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《河北医科大学》 2003年
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血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在置环出血子宫内膜中的表达及意义

范秀华  
【摘要】: 目的:随着IUD的发展与完善提高了育龄妇女对其的接受性,拓宽了IUD应用范围。但子宫异常出血依然是其最常见的副作用,表现为月经过多、经期延长或经前经后点滴出血。其发生机理是多因素的,终归结于子宫内膜血管生成、修复的异常,而血管的生成又受血管生成因子的调节。目前备受关注的两种促血管生成因子是VEGF和bFGF,尽管它们促进血管生成的机制不同,但都受雌孕激素的调节,在子宫内膜血管生成修复过程中互相配合,协同作用。本研究的目的就是利用宫腔镜技术,在直视定位下获取子宫内膜,采用免疫组化和计算机图像分析技术,探讨VEGF、bFGF在上环出血子宫内膜组织中的表达及意义,从血管形成机制方面找到IUD出血机理的新思路,为临床治疗提供理论依据。 方法:资料来源:选自2001年9月至2002年12月在河北医科大学第二医院妇科门诊就诊患者。Ⅰ组:30例,为置IUD后有异常子宫出血妇女,其中金属“O”环15例,“T”型环15例。Ⅱ组:16例,为置IUD后月经周期正常的妇女,其中金属“O”环8例,“T”型环8例。Ⅲ组:15例,为无环月经周期正常的妇女。各组在年龄、上环时间、既往史方面均有可比性。月经周期正 WP=4 常者选择在月经干净3-7天检查,异常出血者则选择于增生期获取子宫内膜,并经苏木素—伊红(hematoxylin-eosion, HE)染色确定。入选对象为健康生育期妇女,全身检查和血化验正常,检查前3个月内未用过激素类药物。在宫腔镜定位下获取研究子宫内膜后,立即投入10%中性福尔马林液及时固定。常规脱水、透明、浸蜡及包埋,进行蜡块制备。所制成的标本行HE染色,进行组织形态观察,确认为增生期子宫内膜,排除子宫内膜息肉、粘膜下子宫肌瘤等疾病,进行免疫组化染色。应用免疫组织化学SP方法检测各组子宫内膜VEGF和bFGF蛋白的表达及分布情况。具体步骤如下:免疫组化染色步骤:(1)石蜡切片脱蜡至水后,3%双氧水孵育10分钟,灭活内源性过氧化酶。(2)采用电炉煮沸抗原修复。VEGF、 bFGF分别修复20分钟,15分钟。(3)正常山羊血清封闭,室温孵育10分钟。(4)滴加一抗,4℃冰箱过夜。(5)滴加生物素标记二抗,37℃孵育30分钟。(6)滴加辣根酶标记链酶卵白素,37℃孵育30分钟(7)DAB显色:VEGF显色3分钟,bFGF显色2分钟,自来水终止显色,苏木素复染5分钟,盐酸酒精分化20秒,酒精脱水,二甲苯透明,树胶封片后镜下观察。 结果:㈠宫腔镜下观察:Ⅰ组子宫内膜可见明显充血及增粗的血管和点状、斑状出血灶,大量出血者可见血块、血丝悬浮于子宫腔内。金属“O”环形成环状压迹,出血灶多集中在环形区域内。“T”型环横臂紧贴子宫壁, WP=5 其附近子宫内膜表面血管扩张,点状出血严重。Ⅱ组可见IUD位置正常,子宫内膜无充血及出血点。金属单环呈扁圆形,表面光亮,螺纹清晰可见。“T”型环铜丝盘旋完整,该部分呈黄色而有光泽,其横臂两端位于输卵管开口处。Ⅲ组子宫内膜呈淡红色,表面光滑,膨宫时内膜尤如平滑的天鹅绒在漂动。㈡组织学观察:子宫内膜HE染色显示Ⅰ组子宫内膜较Ⅱ组子宫内膜局部表面上皮脱落现象严重,在表面上皮下方有大量出血、坏死。IUD压迫区炎症反应重,可见上皮较薄,有溃疡、中性粒细胞及巨噬细胞,腺体及间质萎缩普遍可见。Ⅲ组呈典型的增殖期子宫内膜。㈢免疫组织化学观察:1.VEGF蛋白主要位于细胞浆,在腺上皮呈灶性分布,间质呈较散在分布。血管内皮细胞染色阳性。(1)腺上皮表达 Ⅰ组子宫内膜VEGF表达为弱阳性,Ⅱ组和Ⅲ组子宫内膜VEGF表达均为阳性。Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组间子宫内膜VEGF表达差异有显著性(P0.05)。Ⅱ组和Ⅲ组间子宫内膜VEGF表达无显著性差异(P0.05)。金属“O”环和“T”型环在各组之间无显著性差异(P0.05)。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组子宫内膜阳性面积比分别为3.99%±0.15%,45.27%±0.43 %,45.36%±0.56%。(2)间质部表达 Ⅰ组、Ⅱ组及Ⅲ组子宫内膜在间质部均为散在弱表达或不表达,无统计学意义。2. bFGF蛋白染色定位于细胞浆。(1)腺上皮表达 Ⅰ组子宫内膜bFGF表达为弱阳性,Ⅱ组和Ⅲ组子宫内膜bFGF表达均为阳性。Ⅰ组和Ⅱ组、Ⅲ组间子宫内膜腺上皮表达差异有显著性(P0.05)。Ⅱ组 WP=6 和Ⅲ组间子宫内膜bFGF表达无显著性差异(P0.05)。金属“O”环和“T”型环在各组之间无显著性差异(P0.05)。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组子宫内膜阳性面积比分别为3.68%±0.32%,47.39%±0.90%,47.26%±0.61%。(2)间质部表达 Ⅰ组子宫内膜bFGF在间质部表达为弱阳性,Ⅱ组和Ⅲ组间子宫内膜bFGF在间质部表达均为阳性表达,Ⅰ组和Ⅱ组、Ⅲ组间子宫内膜间质bFGF表达差异有显著性(P0.05)。金属“O”环和“T”型环在各组之间无显著性差异(P0.05)。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组子宫内膜阳性面积比分别为 4.50%±0.26%,53.88%±1.07%,54.89%±1.55%。 结论:1.本研究表明上环出血的子宫内膜腺上皮VEGF、bFGF表达减弱,与对照组比较差异有显著性(P0.05)。说明VEGF、bFGF表达下降,影响受损伤的子宫内膜、血管的再生修复能力,从而引起IUD出血。2.本研究中金属圆环与含铜T 型环之间在IUD出血子宫内膜中的表达无差异性,可能与样本量较少有关。3.利用宫腔镜
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R711.7

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