收藏本站
《河北医科大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

多发性骨髓瘤中血管新生及血管内皮细胞生长因子表达和三氧化二砷的抗血管新生作用

孟建波  
【摘要】:目的:血管新生(angiogenesis)在肿瘤生长、侵袭及转移中的重要地位与抗血管新生治疗的意义在肿瘤学领域已经得到了确认,血管新生是指在已经存在的血管网的基础上以出芽的方式形成新的微血管的过程。生理条件下发生的血管新生是一严格受控的过程,而病理性的血管新生是一个失控无序的过程,这种持续的无规则血管新生促进了疾病的发展。现代理论认为肿瘤的生长分为无血管期和血管期,在无血管期由于肿瘤主要依赖周围组织的弥散作用来获取营养物质和排泄代谢产物,所以明显地限制了肿瘤的继续生长,肿瘤的直径不超过1~2mm;而在血管期肿瘤内出现新生的毛细血管并获得了进一步生长的能力,从而肿瘤迅速生长并发生转移。在实体肿瘤已证实肿瘤的生长、浸润、转移和预后与肿瘤的血管新生密切相关。血管新生是由刺激因子和抑制因子共同调控的,血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor ,VEGF)是目前已知作用最强、特异性最高的血管新生刺激因子,VEGF与其受体特异性结合后,可以促进内皮细胞的增殖、提高血管通透性以及改变细胞外基质使其更易于血管的生长。VEGF还可以通过瘤细胞的旁分泌、自分泌途径直接促进瘤细胞的生长。多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是一种浆细胞恶性增生性疾病,经传统的治疗不能完全清除骨髓瘤细胞,大多数患者在缓解后短期内复发,因此探讨MM的发病机制及寻找新的安全有效的治疗方法是十分必要的。近年来,三氧化二砷(arsenic trioxide ,As2O3)被成功用于治疗常规化疗或维甲酸治疗后复发的急性早幼粒细胞白血病以后,砷剂成为国际血液、肿瘤学界研究的热点,研究发现As2O3对急性早幼粒细胞白血病以外的多种恶性血液病和实体瘤均有效。本研究的目的在于探讨MM中是否存在病理性血管新生以及是否存在VEGF的过度表达,探讨血管新生和VEGF在MM中的临床意义,同时探讨As2O3治疗MM的具体作用机制,希望为MM寻找一种安全有效的治疗方法。 方法:1. 临床资料:收集 1999年1月~2002年11月于河北医科大 WP=5 学第三医院初诊的42例MM患者,诊断、分期及疗效判断均符合《血液病诊断及疗效标准》, 化疗给予VAD+干扰素方案,于化疗后第三周骨髓抑制恢复后复查。采集血清标本:MM患者分别在治疗前后留取标本;对照组18例,来自职工健康查体。采集骨髓标本:MM患者采集治疗前后髂后上嵴骨髓穿刺及活检组织标本;收集本院骨科、心外科手术切除的髂骨及肋骨10例标本作为对照。MM组和对照组在年龄、性别组成方面无显著性差异,对照组除外血管新生异常的个体。 2. 微血管显示及计数方法:采用Ⅷ-R-Ag免疫组织化学染色显示微血管,凡是染色成单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为一个血管来计数,管腔大于8个红细胞,带较厚肌层的血管不计入微血管。每张切片于100倍光镜下选择3个微血管最多的区域作为“热点区”,于400倍光镜下(视野范围0.2376㎜2)计数每个“热点区”的微血管数,取其均值来表示微血管密度。 3. VEGF 酶联免疫吸附试验检测方法:采用双抗体夹心ELISA法,操作按产品说明书进行。 4. VEGFmRNA原位杂交检测方法:原位杂交操作按产品说明书进行,采用病理图像分析系统对图像进行分析,VEGFmRNA转录水平用积分光密度值及平均光密度值表示。 5. 骨髓单个核细胞的分离和培养:无菌条件下于髂后上嵴抽取骨髓液2ml,肝素抗凝,采用Ficol淋巴细胞分离液分离。将分离的单个核细胞以2×106/ml密度接种于24孔培养板,培养于含10%的灭活FBS的完全RPMI 1640培养液中,每孔2.0ml,每例接种6个复孔。在37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度为100%的培养箱中培养72h后分别离心收集上清,-20℃冻存。 6. 细胞凋亡的流式细胞术检测: 定期收集的细胞,经洗涤、固定、破膜及碘化吡啶染色,流式细胞仪检测, Multicycle DNA Content and Cell Cycle Analysis Software软件获取并分析数据,分析G1、G2、S期及亚G1期细胞(凋亡细胞)百分比。 7. bcl-2表达的流式细胞术测定:采用FITC标记的仓鼠抗人bcl-2单抗,采用直接免疫荧光流式细胞检测。操作严格按照产品说明书进行。