收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

丙酸睾酮对老年大鼠运动相关行为及黑质纹—纹状体多巴胺能神经元的改善作用

崔瑞  
【摘要】:老年人和老年动物常表现出运动平衡障碍、运动不协调和力量减弱,这些运动相关行为的变化是衰老的标志之一。在正常衰老过程中,参与运动调控的黑质-纹状体多巴胺能神经元发生退行性改变,表现为反映多巴胺(dopamine,DA)能神经元功能活动的两大标志物酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase, TH)和多巴胺转运体(dopamine transportet, DAT)的表达减弱。黑质-纹状体DA能神经元功能活动的减弱显著影响老年机体的运动相关行为。 研究显示,雄性甾体激素(anabolic androgenic steroids,AAS)能够影响机体的行为,改变中枢DA能神经元的功能状态。AAS增加老年雄性小鼠的抗焦虑行为和认知行为、改变成年大鼠探索行为等多个旷场行为指标、增强雄性大鼠脑内DA的代谢,补充睾酮逆转去势引起的雄性大鼠纹状体TH活性的降低。 胶质细胞源性神经生长因子可以提高老年大鼠黑质和纹状体的TH活性、增强老年大鼠的运动能力,暗示外源性干预因素可以作用于老年大鼠黑质-纹状体DA能神经元并影响老年大鼠的运动行为。研究发现老年雄性大鼠血清睾酮水平的显著降低,补充睾酮可提高老年大鼠内侧视前区的DA能神经元的活动,维持其正常的性活动。补充雄激素能否改变老年雄性大鼠黑质-纹状体DA能神经元的功能活动,从而改善其运动相关行为的障碍目前尚不清楚。临床资料显示睾酮参与帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的神经病理生理改变,伴有睾酮缺乏的帕金森病患者在睾酮替代治疗后,静止性震颤、精细运动调控和非运动症状均得到显著改善,而且运动症状的改善程度与血清睾酮水平的升高有关。我们推测对老年雄性大鼠给予睾酮处理可能会提高黑质-纹状体DA能神经元的功能状态,从而改善老年雄性大鼠的运动相关行为。 因此,本研究利用旷场实验、倾斜面实验、水平绳实验和粘附物去除实验,分析丙酸睾酮(testosterone propionate, TP)处理对老年大鼠运动相关行为的影响;通过免疫细胞化学、免疫印迹以及RT-PCR技术观察TP处理后老年雄性大鼠黑质-纹状体TH和DAT的表达变化;通过细胞培养分析睾酮(testosterone, T)处理后SH-SY5Y细胞TH和DAT的表达,推测雄激素改善老年大鼠黑质-纹状体DA能神经元功能状态的可能机制,期望所获结果为以雄激素替代辅助治疗老年运动相关行为障碍提供一定的实验依据。 第一部分:丙酸睾酮改善老年雄性大鼠的运动相关行为 目的:探讨TP处理对老年雄性大鼠运动相关行为的影响。 方法:通过旷场实验、倾斜面实验、水平绳实验和粘附物去除实验观察TP处理后老年雄性大鼠运动相关行为的变化,放射免疫分析法检测TP处理后老年雄性大鼠血清睾酮含量的变化。 结果: 1.通过旷场实验发现,24Mon组老年大鼠的静止闻嗅次数,Walking、Climbing、Rearing、Sniffing次数,垂直运动和水平运动次数,总径长,理毛次数和理毛持续时间比6Mon组分别降低了39%(P0.01)、52%(P0.01)、39%(P0.01)、69%(P0.01)、51%(P0.01)、50%(P0.01)、56%(P0.01)、55%(P0.01)、59%(P0.01)和55%(P0.01),理毛潜伏期比6Mon组延长了392%(P0.01);长期TP处理后,老年大鼠的静止闻嗅次数,Climbing、Rearing、Sniffing次数,垂直运动次数比24Mon组分别升高了27%(P0.05)、37%(P0.05)、97%(P0.01)、44%(P0.05)和52%(P0.05),差异显著;其中Climbing次数恢复至6Mon组水平。 2.