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实验高压电烧伤血清GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ/动态变化及己酮可可碱的干预作用

陈文婷  
【摘要】:目的:通过前期的实验研究,可以观察到实验高压电烧伤后动物活体软脑膜、深筋膜、胃黏膜、肝脏、肠系膜、肠黏膜、肾皮质等的微循环变化,发现高压电流一方面可使局部组织微循环失调,而且还使远隔器官的微循环紊乱,从而导致全身的微循环障碍,导致机体组织和器官损伤。微观上可以观察到血细胞流变学变化,包括白细胞附壁与黏附、血小板聚集、红细胞聚集以及微小血栓形成等。已有实验证明血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa(CD41/CD61)、GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ(CD42)在血小板聚集、黏附及早期血栓形成中起着重要作用,GPⅡb/Ⅲa浓度升高及GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ浓度降低是血小板活化的重要标志之一。我们设计此实验目的在于通过观察高压电流对血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ的影响,进一步探讨高压电烧伤微循环紊乱的机制,及己酮可可碱(PTX)对血清血小板膜糖蛋白表达的干预作用,为高压电烧伤后微循环障碍的防治提供理论依据。 方法: 1.实验动物分组:健康成年雄性SD大鼠(河北医科大学动物实验中心提供,合格证编号832457)90只,按随机数字表法分成三组,即假高压电烧伤组(简称对照组)、高压电烧伤实验组(简称实验组)、高压电烧伤己酮可可碱(PTX)治疗组(简称治疗组),每组各30只。以上三组又分别分为点击前15min(T0)、电击即刻(5min内)(T1)、电击后1h(T2)、2h(T3)、4h(T4)、8h(T5)6个不同的时相,每组5只。各组分别编号后分笼饲养。 2.实验前准备:将大鼠编号、称重、左上肢及右上肢脱毛,记录数据。将实验药品配成所需浓度。 3.高压电烧伤模型复制:正确连接实验变压器及调压器,待用。1%戊巴比妥钠溶液麻醉大鼠(40mg/kg),待麻醉成功后,备皮大鼠左上肢、右下肢及胸部,将大鼠仰卧于动物绝缘台上,四肢伸展,固定于高压输出电路之间,分别固定1cm2圆形铜制电极片于大鼠的左上肢、右下肢脱毛区,左上肢为电流入口,右下肢为电流出口。接通电源,调整变压器输出电压1KⅤ,电击实验组与治疗组实验动物各3s,对照组给予假电(即只连电线,不通电),其他条件各组均相同。电击后即刻,治疗组于腹腔内注射1%PTX(按50mg/kg即5mL/kg给药),对照组及电击组电击后即刻于腹腔内注射5mL/kg生理盐水。 4.标本采集与保存:将复制成功的高压电烧伤大鼠模型麻醉、开胸,直视下心脏取血,收集4mL全血,并置于普通塑料试管中,静置约30分钟,待血清析出后上离心机以3000转/min离心,离心10min,取上清液,于Eppendorf管中-70℃保存待用。 5.指标检测:采用ELISA双夹心抗体法,检测高压电烧伤后不同时相血清中GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ浓度的动态变化,及PTX对二者的干预效果。 6.实验数据处理:所得数据为计量资料,则用SPSS13.0统计软件进行分析处理,实验数据均以均数±标准差(x±s)表示,采用完全随机设计的单因素方差分析(ANOⅤA)对实验得到数据进行分析,以p<0.05为有显著性差异。 结果:血清GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ的变化: (1)对照组组内比较无统计学意义(p0.05),可认为对照组组内各水平无显著性差异。 (2)高压电烧伤后实验组T1~T4时相血清GPⅡb/Ⅲa水平高于对照组及电击前(T0)GPⅡb/Ⅲa的水平(p0.05),T5时相GPⅡb/Ⅲa水平较对照组及电前无显著性差异(p0.05),GPⅡb/Ⅲa表达水平电击后即刻即达高峰,以后随时间下降,至电击后8h恢复至电击前水平;高压电烧伤后血清GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ早期实验组T1、T2时相水平低于对照组及电击前的水平(p0.05),T3~T5时相GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ水平较对照组及电前无显著性差异(p0.05),GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ表达水平电击后即刻降低,至电击后2h恢复至电击前水平。 (3)高压电烧伤后早期PTX治疗组T1~T4时相血清GPⅡb/Ⅲa水平高于对照组及电击前水平(p0.05),但较同一时相电击组血清水平有不同程度下降(p0.05),T5时相PTX治疗组GPⅡb/Ⅲa的水平较对照组、电击前及电击组无显著性差异(p0.05);高压电烧伤后PTX治疗组T1、T2时相血清GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ水平低于对照组及电击前水平(p0.05),较同一时相的电击组水平升高,T3~T5时相PTX治疗组GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ水平较对照组、电击前及电击组无显著性差异(p0.05)。 结论: 1.实验高压电烧伤大鼠血液中的GPⅡb/Ⅲa浓度升高、GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ浓度降低,二者浓度随时间变化具有可逆性,均可恢复至电击前水平。二者电击后的浓度变化标志着血小板活化,从而使血小板发生黏附、聚集等反应,使血液黏稠,血流减慢,造成微循环障碍。 2.高压电烧伤早期PTX治疗组GPⅡb/Ⅲa与实验组比较明显降低,但仍高与对照组,GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ高压电烧伤PTX治疗较实验组升高,但仍低于对照组,PTX可降低血小板活化程度,使血小板聚集性、黏附性降低,从而改善微循环紊乱。


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