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《青岛大学》 2003年
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环孢素A对同种异体移植神经再生的影响

王军  
【摘要】:【目的】研究环孢素A(cyclosporine A,CSA)对同种异体移植神经再生的影响,探讨抑制同种异体神经移植中免疫排斥反应、促进神经再生的方法。 【方法】采用32只成年、健康的雄性Wrister大白鼠随机分为A、B两组,每组16只,进行坐骨神经异体神经移植实验。A组为不应用CSA的异体神经移植组,左侧行新鲜的异体神经移植称为AL组,右侧行冷冻的异体神经移植称为AR组;B组为应用CSA的异体神经移植组,左侧行新鲜的异体神经移植称为BL组,右侧行冷冻的异体神经移植称为BR组。异体神经移植段来源于同侧A、B两组坐骨神经移植段相互交换。 用0.25%的硫贲妥钠1ml/100g,腹腔内注射麻醉。在大白鼠股后外侧区行纵行切口,自股二头肌与半腱肌、半膜肌之间剪开结缔组织,钝性分离股二头肌与半腱肌,缝线牵开臀大肌充分显露坐骨神经。自梨状肌下缘0.5cm处,用消毒剃刀整齐切断坐骨神经并切除坐骨神经干10mm。A、B组右侧的神经移植段置于-196℃液氮中冷冻30Sec,然后两组神经移植段交换移植于坐骨神经缺损处;两组左侧的神经移植段交换行新鲜异体神经移植。11-0丝线缝合4~6针,吻合神经,然后逐层缝合关闭切口。术后A组不给予任何药物,B组给予CSA 5mg/kg·d至实验结束,室温保持在23—25℃。 所有实验大白鼠,分别于术后4w和8w进行以下指标的观察:①坐骨神经动作 中文摘要 电位潜伏期(actioo po七ential latency,APL,):于神经吻合口近端刺激坐骨神经, BL一410生物信号提取系统描记同侧胖肠肌动作电位,测量动作电位潜伏期。②移植 段神经轴突计数(axonal count,AC):在移植段中段,随机取视野,染色后应用电镜 放大600倍拍照进行神经轴突计数。③胫前肌湿重测定(mu:cular wet\ve ight,WW): 完整切下大白鼠胫前肌,测定胫前肌湿重,然后行神经肌肉的病理检查。 数据处理采用SAS计算机数据处理系统软件进行t检验,P0.05有统计学差异。 【结果】1、各组动作电位、轴突计数、胫前肌湿重测量结果分别为:AL组AP工P7.726 士0 .445、AC47.5士12.73、WWO.2286士0.0585;AR组APIP3.124士0.713、AC 111.5 士20.89、WW 0.3341士0.0680;BL组APIP3.190士0.325、·AC 251士19.54、WWO.3211 士0 .0458;BR组AP工P3.138土0.324、AeZOG.5士17.16、WW 0.3117士0.0360。 分别比较Al-组与AR组、BL组与BR组、AL组与BL组、AI{组与BR组的测量结 果,各组动作电位、轴突计数、胫前肌湿重测量结果的统计学分析结果表明:AL组 动作电位潜伏期最长、轴突计数和胫前肌湿重最少(P0.01),说明新鲜的异体神经 移植神经再生最差;BL组与AR组、BR组比较,动作电位潜伏期无明显差异(P0.05), 但是BL组轴突计数明显高于AR组和BR组(P0.01),说明应用免疫抑制剂CSA新 鲜的同种异体神经移植神经再生最好;BR组与AR组比较,动作电位潜伏期、肌肉 湿重无明显差异(P0.05),但轴突计数高(P0.01),说明冷冻的异体神经移植中, 应用免疫抑制剂神经再生效果优于不应用免疫抑制剂的异体神经移植;肌肉湿重测 量结果的统计学分析表明,仅AL组明显低于其他各组(P0.05),而AR、BR、BL各 组之间无明显差异(P.05)。 2、光镜观察:术后sw放大叨倍光镜下观察肌肉情况可见,A组左侧肌纤维出现较 为广泛的变性、萎缩,横纹肌模糊不清,肌束间隙增宽,部分肌纤维节段性空变, 淡染;而右侧胫前肌部分肌纤维变性、萎缩,横纹肌模糊不清,核固缩,肌束间隙 增宽。B组左侧肌纤维轻微变性,萎缩不明显;而右侧胫前肌肌纤维变性,有轻度 中文摘要 萎缩。 神经中段HE染色可见:A组左侧除有较弥漫的淋巴细胞浸润,还有灶性淋巴细 胞浸润,而且神经内有多核巨细胞反应,并见吞噬现象,右侧坐骨神经有少量淋巴 细胞浸润;B组左侧神经束完整,可见较多的血管,管腔较粗,内有红细胞,而右 侧神经束完整,可见血管,管腔内有红细胞。 电镜观察:AL组与AR组可见少量轴突再生,但发育不完善,AR组轴突数量相对 较多;BL组和BR组轴突密度明显增高,轴突趋向成熟,发育完善;BL组轴突数量较 BR组多。 [结论】①新鲜的异体神经移植段具有完整的髓鞘、许旺氏细胞未被破坏,抗原 性最强,免疫排斥反应最溜,因而神经再生能力最差。②深冷冻可以提高移植段的 神经再生能力。因为冷冻处理破坏了神经髓鞘和许旺氏细胞,降低了移植段神经的 抗原性,免疫排斥反应减弱。另外,冷冻的异体神经移植中,应用免疫抑制剂神经 再生效果优于不应用免疫抑制剂的异体神经移植。③应用免疫抑制剂时,新鲜的异 体神经移植其免疫排斥反应被抑制,而新鲜神经保留有完整的许旺氏细胞、血管更 容易再生建立血运、完整的髓鞘可以作为神经再生的支架等,从而神经再生能力要 好于冷冻的异体神经移植。所以,应用免疫抑制剂CSA新鲜的同种异体神经移植神 经再生最好。 总之,环抱素A可以抑制同种异体神经移植的免疫排斥反应,提高神经再生能 力。
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R651.3

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