应用流式细胞仪SystemⅡ和Exto-analysis 软件获取并分析数据,以阴性对 WP=6 照设阳性界值,荧光强度大于此界值者为阳性细胞,bcl-2蛋白表达水平以阳性细胞百分数表示。 8. RPMI8226、U266细胞系培养:以2×105/ml密度培养于RPMI 1640培养液中,置37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度为100%培养箱中培养,每2~3天传代一次,试验时用对数生长期细胞。 9. 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的分离与培养:脐静脉内皮细胞来自胶原酶消化后的婴儿脐带,以2×105/ml密度培养于含体积分数为20%的灭活胎牛血清、5ng/ml rhVEGF、5ng/ml rhbFGF的M199培养液中,置37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度为100%培养箱中培养,每2~3天换液一次。试验时用传至第3代的生长良好的内皮细胞。 10. VEGF和As2O3对RPMI8226、U266细胞增殖、细胞活力、细胞凋亡、bcl-2蛋白表达及VEGF合成的影响:将对数生长期细胞悬液以2×105/ml密度接种于24孔培养板,每孔2.0ml,分别加入终浓度为10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml的VEGF 和1μmol/L 、2
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R733.3

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘蓓;马戈甲;宋保强;;靶向人VEGF165的SiRNA慢病毒的构建和鉴定[J];中国美容医学;2011年07期
2 刘建民;孙鸿;黄良文;陈为;朱文瑞;;HIF-1和VEGF蛋白在胶质瘤中的表达及意义[J];四川医学;2011年08期
3 黄新次;;血清VEGF和MMP-9含量动态变化监测在急性脑梗死患者中的临床意义及研究[J];现代预防医学;2011年18期
4 叶国庆;郑敏;;VEGF在乳腺癌、癌旁组织中表达及意义[J];中国高等医学教育;2011年06期
5 郑琦;郑根主;许燕红;;VEGF和P53在翼状胬肉中的表达[J];河北医药;2011年14期
6 黄志勤;李洪亮;孙立波;程齐来;;齐墩果酸抗大鼠移植性肝癌作用的研究[J];安徽农业科学;2011年18期
7 古金成;王少柯;;加服自拟化浊益肾方治疗早期糖尿病肾病的临床观察[J];广西中医药;2011年03期
8 王晓露;解方为;陈曦;张霞;欧阳学农;;丹参酮IIA对大鼠移植性肝癌的抑制作用[J];现代生物医学进展;2011年11期
9 马真;卓宋明;周路球;李娜;叶春幸;;血管内皮功能异常与慢性阻塞性肺疾病[J];现代预防医学;2011年14期
10 张勇;齐振华;李乐赛;符晓华;彭小宁;张娜;于才红;;乳香提取物对HL-60细胞株VEGF分泌及其Flt-1受体表达的影响[J];湖南师范大学学报(医学版);2011年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵忠芳;吕仁荣;霍然;傅洪滨;徐广琪;;普萘洛尔治疗增生期血管瘤患儿血清中VEGF、MMP-9的变化[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
2 徐勇;黄仁魏;王东宁;林桂真;林东军;何易;李旭东;林曲;;急性白血病血管内皮生长因子(VEGF)和受体的表达及其临床意义研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
3 李飞;李树清;;VEGF表达在局灶性脑缺血后亚低温脑保护中的作用研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
4 赵忠芳;吕仁荣;霍然;傅洪滨;徐广琪;;普萘洛尔治疗增生期血管瘤患儿血清中VEGF、MMP-9的变化[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
5 杜娟;王景美;钱晓萍;刘宝瑞;;COX-2和VEGF在胃癌中的表达和意义[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
6 田翀;彭晓琳;张嫦慧;唐玉涵;任玮叶;孙秀发;郝丽萍;应晨江;;VEGF在白藜芦醇缓解内皮细胞高通透性的作用[A];营养与慢性病——中国营养学会第七届理事会青年工作委员会第一次学术交流会议论文集[C];2010年
