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腺病毒介导胰岛素样生长因子-1基因在Wistar大鼠体内表达时间的研究

阎丽华  
【摘要】: [目的] 观察腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子-1(rIGF-1)基因在Wistar大鼠体内的表达时间;以及三种不同rIGF-1基因注射途径对其在体内表达效果的影响。 [方法] 复苏并培养293细胞,在293细胞中扩增腺病毒。4-5周龄Wistar雄性大鼠(体重150g±10g)180只,随机分为对照组:①空白对照组,②腺病毒空载体(Ad-eGFP)对照组;实验组:③腹腔注射Ad-rIGF-1组,④肌肉注射Ad-rIGF-1组,⑤胰腺被膜下注射Ad-rIGF-1组,每组各36只。每组并随机分为6小组,小组编号为1-6,每小组6只。①空白对照组不做任何处理,②空载体对照组腹腔注射含Ad-eGFP的重组腺病毒液0.1ml,③④⑤组分别给予腹腔、肌肉、胰腺被膜下注射含Ad-rIGF-1的重组腺病毒液0.1ml。所有大鼠自由饮食。注射腺病毒后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天,第35天依次处死编号1-6小组。处死大鼠后,立即取出胰腺,分为两部分,一部分中性福尔马林固定,石蜡包埋固定做免疫组化观察rIGF-1在胰腺局部含量;一部分-70℃冻存,做半定量RT-PCR,检测rIGF-1基因在胰腺局部表达情况。留取大鼠血液标本,离心取上清,测定血清IGF-1和胰岛素水平。每周检测第6小组大鼠体重和空腹血糖。 [结果] 腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子-1基因在实验组有效表达,表达时间为腺病毒注射后第7天至第21天。ELISA法、免疫组化、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)三种方法测得IGF-1在血液和胰腺局部升高情况一致,不同部位注射组无明显差别。ELISA法检测实验组血清胰岛素较对照组降低,但差异无统计学意义。实验组血糖较对照组无明显差别,体重较对照组增长明显。未观察到明显副作用。 [结论] 1.腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子-1基因在Wistar大鼠体内有效表达,表达时间为注射基因后第7天至第21天。不同部位注射组之间无明显差别。 2.腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子-1基因在正常Wistar大鼠体内表达过程中,对胰岛素、血糖无明显影响,实验组体重增长较对照组明显。未见明显副作用。


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