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《河北医科大学》 2011年
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食管癌组织中MT-1、-2与-3的表达差异及临床意义

李振华  
【摘要】:目的:食管癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤,对人类的健康已经构成严重的威胁。在国际上其病死率位居恶性肿瘤病死率的第七位,我国是食管癌的高发国家,其病死率位居恶性肿瘤病死率的第四位。虽然对于食管癌的发病机制已经有了广泛深入的研究,但其具体的发病机制至今并未完全明确,初步的研究表明食管癌的发生与发展与多种癌基因的激活和抑癌基因的失活长期协同作用的结果。 金属硫蛋白(metallothionein, MT)于1957年在马的肾中第一次别发现,是一类广泛存在于生物体体内的低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质。MT至少有四种同分异构体,即MT-1、MT-2、MT-3和MT-4。它们在维持金属离子内稳态、重金属的解毒、清除自由基等许多方面都具有重要的生物学功能。 有关MT-1和MT-2的研究显示,MT-1和MT-2要占所有MT的主体,除具有MT共有的生物学功能外,近年来的研究显示MT-1、MT-2与恶性肿瘤的发生发展关系密切。Saga等对膀胱癌的研究和张瑞芬等对乳腺癌的研究均显示随着肿瘤的病理分级的升高,MT-1和MT-2的阳性表达率也相应地增高。提示随着肿瘤的恶性程度、侵袭力的上升,MT-1和MT-2的表达量也随之增高。在食管癌方面,孙雪飞等用免疫组化的方法研究显示食管癌的分化程度与MT-1、MT-2的表达量呈负相关。 MT-3与其它MT一样具有许多相同的生物学功能,此外,MT-3还具有抑制细胞增殖等方面的特殊功能,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白质,其不但抑制神经元生长及轴索形成,参与神经元再生的调控,而且还与多种恶性肿瘤的发生关系密切,目前对膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌和胃癌的研究显示在不同的恶性肿瘤中MT-3的表达状况也不尽相同,如:在正常膀胱中没有MT-3的表达,而在所有的膀胱癌中均存在MT-3表达;在前列腺癌和前列腺上皮内增生性病变中,MT-3免疫染色的差异很大,有些肿瘤细胞具有与神经细胞相似的强烈染色,有些则全无染色。另有研究表明在胃癌中MT-3基因存在异常甲基化。MT-3同样与食管癌的发生发展密切相关,田子强等应用免疫组化方法研究显示在食管癌中MT-3存在过表达,此外,田子强等还应用限制性酶切图谱分析的方法研究表明食管癌中MT-3基因也存在异常甲基化。 本课题应用Western Blot法检测新鲜食管癌标本及切缘正常粘膜中MT-1、MT-2和MT-3的表达量,旨在研究MT-1、MT-2和MT-3在食管癌中的表达量的差异以及MT-1、MT-2和MT-3的表达量与各临床病理参数之间的关系。 方法: 1选取2008年7月至2009年7月在河北医科大学第四附属医院胸外科行手术治疗的食管癌患者70例,术中取肿瘤中心(去除坏死组织)及距肿瘤边缘至少5cm的食管切缘组织,病理确认食管残端为正常食管粘膜上皮。用液氮罐转入-70℃冰箱冻存。 2提取上述组织的全细胞蛋白,应用Western Blot法检测MT-1、MT-2和MT-3的表达量,用Odyssey双色红外激光成像系统扫膜,图像输出后用Image J图像分析系统对图像进行光密度扫描,分析MT在食管癌组织和切缘正常组织中各条带的光密度值。计算食管癌组织中MT的光密度值与内参照蛋白GAPDH的光密度值的比值和切缘正常组织中MT的光密度值与内参照蛋白GAPDH的光密度值的比值分别作为MT的表达量。 3应用SPSS13.0统计软件对结果进行统计学分析,用t检验的统计方法对各MT在食管癌组织及切缘正常组织中的表达量进行统计学分析;用方差分析的统计方法将各MT在食管癌中的表达量与临床病例参数进行统计学分析。 结果: 1 MT-1、MT-2在食管癌组织中的表达量高于切缘正常组织(t=5.214, P=0.000)。 2 MT-3在食管癌组织中的表达量高于切缘正常组织(t=4.287, P=0.000)。 3食管癌组织中病理分期越高MT-1、MT-2的表达量越高(F=4.581, P=0.009);分化程度越差MT-1、MT-2的表达量越高(F=11.451, P=0.000);肿瘤部位不同的组织中MT-1、MT-2的表达量无显著差异(F=0.253, P=0.778)。 4食管癌组织中病理分期越低MT-3的表达量越高(F=7.237, P=0.001);分化程度越高MT-3的表达量越高(F=5.357, P=0.010);肿瘤部位不同的组织中MT-3的表达量无显著差异(F=.038, P=0.963)。 结论: 1 MT-1、MT-2与MT-3在食管癌组织中的表达量均显著高于切缘正常组织的表达量。说明MT-1、MT-2和MT-3的高表达与食管癌的发生发展密切相关。 2晚期和恶性程度较高的食管癌组织中,MT-1、MT-2倾向于高表达,说明随着食管癌的发生和进一步的发展MT-1、MT-2的表达量也随之增高; MT-1、MT-2的表达量的多少对判断肿瘤的恶性程度有积极意义;在肿瘤部位不同的组织中MT-1、MT-2的表达量无明显差异。 3早期和恶性程度较低的食管癌组织中,MT-3倾向于高表达,说明食管癌的早期发生和发展与MT-3密切相关,并出现高表达,对食管癌的早期诊治具有积极地意义;MT-3在分化不同的癌组织中表达量的不同有助于对肿瘤恶性程度的判断;部位不同的食管癌中MT-3的表达量无显著差异。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R735.1

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