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《青岛大学》 2008年
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扇贝多肽经由ROS/Fas/caspase-8通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

李丙华  
【摘要】: 目的建立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型,从活性氧(ROS)、凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法采用正交实验设计,以流式细胞仪PI染色法测定细胞凋亡率,确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型。实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68 mmol·L~(-1)维生素C阳性对照组、UVB+5.69 mmol·L~(-1)PCF组、UVB+2.84mmol·L~(-1)PCF组、UVB+1.42 mmol·L~(-1)PCF组。以2,7-二氯氢化荧光素二酯(DCFH-DA)为荧光探针,检测PCF对UVB照射后细胞内ROS生成的影响;应用小干扰RNA(siRNA)干扰UVB辐射的HaCaT细胞的Fas表达;荧光染色(Hoechst33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析FassiRNA、ROS清除剂(N-acetyl-L-cysteine,NAC)及caspase-8抑制剂(z-IE7D-fmk)对细胞凋亡的影响;RT-PCR检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测细胞色素C(Cyto C)、FADD及caspase-8、caspase-3和多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的表达。结果正交实验结果表明,20mJ·cm~(-2)UVB照射HaCaT细胞后18 h为最佳凋亡模型;PCF能明显抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡及细胞内活性氧的产生;干扰Fas及预先加入NAC和z-IETD-fmk可显著抑制UVB诱导的HaCaT细胞DNALadder的形成;1.42~5.69 mmol·L~(-1)剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas、FADD的表达、线粒体细胞色素C的释放及caspase-8、caspase-3和PARP的活化。结论PCF可抑制20mJ·cm~(-2)UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与阻断ROS—CytoC通路和Fas—FADD—caspase-8—CytoC—caspase-3—PARP通路有关。
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R966

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