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《青岛大学》 2003年
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RNA原位杂交法检测急性实验性感染小鼠组织内弓形虫

史晓燕  
【摘要】: 刚地弓形虫(Toxoplasma gandii)是一种专性细胞内寄生性原虫,可侵犯人体除红细胞外所有有核细胞,是造成免疫缺陷患者致死性机会性感染及引起胎儿流产,死产和先天性弓形虫病的重要病因。弓形虫感染缺乏特异性的症状和体征,常规病原学检测漏诊率极高,探求灵敏且特异的检测方法十分必要。核酸原位杂交(in situ hybridization)技术自60年代末发展起来,已广泛应用于染色体基因的定位,特定基因表达水平的观察及微小病原体的检测,能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其它成分的影响,特异性高,可精确定位,为弓形虫的病理检测提供了新的手段。本研究首次采用了寡核苷酸探针RNA原位杂交技术检测到实验性小鼠感染组织内的弓形虫,并观察了虫体随感染时间延长在小鼠组织内的增殖及动态分布。 目的:采用寡核苷酸探针RNA原位杂交(RNA in situ hybridization)技术检测并定位实验性感染小鼠组织内的弓形虫虫体,同HE染色及间接免疫酶染色相比较,探讨该技术在弓形虫病理检测中的应用。观察弓形虫感染急性期的组织病变特点及经腹腔感染的弓形虫在各主要脏器的增殖和动态分布。 材料和方法:设计并合成弓形虫SAG2基因来源的寡核苷酸探针1条,同时采用文献记载的18SrRNA位点来源的寡核苷酸探针,地高辛加尾标记。以弓形虫RH株速殖子10~3个经腹腔感染昆明株小鼠,分别于感染后第2、3、4、5、6、7、8天处死,取肝、心、肺、脑组织制备石蜡标本进行HE染色,免疫组化染色及RNA原位杂交。 结果:RNA原位杂交法成功检测到感染小鼠各组织内的弓形虫。虫体于感染后第2天首先出现于肝脏中,第3天出现于心,肺组织,第6天脑内发现虫体。组织病变为非特异性炎性病变。肝、心肌组织内可见形成明显的假包囊,虫灶呈点、片状,分布不均。肺组织以游离虫体为主,均匀分布。脑内虫体出现时间较晚且数量较少。共检测感染小鼠28只,肝组织阳性率为100%(28/28),肺组织阳性率为78.57%(22/28),心肌阳性率为71.43%(20/28),脑组织阳性率为21.43%(6/28),检出率高于HE染色(p<0.01),同免疫组化无显著性差别(p>0.05)。对照组小鼠7只,均未检测到弓形虫阳性信号。 中文摘要 结论:寡核并酸探针RNA原位杂交法显示组织内虫体清晰,准确,在形态学 研究及病原检出率上明显优于HE染色,与免疫组化法无显著差别。弓形虫感染组 织病变为非特异性炎性病变。经腹腔感染小鼠时,弓形虫在各主要脏器的出现顺序 为肝肺,心脑。
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R382

【参考文献】
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