通过倾斜面实验发现,24Mon组老年大鼠的倾斜面下滑角度比6Mon组降低了22%(P0.01),50°夹角滑下次数增加了550%(P0.01);长期TP处理后,老年大鼠的倾斜面下滑角度显著增加(P0.05),50°夹角滑下次数显著减少(P0.01)。 3.通过水平绳实验发现,24Mon组老年大鼠的悬挂时间比6Mon组大鼠缩短了62%(P0.01);长期TP处理后,老年大鼠的悬挂时间比24Mon组明显延长(P0.01)。 4.通过粘附物去除实验发现,24Mon组老年大鼠的左鼻和右鼻粘附物去除时间比6Mon组大鼠分别延长了382%(P0.01)和577%(P0.01),左前爪和右前爪粘附物去除时间比6Mon组分别延长了1410%(P0.01)和1156%(P0.01);长期TP处理后,老年大鼠的左鼻(P0.05)、右鼻(P0.05)和左前爪(P0.01)、右前爪(P0.01)粘附物去除时间均显著降低,但仍与6Mon组水平有显著差异。 5.24Mon组大鼠的血清睾酮含量比6Mon组降低了61%(P0.05),TP处理使老年大鼠血清睾酮水平显著升高(P0.01)。 结论: 1.24月龄老年雄性大鼠的旷场运动行为显著低于6月龄大鼠;长期TP处理可以改善老年大鼠的旷场运动行为。 2.24月龄老年雄性大鼠平衡反应能力、肌张力和运动协调能力比6月龄大鼠显著降低;长期TP处理可以改善这些受损的运动技能。 3. TP处理可以显著升高老年雄性大鼠血清睾酮水平。 第二部分:丙酸睾酮增强老年雄性大鼠黑质-纹状体DA能神经元TH和DAT的表达 目的:探讨丙酸睾酮处理对老年雄性大鼠黑质-纹状体DA能神经元TH和DAT表达的影响。 方法:通过免疫细胞化学和免疫印记检测TH和DAT在老年雄性大鼠黑质和尾壳核的表达。 结果: 1.免疫细胞化学实验发现:24Mon组老年大鼠SN的TH表达比6Mon组降低了25%(P0.01),CPu的TH表达比6Mon组降低了28%(P0.01),长期TP处理后SN和CPu的TH表达分别升高了14%(P0.01)和26%(P0.01),差异显著。24Mon组老年大鼠SN和CPu的DAT表达比6Mon组分别降低了22%(P0.01)和32%(P0.01),TP处理使SN(P0.01)和CPu(P0.05)的DAT表达显著升高,其中24Mon-TP组大鼠SN的DAT表达恢复到了6Mon组水平。 2.免疫印记实验发现:24Mon组老年大鼠SN和CPu的TH表达分别比6Mon组降低了28%(P0.01)和36%(P0.01),长期TP处理后SN和CPu的TH相对表达分别升高了22%(P0.01)和68%(P0.01),CPu的TH表达恢复至6Mon组水平。24Mon组老年大鼠SN的Glyco-DAT的相对表达比6Mon降低了54%(P0.01),Non-Glyco-DAT降低了26%(P0.05);CPu的Glyco-DAT相对表达比6Mon组降低了71%(P0.01),Non-Glyco-DAT降低了39%(P0.01);TP处理后,老年大鼠SN和CPu的Glyco-DAT、CPu的Non-Glyco-DAT的相对表达分别升高了74%(P0.01)、89%(P0.01)和35%(P0.05),SN的Non-Glyco-DAT的相对表达没有显著变化。 结论: 1.24月龄老年雄性大鼠SN和CPu多巴胺能神经元TH的表达明显降低;长期给予TP能够显著增加老年雄性大鼠SN和CPu的TH表达。 2.24月龄老年雄性大鼠SN和CPu糖基化与非糖基化DAT的表达均显著降低;长期TP处理可显著升高SN糖基化DAT、CPu的糖基化和非糖基化DAT的表达,而对SN非糖基化DAT表达没有显著影响,说明TP可能影响DAT的糖基化过程。 第三部分:丙酸睾酮增强老年雄性大鼠黑质-纹状体DA能神经元THmRNA和DAT mRNA的表达 目的:探讨丙酸睾酮在转录水平对老年雄性大鼠黑质-纹状体DA能神经元的影响。 方法:通过RNA提取、RT-PCR检测丙酸睾酮处理后老年雄性大鼠黑质TH mRNA和DAT mRNA的表达。 结果:与6Mon组大鼠相比,24Mon组大鼠SN的TH mRNA(P0.01)和DAT mRNA(P0.01)的表达都显著下降;长期TP处理使老年雄性大鼠黑质TH mRNA和DAT mRNA表达显著升高,恢复至6Mon组水平。 