mRNA定量分析检测Notch信号传导通路在人原发性肝癌组织中的表达

【摘要】：目的:Notch信号作为一种在进化中高度保守的反映细胞间传导机制的通路,它维持者细胞的增殖、分化和凋亡,在胚胎发育和细胞分化命运的决定中发挥重要的作用。有研究表明Notch信号也参与肿瘤的发生发展,Notch受体和配体分子表达失调以及Notch信号的异常激活出现在一系列恶性肿瘤中。但Notch信号在肝癌形成过程的机制,目前尚不十分清楚。本实验采用Real time-PCR法检测Notch信号通路受体及配体分子的基因水平在人原发性肝癌组织、癌旁硬化肝组织、肝腺瘤组织、正常肝组织中的表达,以了解Notch信号通路在肝癌的发生发展过程当中所起的作用,并分析Notch信号通路受体及配体分子基因表达水平与肝癌患者术后生存的影响。 方法: 1研究对象40例原发性肝细胞癌癌组织、40例癌旁硬化肝组织,10例肝腺瘤组织及10例肝血管瘤周边正常肝组织(作为对照)均来自河北医科大学第四医院肝胆外科2008年4月-2009年5月手术切除标本。所有组织类型均经河北医科大学第四医院病理科确诊。所有患者术前均未进行任何形式的治疗。 2研究方法:收集人原发性肝癌临床标本,应用Real time-PCR法检测Notch1 mRNA、Notch2 mRNA、Notch3 mRNA、Notch4 mRNA、Jagged1 mRNA、RBP-J mRNA在肝癌组织、癌旁硬化肝组织、肝腺瘤组织及正常肝组织中的表达情况。 3随访肝癌患者生存情况,将肝癌患者临床病理资料(性别、年龄、肿瘤直径、血清AFP、HBsAg、HBeAg、临床分期、病理分级、伴有瘤栓或转移)与总生存情况进行汇总,并分析Notch信号通路受体及配体分子的基因表达水平与肝癌患者总生存情况的关系。 结果: 1肝癌组织与正常肝组织比较,Notch1 mRNA(P =0.001),Jagged1 mRNA(P =0.003),RBP-J mRNA(P =0.005)表达量均有明显升高;而肝癌组织Notch2 mRNA ( P =0.069),Notch3 mRNA (P =0.535),Notch 4 mRNA (P =0.491)表达与正常肝组织比较差异无统计学意义。 肝癌组织与癌旁硬化肝组织比较,Notch1 mRNA(P =0.000),Notch2 mRNA(P =0.005)表达量明显升高;而肝癌组织Notch3 mRNA(P =0.209),Notch4 mRNA (P =0.068),Jagged1 mRNA(P =0.141),RBP-J mRNA(P =0.388)表达与癌旁硬化肝组织比较差异无统计学意义。 肝癌组织与肝腺瘤组织比较,Notch1 mRNA(P =0.036)表达量明显升高,而肝癌组织Notch2 mRNA ( P =0.611),Notch3 mRNA (P =0.696),Notch 4 mRNA (P =0.343),Jagged1 mRNA(P =0.335),RBP-J mRNA(P =0.727)表达与肝腺瘤组织比较差异无统计学意义。 癌旁硬化肝组织与正常肝组织比较Jagged1 mRNA(P =0.042)表达明显升高;而癌旁硬化肝组织Notch1 mRNA(P =0.532),Notch2 mRNA ( P =0.275),Notch3 mRNA (P =0.925),Notch 4 mRNA (P =0.123),RBP-J mRNA(P =0.152)表达与正常肝组织比较差异无统计学意义。癌旁硬化肝组织与肝腺瘤组织比较Notch1 mRNA(P =0.882),Notch2 mRNA ( P =0.150),Notch3 mRNA (P =0.490),Notch 4 mRNA (P =0.176),Jagged1 mRNA(P =0.782),RBP-J mRNA(P =0.917)表达差异均无统计学意义。 肝腺瘤组织与正常肝组织比较Notch1 mRNA(P =0.648),Notch2 mRNA ( P =0.427),Notch3 mRNA (P =0.685),Notch 4 mRNA (P =0.097),Jagged1 mRNA(P =0.446),RBP-J mRNA(P =0.195)表达差异均无统计学意义。 2 Notch1mRNA、Notch2 mRNA、Notch3 mRNA、Notch4 mRNA、Jagged1mRNA及RBPJ mRNA在肝癌组织中的表达与临床病理资料的关系:Notch1mRNA、Notch3 mRNA、Notch4 mRNA、Jagged1mRNA及RBPJ mRNA在肝癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、血清AFP、HBsAg阴阳性、HBeAg阴阳性、瘤栓或转移、肝癌临床分期及病理分级均无关。