雌二醇对实验性阿尔茨海默病大鼠β淀粉样肽和β分泌酶影响的研究

【摘要】： 目的：采用2×2方差分析实验设计，通过双侧穹隆-海马伞切断结合卵巢切除的方法建立大鼠模型，观察多脑区(皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区)β-淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))表达的变化，优化建立实验性阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)动物模型。同时观察补充外源性雌激素对模型大鼠相应脑区Aβ_(1-40)和β分泌酶表达的影响，探讨影响β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)代谢过程的机制。 方法：研究分二部分。研究一：实验性阿尔茨海默病动物模型的建立。健康雌性Wistar大鼠28只，按2×2方差分析方法设计分组，2因素为双侧卵巢和双侧穹隆-海马伞，2水平分为卵巢切除与不切除，穹隆-海马伞切断与不切断。随机分为4组：①双侧卵巢切除组(OVX组)；②双侧穹隆-海马伞切断组(FF组)；③双侧卵巢切除加穹隆-海马伞切断组(OF组)；④假手术对照组。每组大鼠7只。研究二：雌二醇对模型大鼠β淀粉样肽和β分泌酶干预作用研究。根据研究一优化建立的实验性阿尔茨海默病动物模型大鼠14只，随机分为2组：①AD模型加雌二醇治疗组(AD+E_2组)；②AD模型组(AD组)。每组大鼠7只。雌二醇补充疗法参照Gundlah等用药方法和给药时间，补充外源性苯甲酸雌二醇(1mg／Kg)，皮下注射，每7d1次，共4次。应用免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞技术观察皮质区、海马CA1区等部位Aβ_(1-40)和β分泌酶阳性细胞表达的变化。Olympus光学显微镜下计数各脑区平均单个视野的阳性细胞数量。 结果： 研究一：双侧穹隆-海马伞切断与否在双侧卵巢非切除状态下存在显著作用，双侧穹隆-海马伞切断导致各脑区Aβ_(1-40)阳性细胞表达显著增多(p＜0.01)。双侧卵巢切除与否在双侧穹隆-海马伞非切断状态下存在显著作用，双侧卵巢切除导致各脑区Aβ_(1-40)阳性细胞表达显著增多(p＜0.01)。双侧穹隆-海马伞切断与否与双侧卵巢切除与否对海马CA1区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区Aβ_(1-40)阳性细胞表达存在显著交互作用，双侧卵巢与双侧穹隆-海马伞切断共同作用效应更加显著(p＜0.01)，表现为穹隆-海马伞切断加卵巢切除状态下海马CA1区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区Aβ_(1-40)阳性细胞表达显著增多(p＜0.05)。 研究二：在皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、Meynert核区，AD+E_2组与AD组比较，Aβ_(1-40)阳性细胞计数减少，差异具有显著性(均p＜0.01)；β分泌酶呈现 红色荧光，主要在胞膜、胞浆表达。在皮质区和海马CA1区，AD+E_2组与AD组比较，β分泌酶阳性细胞数减少，差异具有显著性(均p＜0.01)。 结论：双侧穹隆-海马伞切断与卵巢切除存在显著的交互效应，表现为大鼠脑内多部位Aβ_(1-40)表达显著增多，与AD的病理过程密切相似，可作为建立实验性AD动物模型的方法。雌二醇可以降低相应脑区β淀粉样肽1-40和β分泌酶的表达，具有干预病理过程的作用。