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《河北医科大学》 2004年
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胎膜早破孕妇血清IL-6、IL-8的含量与胎膜基质金属蛋白酶的相关性研究

王伟明  
【摘要】:目的:胎膜早破(Premature rupture of membranes PROM)是产科的一常见并发症,严重困扰母儿健康。近年来发病率有逐渐增加的趋势。因此,寻找PROM的病因,降低围产儿的发病率和死亡率成为当今产科领域的研究热点之一。本研究旨在从感染角度探讨酶和细胞因子对PROM的影响。利用免疫组化方法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases MMP-9)及其抑制剂-1(tissue inhibitor matrix metalloproteinases TIMP-1)在胎膜组织中的表达。利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测孕妇血清中IL-6、IL-8的水平,并探讨MMP-9与IL-6、IL-8是否有相关性,从而为寻找PROM的病因提供新思路,为临床治疗提供理论依据。 方法:资料来源:选取2002.8月-2002.12月在河北医科大学第二医院产科病房住院分娩孕妇共58例,分为三组:Ⅰ组:21例,为足月PROM患者,平均年龄27±2岁,平均孕周为38±1.5周,其中Ⅰ1组8例,为合并绒毛膜羊膜炎;Ⅰ2组13例,为无绒毛膜羊膜炎。Ⅱ组:17例,为未足月PROM患者,平均年龄28±1岁,平均孕周为33±2.3周,其中Ⅱ1组7例,为合并绒毛膜羊膜炎;Ⅱ2组10例,为无绒毛膜羊膜炎。Ⅲ组:20例,均为正常足月分娩患者,平均年龄28±2岁,平均孕周39±1.2周。所有受试对象均为临产前要求剖宫产。所有孕妇 WP=4 均为第一胎、单胎、头位、无头盆不称、羊水过多等,无其他妊娠合并症及并发症,无内外科疾病。所有孕妇年龄、孕产次、营养状况、社会地位、经济收入等均相似,具有可比性。所有受试对象均于临产前无宫缩时抽取肘静脉血3ml,分离血清,-70℃冰箱保存集中待检。取胎膜破口处的胎膜2cm×2cm×0.5cm大小,生理盐水洗净表面血迹,立即用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋。 酶联免疫吸附实验检测血清中IL-6、IL-8的水平,步骤如下:(1)将标准品分别稀释成1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/ml. (2)将已平衡至室温的密封袋中取出抗体包被板条。(3)除空白孔外,分别将标本和不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔,37℃孵箱孵育60min。(4)洗板4次。(5)除空白孔外,加生物素化抗体工作液100ul/孔,用封板胶纸封住反应孔,37℃孵箱孵育60min。(6)洗板4次。(7)除空白孔外,加酶结合工作液100ul/孔,用封板胶纸封住反应孔,37℃孵箱孵育30min。(8)洗板4次。(9)加入显色剂100ul/孔,37℃,避光,孵箱孵育12min。(10)加入终止液100ul/孔,混合后用酶标光度仪在波长为450nm处测每孔的吸光度(A)值。 各标本石蜡切片行HE染色,在光镜下观察胎膜组织的结构变化及有无绒毛膜羊膜炎。利用免疫组化SP法检测各组胎膜MMP-9和TIMP-1的表达情况。步骤如下:(1)石蜡切片脱蜡至水。(2)3%H2O2室温孵育10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性。(3)蒸馏水冲洗5分钟,0.01PBS冲洗, 5分钟×3次。(4)微波抗原修复:切片置枸橼酸缓冲液中加热使液体 WP=5 温度保持在92-98℃,修复15分钟。(5)室温自然冷却25℃以下,0.01PBS冲洗,5分钟×3次。(6)正常山羊血清封闭,室温孵育10分钟。倾去,勿洗。滴加一抗,4℃冰箱过夜。(7)0.01PBS冲洗,5分钟×3次。(8)滴加生物素标记二抗,37℃孵育30分钟。(9)滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素,37℃孵育30分钟。(10)0.01PBS冲洗,5分钟×3次。(11)DAB显色:MMP-9显色3分钟,TIMP-1显色2分钟。(12)自来水终止显色,并充分冲洗,苏木素复染5分钟,盐酸酒精分化20秒,酒精脱水,二甲苯透明,树胶封片后镜下观察。 结果:(一)组织学观察:通过观察HE染色的胎膜早破组织切片结果如下:所有PROM胎膜标本,感染者占40.54%,未感染者占59.46%,tPROM患者中胎膜感染占38.09%,其中中重度绒毛膜羊膜炎仅1例占4.7%,轻度绒毛膜羊膜炎7例占33.3%。pPROM患者中胎膜感染占41.18%,其中中重度绒毛膜羊膜炎2例占11.8%,轻度绒毛膜羊膜炎5例占29.4%。感染的胎膜组织中炎细胞浸润以中性粒细胞为主,轻度绒毛膜羊膜炎者,炎细胞较少,分散分布于绒毛膜的假基底膜下和滋养层细胞中间,而在羊膜层中未见明显炎细胞浸润。滋养层除细胞排列略显松散外,绒毛膜其余结构及羊膜均未见明显异常。中重度绒毛膜羊膜炎者,炎细胞数量较多,呈局灶性或带状密集分布于绒毛膜的滋养细胞层靠近假基底膜处,或穿透假基底膜分散分布于网状层中,滋养细胞排列紊乱,部分细胞变性以细胞水肿为主,还可见散在凋亡细胞及灶性坏死。绒毛膜网状层及羊膜海绵层可见不等程度的增厚,其中Hofbauer细胞略增多,可能与炎性浸润有关。在羊膜层,阳性细胞主要浸润纤维 WP=6 母细胞层的外层边缘,除海绵层明显变薄外,羊膜其余各层在光镜下无明显改变。无炎细胞浸润的PROM胎膜标本中,可见部分滋养细胞的退形性变及散在的凋亡细胞,可能与某些病毒感染有关。(二)免疫组织化学观察:1.MMP-9主要表达于淋巴细胞、中性粒细胞、浆细胞等炎性细胞的胞浆中,呈明显的棕色颗粒状,在纤维母细胞中呈弱表达。在胎膜的固有细胞如羊膜上皮细胞、滋养层细胞、Hefbauer细胞等中几乎无表达。(1) 足月和未足月PROM与正常对照相比,均有统计学差
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R714.4

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