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《青岛大学》 2004年
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酒精对心肌组织影响的实验研究

姜敏  
【摘要】:目的:通过给小鼠腹腔注射不同浓度乙醇,建立一个早期的大量饮酒的动物模型,运用电镜和光镜技术观察心肌细胞的形态学及超微结构的变化,用酶细胞化学染色方法观察心肌细胞细胞色素C氧化酶的活性变化,采用免疫组织化学方法观察酒精对细胞凋亡及凋亡相关基因BCL-2和BAX表达的影响,研究酒精对心脏毒性作用的机理。 方法:将60只健康雄性昆明种小白鼠随机分为4组:酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组,分别给予10%、20%、30%浓度酒精和生理盐水腹腔注射,每日一次,连续处理30天后取材。部分标本制成石蜡切片,经HE染色,光镜下观察酒精对心肌细胞形态学影响;经核固红-结晶紫染色对心肌细胞凋亡情况进行定量分析;用免疫组织化学的方法显示酒精对心肌细胞凋亡相关基因BCL-2和BAX的表达情况,并利用图像分析技术进行定量分析。部分标本制备透射电镜标本,电镜下观察酒精对心肌细胞超微结构的影响。其余标本置于恒冷箱切片机内,分别切15μm及40μm厚冰冻切片,细胞色素C氧化酶染色,光镜下观察酶活性变化,并利用图像分析技术进行定量分析;40μm厚冰冻切片,孵育后制作电镜标本,透射电镜下观察心肌细胞线粒体上细胞色素C氧化酶的活性变化。 结果:1、形态学观察显示:酒精注射后各组心肌细胞HE染色未见明显异常。透射电镜下,实验各组肌原纤维排列紊乱,出现空泡,肌丝溶解,线粒体肿胀,大小不一,嵴断裂甚至融合消失,细胞核形状不规则,核膜厚薄不均,部分染色质凝聚、边集,于核膜下呈斑块状,且随着酒精浓度增加,超微结构的改变越明显。2、核固红-结晶紫染色观察及固缩细胞核计数结果显示:实验组细胞核有的被染成蓝紫色,染色质凝聚成块状,有的细胞核固缩。高倍镜下计数显示实验各组异常的细胞核明显多于对照组(P<0.01),且随着酒精浓度增加,固缩核细胞数逐渐增加。3、免疫组织化学染色观察与图象分析结果显示:实验各组中BCL-2表达比对照组明显减弱(P<0.01),着色浅,且分布不均;相反,实验各组BAX表达比对照组明显增强(P<0.01),染色加深,可见粗大颗粒。4、细胞色素C氧化酶染色观察:实验各组与对照组比较心肌细胞酶活性减弱,颗粒染色深浅不一,分布不均(P<0.01),且 中文摘要 与酒精浓度呈正相关。电镜下,细胞色素C氧化酶定位于线粒体内膜和峭上,实验· 各组可见线粒体峭电子密度降低,酶活性减弱。 结论:l、心肌组织结构的改变与酒精的摄入量成正相关,摄入量较少时,光 镜和电镜观察均未出现明显的心肌细胞的异常变化,但随着摄入量的增大,心肌细 胞的超微结构即发生异常改变,且随着浓度的增加,异常更加显著。当饮酒继续, 结构上的损伤会进一步加剧。结构的改变与心肌功能异常密切相关,当各种结构损 伤达到一定程度时必然会出现心肌功能的改变。2、心肌细胞凋亡在酒精对心肌影 响的发生机制上发挥一定的作用,随着酒精浓度的增加,心肌细胞的凋亡征象愈加 明显,固缩核细胞数逐渐增加,我们推测酒精可能引起心肌细胞凋亡。3、长期大 量饮酒能减弱线粒体的功能,改变其结构;而当心肌细胞发生凋亡时,线粒体结构 和功能也可发生改变,可以推断出线粒体也参与了酒精引起心肌细胞凋亡的过程。 4、酒精引起的心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl一2和Bax的异常表达有关,二者 在细胞凋亡中是相互拮抗的关系,酒精使心肌细胞Bd一2的表达减弱,而Bax的表 达增强。5、酒精可以减弱线粒体上Cox的活性,使线粒体功能发生改变,致心肌 有氧代谢低下,最终将导致心肌细胞结构和功能的改变。
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R361

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【引证文献】
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4 记者 吴平;瑞典新车加装“酒精锁”[N];新华每日电讯;2004年
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