞增殖、细胞周期的影响;体外使用不同剂量的X线分别照射KYSE-150细胞和稳定表达siRNA的细胞克隆,平板克隆形成实验及MTT法检测放射线照射后的细胞存活情况。采用KYSE-150食管癌细胞及KYSE-150/HIF-1α(-)细胞建立裸鼠食管癌移植瘤模型,分组后进行不同剂量的放射线照射,建立生长曲线,对比研究两组肿瘤照射后的放疗反应,根据生长延缓和照射剂量分析其放射敏感性差异;对两种肿瘤标本进行HE及免疫组化染色,比较其HIF-1α、Ki67及CD34表达差异。 结果: HIF-1α和VEGF在食管鳞状细胞癌中的表达率分别为50.0%和76.2%,而在正常食管黏膜组织中表达率为14.3%和33.3%,二者在食管癌中的表达存在强相关性,而在正常食管黏膜组织中弱相关。免疫组化显示食管鳞状细胞癌中HIF-1α蛋白在胞浆与胞核中均有阳性表达,但胞核较胞浆表达强;食管正常粘膜细胞中HIF-1α蛋白表达不稳定且表达较弱。食管鳞状细胞癌中HIF-1α蛋白表达与淋巴结转移及肿瘤组织分化相关,VEGF表达与临床病理特征无关,有淋巴结转移及肿瘤组织分化差者较无淋巴结转移及肿瘤组织分化好HIF-1α蛋白表达率高。HIF-1α和VEGF在接受单纯放疗的食管癌中的表达与放疗敏感性及预后有关,阴性表达较阳性表达放疗敏感性高,预后较好。成功构建了三个HIF-1α的靶向siRNA,并与pGCsi-H1/Hygro/GFP质粒连接,通过电转染食管癌KYSE-150细胞,经筛选后得到稳定的干扰后细胞,实时定量PCR、Western-blot结果证实shRNA3能够使HIF-1α表达沉默,并能抑制VEGF表达,MTT法示转染shRNA3组细胞在缺氧条件下增殖活力减弱,流式细胞仪检测示细胞周期中G0/G1期比例降低,而凋亡增加;平板克隆形成实验及MTT法示shRNA3组细胞照射后存活分数降低,计算结果放射敏感性提高。接种KYSE-150/HIF-1α(-)细胞的裸鼠皮下移植瘤生长明显慢于接种KYSE-150细胞组,两组移植瘤的免疫组化染色显示,接种KYSE-150/HIF-1α(-)细胞的肿瘤中HIF-1α、Ki67和CD34的表达均明显低于KYSE-150组。X线照射可以使两组移植瘤均出现生长缓慢甚至体积减小,KYSE-150/HIF-1α(-)组放射照射后生长延缓更加明显,计算结果SER大于1。 结论: HIF-1α和VEGF在食管鳞状细胞癌中均呈高表达,且二者的表达呈强相关性。食管鳞状细胞癌中HIF-1α蛋白在胞浆与胞核中均有阳性表达,胞核较胞浆表达更强,更特异。食管鳞状细胞癌中HIF-1α表达与淋巴结转移及肿瘤组织分化有关,HIF-1α高表达时淋巴结转移率更高,肿瘤组织分化更差。在单纯接受放疗的食管癌中HIF-1α和VEGF的表达与放疗敏感性及预后有关,阴性表达较阳性表达放疗敏感性高,预后较好。在食管癌KYSE-150细胞中通过RNA干扰能够沉默HIF-1α的表达,抑制VEGF的表达,并能使其在缺氧条件下增殖活力减弱、凋亡增加、细胞周期的分布也发生改变。RNA干扰HIF-1α后能够在体内外抑制肿瘤的增殖和血管生成。RNA干扰HIF-1α有放射增敏作用,在体内外均能提高食管癌KYSE-150细胞的放疗敏感性,机制可能与其减少血管生成、延缓增殖有关。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R735.1

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 许建泽;;喝酒脸红的人易患食管癌[J];心血管病防治知识;2009年05期
2 ;2011华西国际食管外科论坛暨《食管癌规范化诊疗指南》全国巡讲(成都站)学习班通知[J];中国胸心血管外科临床杂志;2011年03期
3 陆如建;陆辉辉;;食管癌手术治疗51例的临床分析[J];工企医刊;2011年03期
4 濮娟;王成师;徐欣;;食管癌放疗后复发再放疗75例[J];山东医药;2011年28期
5 霍亚兰;刘风玲;;食管癌微卫星不稳定的研究进展[J];实用癌症杂志;2011年04期
6 詹玉香;;螺旋CT在食管癌大分割三维适形放疗中的应用价值[J];医学信息(上旬刊);2011年06期
7 彭康宁;张荣新;朱金海;;中上段食管癌超胸顶吻合的应用[J];安徽医药;2011年09期
8 杨楠兰;;临床护理路径在食管癌患者中的运用[J];齐齐哈尔医学院学报;2011年07期
9 施华;;四种肿瘤标志物联检对食管癌的诊断价值[J];放射免疫学杂志;2011年04期
10 鲁毅;李任峰;徐萍;王三虎;田献礼;;RNAi的抗病毒机制及应用[J];生命的化学;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 林东昕;;遗传多态与食管癌[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年
2 王玉分;;PET/CT在食管癌分期诊断中的价值[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
