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中药和硒对慢性肝纤维化的预防和治疗作用及其机理研究

彭彦辉  
【摘要】: 肝纤维化是各种病因所致的慢性肝病的共同病理过程,也是向肝硬化发展的中间环节,其主要发病机制是肝细胞外基质的过度增多和异常沉积。当慢性肝病一旦发展到肝硬化甚至腹水的地步,则各种治疗难以奏效,西药又无特效药物,因此研究如何预防及治疗肝纤维化成为当今医学界的难题。祖国医学认为本病的病机为正衰邪盛,湿热未尽兼血瘀,肝郁脾肾气虚所致。目前中药在预防和治疗肝纤维化效果方面取得了很好的效果。关于本研究所用的中药,主要由丹参、莪术、当归、鳖甲等组成。其主要化学成分为葡萄糖、蔗糖、果糖、丹参酮、挥发油、酚性成分、茵陈酮、有机酸、维生素E、维生素B_(12)等,主要功效为活血化瘀、消炎、利湿、消肿、增强机体免疫功能。 还有研究表明,肝纤维化患者的血清硒和发硒含量显著降低,提示肝纤维化与缺硒有着密切的关系;人体必需微量元素硒有明显减轻肝细胞变性及纤维增生程度的作用,同时还参与机体免疫反应,影响其它微量元素在体内代射。因此本研究采用中药与硒相结合来预防和治疗大鼠肝纤维化。 细胞因子(cytokine)是于20世纪50年代在研究感染性疾病中发现的,最早报道的细胞因子是巨噬细胞游走抑制因子(MIF),几乎同时又发现了干扰素。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一种具有多样生物学作用的蛋白质分子,实验表明HGF是肝细胞生长和DNA合成的最强大的刺激剂,在肝切除和各种肝病后血循环中HGF明显升高,并在肝组织中可见HGF mRNA的高表达。资料显示,在肝癌模型中,HGF mRNA的肝硬变前期表达阳性率最高,肝硬变期死亡肝细胞出现变形、坏死,肝细胞损伤严重,HGF mRNA高表达说明这一时期将有大量的HGF产生,HGF的产生促进了肝脏再生与修复。许多细胞因子都参与肝再生的调控,但多缺乏特异性,而来源于幼年动物肝组织中的一种热稳定的肝细胞生长刺激因子却有特异性, 中文摘要 称之为肝脏刺激物mrpatic stimulator substance,HSS人许多学者 分别从大鼠、乳猪、新生小牛及人胚胎的肝组织中都分离到这种广泛 存在于多种哺乳动物肝组织中的刺激生长因子,而且张宜俊等结合人 胎肝细胞悬液治疗肝炎的成功经验,率先将来源于乳猪肝组织中的刺 激因子(promote hapatatocyte growth factor,pHGF)应用于临床重型 病毒性肝炎的治疗并取得较满意的疗效,从而进一步推动了这类因子 的研究。1994年Hagira等从新生大鼠肝组织中克隆到类似于HSS的 刺激因子,称之为肝再生增强因子(augnente of liver regeneration, ALR)。 本研究用中药和硒相结合对大鼠肝纤维化作预防和治疗,并从整 体、组织病理和分子水平较为系统地观察了中药和硒对慢性肝纤维化 大鼠的发病情况、肝功能指标、肝纤维化指标和肝组织病理损伤的预 防和治疗作用,并用半定量RTFCR方法检测肝组织中HGF及ALR 的基因表达变化,目的是为临床合理补硒提供参考依据,以及进一步 探讨中药和硒对肝纤维化的预防和治疗作用及其机理,为临床提供筛 选富硒中药以及中药加服微量元素硒的疗法提供理论依据。 实验结果如下: l 中药和硒对大鼠慢性肝纤维化的预防作用及其机理研究 本研究旨在探讨中药和硒对大鼠慢性肝纤维化的预防作用及其机 理。实验分为6组(每组10只,雌雄各半人A组为正常对照组,B 组为肝纤维化模型组,C组为硒预防组,D组为中药预防组,E组为中 药+硒预防组,下组为标准对照组(凯西莱预防组人采用CCI。复合因 素的方法建立肝纤维化模型旧组人即实验开始第一天皮下注射40% CCI。植物油溶液 0.sml/100g体重,以后每隔 4天皮下注射 40%CCI。植 物油溶液 0.3ml/100g体重,实验开始的同时以 79.5%单纯玉米粉加 20% 猪油、0.5%胆固醇制成的混合饲料喂饲。另以30%乙醇为饮料饲养动 物(每天灌胃 30%食用酒精 0.sml门 体重人 A组,给予与 B组同剂 量植物油皮下注射,同时用蒸馏水灌胃 0.sml八 体重,正常饲料喂 养;C、D、E、F组在给予B组处理的同时,每组分别以硒溶液臼V g/il)灌胃 0.sml/100g体重,中药(含生药 2.22g/ffil)灌胃 0.sml八 体重,加硒中药 0.sml/100g体重(含硒 3 u iml*凯西来灌胃 0.smU00g 2 中文摘要 体重(含凯西来 0石g/il);实验第 57天,即末次给药 24 ’J’时后,所有 动物断头取血和肝脏标本,作有关肝功能指标、肝纤维化指标、病理 学检查及分于生物学研究。 利用BECKMAN全自动生化分析仪检测肝功能指标:丙氨酸氨基 转换酶(ALT人大门冬氨酸氨基转换酶(AST人白蛋白/球蛋白(A/G) 的变化;放射免疫分析法检测其肝纤维化指标:透明质酸(HA人 Ill 型前胶原 0 入 层粘蛋白(LN)和脯氨酸肽酶①LD)的变化; 进行肝组织病理切片,光镜下观察肝组织损伤的情况;利用RTPCR 检测HGF及ALR


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