Notch2 mRNA在肝癌组织中的表达与患者性别、年龄、血清AFP、HBsAg阴阳性、HBeAg阴阳性、瘤栓或转移、肝癌临床分期及病理分级均无关;但在肿瘤直径≥5cm的肝癌组织中Notch2 mRNA的表达强于肿瘤直径5cm者,且Notch2 mRNA的表达与肿瘤直径呈正相关性(χ2=5.000, P =0.025; r=0.354, P =0.025) 3 Notch信号通路受体及配体分子的基因表达水平对肝癌患者术后生存的影响:单因素生存分析结果显示,Notch1 mRNA表达(+)患者6个月累积生存率为75%,12个月累积生存率为65%,18个月累积生存率为55%, Notch1 mRNA表达(-)患者6个月累积生存率为85%,12个月累积生存率为80%,18个月累积生存率为50%,,24个月累积生存率为43.7%,Notch1 mRNA表达(+)及Notch1 mRNA表达(-)患者平均生存时间分别为21.10月和20.55月,Notch1 mRNA表达水平与肝癌患者生存期无关(P =0.670)。Notch2 mRNA表达(+)患者6个月累积生存率为75%,12个月累积生存率为62.5%,18个月累积生存率为45.8%,Notch2 mRNA表达(-)患者6个月累积生存率为87.5%,12个月累积生存率为75%,18个月累积生存率为62.5%,,24个月累积生存率为54.7%,Notch2 mRNA表达(+)及Notch2 mRNA表达(-)患者平均生存时间分别为19.33月和23.06月,Notch2 mRNA表达水平与肝癌患者生存期无关(P =0.387)。Notch3 mRNA表达(+)患者6个月累积生存率为78.9%,12个月累积生存率为68.4%,18个月累积生存率为47.4%,Notch3 mRNA表达(-)患者6个月累积生存率为81%,12个月累积生存率为71.4%,18个月累积生存率为57.1%,,24个月累积生存率为50.8%,Notch3 mRNA表达(+)及Notch3 mRNA表达(-)患者平均生存时间分别为20.47月和21.11月, Notch3 mRNA表达水平与肝癌患者生存期无关(P =0.869)。Notch4 mRNA表达(+)患者6个月累积生存率为76.5%,12个月累积生存率为64.7%,18个月累积生存率为41.2%,Notch4 mRNA表达(-)患者6个月累积生存率为80%,12个月累积生存率为66.7%,18个月累积生存率为53.3%,,24个月累积生存率为42.7%,Notch4 mRNA表达(+)及Notch4 mRNA表达(-)患者平均生存时间分别为18.94月和18.93月,Notch4 mRNA表达水平与肝癌患者生存期无关(P=0.784)。 Jagged1 mRNA表达(+)患者6个月累积生存率为80%,12个月累积生存率为60%,18个月累积生存率为40%,Jagged1 mRNA表达(-)患者6个月累积生存率为80%,12个月累积生存率为74.3%,18个月累积生存率为54.3%,,24个月累积生存率为50.9%,Jagged1 mRNA表达(+)及Jagged1 mRNA表达(-)患者平均生存时间分别为18.40月和21.19月,Jagged1 mRNA表达水平与肝癌患者生存期无关(P=0.598)。 RBPJ mRNA表达(+)患者6个月累积生存率为75%,12个月累积生存率为58.3%,18个月累积生存率为50%,RBPJ mRNA表达(-)患者6个月累积生存率为82.1%,12个月累积生存率为71.4%,18个月累积生存率为53.6%,,24个月累积生存率为49.7%,RBPJ mRNA表达(+)及RBPJ mRNA表达(-)患者平均生存时间分别为17.83月和21.30月,RBPJ mRNA表达水平与肝癌患者生存期无关(P=0.805)。 多因素COX风险模型分析结果显示,影响肝癌患者生存率的危险因素是临床分期(P=0.008),相对危险度是0.240,95%可信区间为0.084~0.685,未发现患者性别、年龄、肿瘤直径、血清AFP、HBsAg阴阳性、HBeAg阴阳性、瘤栓或转移、病理分级及Notch1 mRNA,Notch2 mRNA,Notch3 mRNA,Notch4 mRNA,Jagged1 mRNA,RBPJ mRNA的表达水平与肝癌患者的生存率有明显的相关性。 结论: 1 Notch1 mRNA在肝细胞肝癌组织中的表达显著高于正常肝组织、癌旁硬化肝组织及肝腺瘤组织,提示Notch1可能促进肝癌的发生发展,进一步证实Notch信号通路的活化与肝癌的发生发展密切相关。 2 Notch信号通路受体及配体分子基因表达的高低对术后肝癌患者生存期影响无关,对早期发现肝癌有重要意义。