结论:长期TP处理升高老年雄性大鼠黑质TH mRNA和DAT mRNA的表达,表明TP可以转录水平影响黑质-纹状体DA能神经元TH和DAT的表达。 第四部分:睾酮对分化的SH-SY5Y细胞TH和DAT表达的影响 目的:探讨睾酮对分化的SH-SY5Y细胞DA能神经元功能状态的影响。 方法:RA/TPA诱导SH-SY5Y细胞分化6天,通过免疫印迹、RT-PCR检测睾酮处理对RA/TPA分化的SH-SY5Y细胞TH和DAT表达的影响。 结果: 1. RA/TPA分化6天后,SH-SY5Y细胞形态发生显著变化,突起明显增多、变长,细胞NeuN表达增加。 2.台盼蓝活细胞计数和MTT检测均显示10nM和100nM T处理24小时和48小时对细胞活性没有显著影响。 3.免疫印迹结果显示,与Con-24h组细胞相比,10nM-24h组RA/TPA分化的SH-SY5Y细胞TH的表达升高了123%(P0.01),100nM-24h组分化细胞TH的表达降低了58%(P0.01);与Con-48h组细胞相比,10nM-48h组RA/TPA分化的SH-SY5Y细胞TH的表达降低了31%(P0.01),100nM-48h组分化细胞TH的表达降低了89%(P0.01)。与Con-24h组细胞相比,T处理使10nM-24h组RA/TPA分化的SH-SY5Y细胞DAT的表达升高了90%(P0.01),100nM-24h组分化细胞DAT的表达升高了91%(P0.01);与Con-48h组细胞相比,T处理后10nM-48h组RA/TPA分化的SH-SY5Y细胞DAT的表达升高了47%(P0.05),100nM-48h组分化细胞DAT的表达升高了84%(P0.01)。 4. RT-PCR结果显示,与Con-24h组细胞相比,T处理后10nM-24h组细胞TH mRNA的表达升高了41%(P0.05),100nM-24h组细胞THmRNA的表达无显著变化;Con-48h、10nM-48h和100nM-48h三组细胞间TH mRNA的表达无显著差异。 结论: 1. RA/TPA可以诱导SH-SY5Y细胞向成熟神经元分化。 2.10nM和100nM的T处理分化的SH-SY5Y细胞24小时和48小时对细胞活力没有显著影响。 3.10nM T处理24小时可以显著增加分化的SH-SY5Y细胞的THmRNA和蛋白表达,而其他剂量和处理时间的T则降低TH的表达,表明T增加DA能神经元TH表达的作用是低剂量短时效性的。 4.10nM和100nM T处理24和48小时均使分化的SH-SY5Y细胞DAT表达升高,表明T增强了DA能神经元功能状态。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张世仪,张艳萍;老年大鼠学习记忆的观察[J];基础医学与临床;1988年05期
2 朱立华;程冠生;;人参总皂甙对老年大鼠外周淋巴细胞DNA修复的影响及其机理探讨[J];中国医学物理学杂志;1991年Z1期
3 余颂涛;王士雯;陈伟;;老年和成年大鼠长时失血性休克血中氨、精氨酸及其比率的变化[J];中国老年学杂志;1991年02期
4 杨勤;老年大鼠垂体细胞膜G蛋白的变化[J];中华老年医学杂志;1996年02期
5 石瑞如,何路明,胡雅儿,翁世艾,曹永舒,易宁育;黄芪对老年大鼠脑M受体及血浆环核苷酸的调节作用[J];中国医药学报;1998年01期
6 何宏文,姚志彬,卢汉平,袁群芳;人参对老年大鼠脑组织β受体的影响[J];解剖学研究;1999年01期
7 曹小飞,张德明,邓青南;LPS急性肺损伤老年大鼠肺巨噬细胞TLR4与IL-18 mRNA表达变化的对比研究[J];广东医学;2003年03期
8 沈自尹,黄建华,陈瑜,胡作为;老年大鼠下丘脑-垂体-肾上腺-胸腺轴基因表达谱的研究[J];中国老年学杂志;2004年02期
9 莫霄云,钱海凌,李丽;活血化瘀利水中药复方对老龄大鼠自由基和血液流变学的影响[J];辽宁中医杂志;2004年05期