3 王军;韩春;李晓宁;高超;张辛;;食管癌调强放射治疗初期疗效分析[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
4 ;食管癌高、低发地区食物中几种微量元素含量的測定[A];中国生理科学会第二届全国营养专业学术会议论文摘要汇编[C];1979年
5 汪文莉;李文奇;郭秋峰;宋洪欣;乔玉斗;;锁骨上预防照射对食管癌病人预后的影响[A];中国民政康复医学第五届学术会议论文汇编[C];1999年
6 高剑波;武明辉;杨学华;陈学军;周志刚;郭华;岳松伟;;食管癌螺旋CT征象与uPA表达间关系的研究[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编(上册)[C];2006年
7 周政华;;氨基酸与食管癌之间的关系及其在治疗中的意义[A];第二届中国西部营养学术会议专题报告及论文摘要汇编[C];2006年
8 高玉仙;;食管癌患者放疗中的心理护理[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
9 陈洪岩;刘芝华;;S100A14 G972A基因多态与食管癌遗传易感性的关系[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2007年
10 陈彪;;浅谈中药治疗食管癌的神奇疗效[A];第六届中国科学家论坛论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐铮奎;RNA干扰剂即将浮出市面[N];医药经济报;2004年
2 北京大学第一医院放射肿瘤科主任 高献书;多数食管癌首选放疗[N];健康报;2009年
3 中国医科院肿瘤医院副院长 赫杰;斩断食管癌的魔爪[N];健康报;2009年
4 本报记者 李虎成 本报通讯员 赵同增 宋元明;我们“进门”了![N];河南日报;2010年
5 本报记者 胡珉琦;王立东:食管癌高危人群“标签”[N];北京科技报;2010年
6 健康时报实习记者 吴润果;中青年食管癌患者增多[N];健康时报;2010年
7 本报记者 魏平;食管癌:综合治疗迈向主导[N];医药经济报;2011年
8 唐石初;“感觉”食管癌[N];大众卫生报;2003年
9 岳妍;食管癌的防治[N];江苏科技报;2000年
10 杨燕;食管癌护理[N];农村医药报(汉);2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 任鹏;RNA干扰HIF-1α对食管癌放射敏感性影响的实验研究[D];天津医科大学;2009年
2 叶波;食管癌(ADH1B)单核苷酸多态性与食管癌发病风险研究[D];中国协和医科大学;2010年
3 王大虎;端粒酶和PinX1基因在食管癌中的表达及生物学意义[D];河北医科大学;2011年
4 刘亮;耐药基因ABCG2在食管癌中的表达及青蒿琥酯逆转耐药的作用研究[D];河北医科大学;2010年
5 陈清江;Nanog在食管癌中的表达及意义[D];郑州大学;2011年
6 余茜颖;miR-203调控食管癌干细胞自我更新及食管癌相关基因ECRG1转录调控的研究[D];北京协和医学院;2011年
7 陈晓华;5-氨基乙酰丙酸—光动力疗法对人食管癌效应及其机制研究[D];南方医科大学;2010年
8 刘曙光;Protein Kinase C iota (PKCiota)基因在食管鳞癌中的改变及其作用研究[D];北京协和医学院;2009年
9 李卫东;中国北方食管癌的遗传流行学和分子遗传学研究[D];中国协和医科大学;1997年
10 陈晓;哈萨克族食管癌发病的分子生物学机制研究[D];新疆医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于海翔;针对PDECGF基因的RNAi对食管癌细胞生物活性的影响[D];吉林大学;2007年
2 李月考;食管癌组织中△Np73和p73在转录水平的表达状况及相关性研究[D];河北医科大学;2004年
3 孙桢;TFPI-2和SNCG在食管癌中的表达及其与食管癌浸润、转移和细胞凋亡之间的关系[D];郑州大学;2010年
4 赵萌;ERK表达及活化在食管癌进展过程中的作用机制研究[D];河北医科大学;2010年
5 杨荣水;~(18)F-FDG PET/CT在食管癌靶区勾画及评价食管癌早期放疗响应中的应用[D];福建医科大学;2010年
6 瓦热斯江·衣不拉音;Cdc42、hMLH1基因在维吾尔族食管癌中表达及其意义的研究[D];新疆医科大学;2009年
7 章恒;宁夏汉族人群p21~(WAF1/CIP1)基因多态性与食管癌的关联研究[D];宁夏医科大学;2010年
8 陈强;豫西地区食管癌中HPV感染和hTERC基因的关系[D];河南科技大学;2011年
9 陈迪;MRTL通过启动子甲基化抑制FLJ22139基因在食管癌中的表达水平[D];暨南大学;2011年
10 孙凤飞;hPer1、hPer2节律基因对食管癌放射敏感性的影响[D];川北医学院;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026