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《青岛大学》 2003年
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深低温保存角膜缘组织活性的实验研究

罗琳  
【摘要】: 目的 评价深低温保存兔眼及人眼角膜缘组织活性,以探讨深低温保存角膜缘组织应用于临床的可行性。 方法 3只健康新西兰大耳白兔(6只眼),制备角膜缘组织片(约带2mm宽的周边角膜和2mm宽巩膜),采用简化二步深低温保存法保存90天;取2只人尸眼角膜缘组织片(约带有2-3mm宽周边角膜及2-3mm宽巩膜),来源于简化二步深低温保存法保存92天(1只眼)及726天(1只眼)的带巩膜环的角膜组织片。分别行光镜(HE染色、PAS染色)、透射电镜观察其组织结构及超微结构,酶组织化学染色[乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)]测定酶活性,并与新鲜眼角膜缘组织对比。 结果 ①光镜下,简化二步深低温保存兔及人角膜缘组织上皮层形态完好,细胞排列紧密,深层柱状上皮细胞胞浆少、核小、染色深。部分上皮从上皮下乳头间向下突出,每隔1-2mm横过角膜缘,呈放射状排列,形成“Vogt栅栏”。有色素颗粒沉着。未见细胞膜破裂,细胞浆均匀,未见空泡形成,细胞核未见脱失,基底膜完整,呈波浪状。基质层为疏松的纤维组织,胶原纤维排列不规则,直径粗细不均。可见血管。兔及人角膜缘上皮层PAS染色阴性;与其毗邻的角膜侧上皮层PAS染色阴性;巩膜侧上皮层偶见PAS染色阳性。②电镜下,简化二步深低温保存兔及人角膜缘组织上皮层细胞胞膜完整,上皮层表面有微绒毛和微皱褶,上皮细胞之间可见多数桥粒及半桥粒连接,细胞连接完好,底部柱状细胞为单层细胞,排列不规则,其基底连同上皮基底膜呈波浪状。胞质致密,细胞内器丰富,含有高浓度的线粒体、高尔基复合体、内质网及细丝状结构。部分线粒体肿胀,少数嵴断裂,内质网池轻度扩张。胞质内可见色素颗粒。核完整,形状不规则,核膜清晰,染色质分布均匀, 中文摘要 变化不明显。③简化二步深低温保存兔及人角膜缘组织上皮层LDH、 SDH的酶组织化学测定可见上皮细胞内LDH为蓝色反应颗粒,分布于 细胞质中;SDH为紫蓝色反应颗粒,分布于细胞质中。与新鲜角膜缘组 织相比其活性无显著性差异(P0.05)。 结论深低温保存法能保存角膜缘组织活性;能随时按需要为临床 提供活性角膜缘组织材料;为深低温保存角膜缘干细胞移植治疗临床眼 表疾病提供了实验依据。
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R779.65

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