10 龚顺波;黄碧玉;毛树章;;A Survey on Mechanisms of the Anti-aging Effects of Acupuncture and Moxibustion[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2005年03期
11 王赞;孟红梅;林卫红;张淑琴;;海仁藻酸致痫老年大鼠脑NMDA受体亚单位R1蛋白表达的变化[J];中国老年学杂志;2007年24期
12 杨树旭;王义荣;钱聪;何超;;老年大鼠脑出血后神经细胞再生的研究[J];浙江大学学报(医学版);2008年04期
13 杜文广;许毅;;通塞脉片对老年大鼠体内血栓形成和血液流变学的影响[J];南京中医药大学学报;2009年02期
14 梁艳虹;缪国斌;张健;;老年大鼠急性心肌梗死模型的制作[J];华西医学;2011年07期
15 张国玺;刘志云;李彩熙;金龙;周文泉;李连达;陈可冀;;生脉口服液对老年大鼠肝脏组织化学成分的影响[J];中国中西医结合杂志;1987年08期
16 柯尊纪;老年大鼠在水迷宫中学习记忆能力的改变[J];解剖学研究;1995年02期
17 张红,张梅,张轩萍,赵荣瑞;老年大鼠血管平滑肌中多巴胺受体DA1亚型的改变[J];山西医科大学学报;1996年S1期
18 佟帅,姜国华,朱梅;针刺老年大鼠后三里、关元穴区对GPT.GOT的影响实验研究[J];针灸临床杂志;1998年01期
19 祖衡兵!200540,黄霞!200025,陈生弟!200025,陈明!200025,陈红专!200025;普拉睾酮对老年大鼠的促智作用[J];实用老年医学;2000年05期
20 张欣洲,董少红,张万帆,李雄根,张青,廖昌龙,杨建国,ChrisBaylis;血管紧张素Ⅱ对老年大鼠肾小球和肾小管的效应[J];中国老年学杂志;2001年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王伽伯;孔维军;肖小河;赵艳玲;王红娟;赵海平;张琳;金城;方芳;楚笑辉;;幼年和老年大鼠对大黄的耐受性差异研究[A];全国第3届临床中药学学术研讨会论文集[C];2010年
2 王伽伯;孔维军;肖小河;赵艳玲;王红娟;赵海平;张琳;金城;方芳;楚笑辉;;幼年和老年大鼠对大黄的耐受性差异研究(英文)[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
3 于洋;;运动对老年大鼠T细胞凋亡相关基因表达的研究[A];第七届全国体育科学大会论文摘要汇编(二)[C];2004年
4 商亚珍;程建军;缪红;;黄芩茎叶黄酮对老年大鼠记忆障碍和神经异常变化的改善作用[A];2008年全国抗衰老与老年痴呆学术会议论文集[C];2008年
5 杨树旭;钱聪;何瞻;蔡勇;王义荣;;老年大鼠脑出血后神经细胞再生的研究[A];2008年浙江省神经外科学学术年会论文汇编[C];2008年
6 李斌;李林;叶翠飞;张丽;丰艳;;神健胶囊对老年大鼠海马组织学改变的影响[A];第九届中国神经药理学术会议论文摘要集[C];2000年
7 刘春风;尹伟华;罗蔚锋;吴锦昌;;左旋多巴对健康老年大鼠脑内多巴胺转运体的影响[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
8 尹伟华;刘春风;张鸿;苏敏;;左旋多巴对健康老年大鼠的神经毒性研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
9 唐光旭;赵丽;;有氧运动对老年大鼠神经元p38MAPK信号通路的影响[A];2011年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与骨骼肌”学术研讨会论文集[C];2011年
10 刘剑刚;李浩;姚明江;赵文明;刘龙涛;;还脑益聪方对老年大鼠学习记忆及脑组织β类淀粉样蛋白和P物质水平的影响[A];第六次全国中西医结合养生学与康复医学学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 崔瑞;丙酸睾酮对老年大鼠运动相关行为及黑质纹—纹状体多巴胺能神经元的改善作用[D];河北医科大学;2012年
