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《青岛大学》 2007年
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fat-1基因对HT-29细胞增殖的抑制作用以及转基因小鼠的构建与鉴定

刘晓蕾  
【摘要】: 目的探讨fat-1基因在结肠癌HT-29细胞的凋亡、增殖以及细胞周期中所起的作用,并对其抗肿瘤作用的机制进行初步探讨。构建和鉴定携带有外源fat-1基因的转基因小鼠。 方法构建真核表达载体(pEGFP-fat-1),用脂质体介导的方法转染到结肠癌HT-29细胞,通过荧光显微镜下观察及RT-PCR的方法检测fat-1基因的表达,气相色谱分析的方法检测fat-1基因对HT-29细胞n-6/n-3 PUFAs比例的影响,MTT法分析fat-1基因对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞术检测fat-1基因对HT-29细胞的凋亡和细胞周期的影响,RT-PCR法检测iNOS和COX-2的表达变化。 构建pEF-fat-1重组质粒,以显微注射法把线性化重组质粒注射到小鼠受精卵的雄原核,并将受精卵移植到受体鼠的输卵管中产出转基因小鼠,通过PCR、Southern blot杂交等方法确立阳性整合有目的基因的G_0代小鼠。 结果成功构建了真核表达载体pEGFP-fat-1,fat-1基因能在HT-29细胞内有效表达,并降低了n-6/n-3 PUFAs的比例,抑制HT-29细胞的增殖,促进其凋亡,细胞增殖主要被阻滞在S期,iNOS及COX-2的表达均降低。成功构建了pEF-fat-1重组质粒,显微注射到小鼠受精卵,得到G0代小鼠,PCR、Southern blot杂交确立了4只整合有fat-1基因的首建鼠。 结论fat-1基因能降低HT-29细胞n-6/n-3 PUFAs的比值,并通过一定的信号转导途径促进大部分HT-29细胞在S期凋亡,抑制其增殖。NO/COX-2相关的信号转导途径是fat-1基因发挥抗肿瘤作用的机制之一。 fat-1基因可整合到小鼠体内。得到的转基因小鼠为研究fat-1基因的生物学功能提供了动物模型。
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q343

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