7 陈西华;;小鼠月经模型中Hif-1α对VEGF调节作用的研究[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
8 梁国刚;;TGF-β1和VEGF在大肠癌中的表达及临床意义[A];第八届全国中西医结合普通外科临床与基础学术会议暨全国中西医结合外科危重病学习班论文汇编[C];2003年
9 廖圣恺;;5-LOX、CD-34、VEGF在涎腺黏液表皮样癌中的表达及意义[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年
10 孙大军;杜建时;王征;臧广生;刘卓;;丹参与VEGF联合应用在动物肢体缺血模型中的实验研究[A];中国中西医结合学会周围血管疾病专业委员会第六届换届暨学术交流会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 由香港麦迪信医学出版有限公司供稿;VEGF“陷阱”有效抑制肿瘤[N];医药经济报;2002年
2 张中桥;VEGF对乳腺癌的生长起重要作用[N];中国医药报;2002年
3 秦叔逵;三氧化二砷抗肿瘤机理新研究[N];中国医药报;2004年
4 新华社;VEGF有望成为预防动脉梗塞新药[N];中国医药报;2005年
5 陶春祥;三氧化二砷的毒性[N];中国医药报;2002年
6 王婷婷;肿瘤能否“饿死”[N];科技日报;2004年
7 文执 编译;抗癌新靶标 肿瘤内的血管[N];科技日报;2002年
8 王天堂;国产防腐新材料亮相[N];中国化工报;2002年
9 温明;追踪血液病最新研究进展[N];中国医药报;2004年
10 徐峰;肿瘤与血管生成息息相关[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张国鹏;两种核素报告基因系统用于监测治疗基因VEGF165表达的基础研究[D];华中科技大学;2010年
2 王钦文;干扰CXCR4对前列腺癌细胞VEGF和MMP-9表达及转移的影响实验研究[D];第三军医大学;2011年
3 费嘉;VEGF mRNA反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响[D];暨南大学;2003年
4 赵薇;细胞因子GM-CSF、VEGF对大鼠内皮祖细胞功能活性的影响及其信号转导途径的体外研究[D];中国医科大学;2008年
5 董宏伟;大肠癌形成过程中肿瘤血管生成与细胞凋亡的变化及VEGF和p53表达的意义[D];中国医科大学;2002年
6 彭湃;VEGF在慢性创面愈合中的作用及机理研究[D];第一军医大学;2004年
7 张颖娟;VEGF抑制TGF-β1诱导肾小管上皮—间充质转化作用中Notch信号系统的变化[D];北京协和医学院;2009年
8 范海涛;Survivin与VEGF的检测及二者反义寡核苷酸对膀胱癌的治疗研究[D];吉林大学;2010年
9 杨秀鹏;Tryptase诱导AML骨髓基质细胞高表达VEGF及机制的研究[D];中国医科大学;2010年
10 叶琇锦;成人急性白血病患者骨髓血管新生及相关机理的实验研究和临床意义[D];浙江大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙洁;VEGF表达及微血管密度与三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌临床病理特征的关系[D];广西医科大学;2010年
2 齐振平;非小细胞肺癌中VEGF及其受体Flt-1的表达及临床意义[D];大连医科大学;2010年
3 段瑞华;异黄酮孕期使用对子代小鼠乳腺肿瘤中VEGF表达影响的研究[D];河南科技大学;2010年
4 韩喆;VEGF在他汀类药物干预易损斑块形成的表达[D];河北大学;2010年
5 刘小兵;脑胶质瘤VEGF,bFGF,IGFBP-2在血浆和脑脊液的定量分析及意义[D];河北医科大学;2010年
6 张志学;肺腺癌中血管内皮生长因子及其受体的表达与血管生成及预后的关系[D];青岛大学;2001年
7 李磊;VEGF,MMP-2在胃癌中的表达及其与浸润和转移的关系[D];郑州大学;2002年
8 孙丹;Snail、VEGF、MMP-9在肝细胞肝癌中的表达及临床意义[D];山东大学;2010年
9 栾东风;锌对高糖条件下视网膜müller细胞分泌VEGF的影响[D];吉林大学;2010年
10 郭晓斌;在细胞三维立体培养模型中观察VEGF对H460细胞MMP-2表达的影响[D];兰州大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026