2 陶丽丽;益气活血中药延缓增龄与高血压所致血管老化的机制研究[D];中国中医科学院;2011年
3 杨树旭;实验大鼠脑出血后神经细胞再生的研究[D];浙江大学;2009年
4 张华;慢性缺血对大鼠黑质和纹状体结构及功能的影响[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
5 郭明瑜;艾灸对老年大鼠脑神经元保护机制的研究[D];湖北中医学院;2005年
6 殷忠;缺血后处理对老年大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制的研究[D];第四军医大学;2009年
7 乔晞;老年大鼠肾脏缺血/再灌注损伤诱导肾小管上皮细胞凋亡的变化特点及机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
8 刘忞;人参皂甙Rg1抗衰老、促智作用及其机制研究[D];中国协和医科大学;1994年
9 邵迎红;衰老对雄性大鼠睾丸功能的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
10 赵佳慧;阿托伐他汀对老年肾脏的影响及其机制的探讨~1[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈正;腹腔注射内毒素对成年和老年大鼠记忆功能的影响[D];苏州大学;2010年
2 王利;老年大鼠血管功能的特点及其能量代谢和线粒体功能变化[D];第四军医大学;2010年
3 王利;老年大鼠血管功能的特点及其能量代谢和线粒体功能变化[D];第四军医大学;2010年
4 王登科;成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞增殖及分化的研究[D];宁夏医科大学;2011年
5 陈敏;枸杞菊花方对老年大鼠视功能衰退保护作用的研究[D];扬州大学;2011年
6 卜吉梅;孕烯醇酮对老年大鼠胆碱能系统及突触蛋白1的影响[D];复旦大学;2011年
7 张今尧;阿托伐他汀对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤及多器官功能的保护作用及其与eNOS的关系[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
8 凡婷;20周规律有氧运动对中老年大鼠动脉管壁结构及抗氧化能力的影响[D];湖南师范大学;2011年
9 郭莲;右美托咪定对老年大鼠术后认知功能与海马去甲肾上腺素含量的影响[D];南昌大学;2012年
10 周海鹏;针刺预处理对老年大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[D];青岛大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;游泳运动对高脂饮食老年大鼠胰岛素抵抗和血清瘦素的影响[N];中国医药报;2003年
2 叶又红;中药新方有望给不孕者“送子”[N];文汇报;2007年
3 记者 丰捷;清华大学教授发现一种可增强大脑学习功能的物质[N];光明日报;2010年
4 沈自尹;肾虚与衰老的微观比较研究[N];中国医药报;2002年
5 万同己;谨防药源性急性肌张力障碍[N];中国医药报;2002年
6 曹楠;帕金森病新药工艺获专利证书[N];医药经济报;2006年
7 本报记者 曹玉祥;老年帕金森病如何康复[N];医药养生保健报;2006年
8 匡远深;小鼠模型助帕金森病早诊早治[N];健康报;2008年
9 匡远深;帕金森病临床前期小鼠模型建立[N];中国医药报;2008年
10 解放军总医院第一附属医院 向刚尔;专家指出:帕金森病需要多渠道综合防治[N];科技日报;2008年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978