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回收式自体输血和血液保存对红细胞超微形态和免疫功能的影响

王丽华  
【摘要】:目 的:通过观察红细胞超微形态和检测红细胞C3b受体花环形成率(RBC-C3bRR)、红细胞免疫复合物花环形成率(RBC-ICR)、表达CD35阳性的红细胞百分率、红细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,探讨术中回收式自体输血(intraoperative autotransfusion,IAT)和血液保存对红细胞超微形态和免疫功能的影响。 方 法:随机选取预计术中出血量在600mL以上的手术患者50例,年龄(25~69)岁,体重(35~82)kg,ASA I-III级,肾功能正常,无血液疾病、自身免疫性疾病及内分泌疾病,近期未进行过放疗、化疗及应用免疫抑制剂。选用静吸复合全麻,以芬太尼、依托咪酯和琥珀胆碱快速诱导气管插管,术中用芬太尼、异丙酚、维库溴铵和异氟醚维持麻醉。术中出血采用ZITI-2000型血液回收机(北京京精医疗有限公司)进行IAT。抽取50例IAT回收浓缩红细胞各1mL为I组;抽取50例患者术野血各2mL,离心后取红细胞为II组;抽取50例用枸橼酸-磷酸-葡萄糖-腺嘌呤(CPDA)保养液保存两周的库存浓缩红细胞各1mL为III组。 样本经2.5%戊二醛固定、双蒸水清洗、乙醇梯度脱水、叔丁醇干燥、离子金属镀膜,用日立HITACHI S-3500型扫描电子显微镜观察红细胞,随机选取5个细胞疏密程度适中的放大1000-3000倍的视野存储图像。统计各视野双凹圆盘 WP=4 形红细胞(discocyte)、棘形红细胞(echinocyte)和口形红细胞(stomatocyte)的百分率。 将补体致敏酵母菌和补体未致敏酵母菌试剂按红细胞计数法配成1×108/mL备用。三组红细胞按红细胞计数法配成1.25×107/mL备用。测定方法:取两支试管,每管加红细胞悬液50μL,第一管加补体致敏酵母菌50μL,第二管加补体未致敏酵母菌50μL,混匀,37℃水浴30min,取出加0.25%戊二醛50μL固定,水平涂片瑞氏染色,在显微镜下计数200个红细胞,一个红细胞结合两个或以上酵母菌为一朵花环,计算百分率,第一管为RBC-C3b受体花环形成率(RBC-C3bRR,%),第二管为RBC-免疫复合物花环形成率(RBC-ICR,%)。 取流式细胞仪专用管两支,第一管加入IgG1-FITC/IgG2-PE鼠抗人单克隆抗体5μL,第二管加入CD35-FITC单克隆抗体5μL,两管分别加入红细胞悬液5μL,前者为阴性对照。两管充分摇匀,置4℃冰箱15min,再加入生理盐水0.5mL,混匀后上流式细胞仪,计数50000个红细胞,测定表达CD35阳性的红细胞百分率。 取若干放射免疫测定专用试管进行标号,包括NSB管、S0-S5管及待测样品管。测定方法:第一步:NSB管加入S0100μL,S0-S5管分别加入S0-S5各100μL,样品管加待测样品100μL;第二步:各管分别加入125I-SOD 100μL;第三步:NSB管加入蒸馏水100μL,S0-S5管和样品管加入兔抗SOD血清各100μL,混匀后4℃过夜;第四步:各管加入驴抗兔免疫分离剂500μL, 摇匀, 室温放置15min后,以3500rpm·min-1离心5min,吸弃上清液,用γ放射免疫计数仪测定各管的放射性计数,由电脑自动处理得出红细胞SOD WP=5 含量,以ng·mL-1表示。 所有数据以 ±s表示,用SPSS10.0进行统计学处理,I组与II组比较采用配对t-检验;I组与III组、II组与III组比较采用两样本t-检验,各指标用Pearson Correlation进行相关分析。P0.05为差异有显著性意义, P0.01为差异有非常显著性意义。 结 果:1 红细胞超微形态的观察:双凹圆盘形红细胞率、棘形红细胞率和口形红细胞率I组分别为50.62±7.69%、29.07±5.25%和8.52±1.04%,II组分别为59.58±7.82%、24.98±6.73%和7.09±1.30%。双凹圆盘形红细胞率I组低于II组,棘形红细胞率和口形红细胞率I组高于II组,但差异均无显著性意义(P0.05)。III组的双凹圆盘形红细胞率和棘形红细胞率分别为21.48±3.79%和59.53±7.51%,与其它两组相比,差异均有非常显著性意义(P0.01)。口形红细胞率III组与其它两组相比差异无显著性意义(P.05)。 2 红细胞免疫粘附功能:I组、II组、III组RBC-C3bRR分别为11.68±3.45%、14.80±3.76%、9.38±1.90%。I组与III组RBC-C3bRR均明显低于II组,差异有非常显著性意义(P0.01)。I组RBC-C3bRR明显高于III组,差异有显著性意义(P0.05)。三组RBC-ICR差异无显著性意义(P.05)。 3 表达CD35阳性的红细胞百分率:I组和III组分别为6.31±2.95%和3.74±1.89%,与II组(9.73±3.91%)相比明显降低,差异有非常显著性意义(P0.01),但I组明显高于III组,差异有非常显著性意义(P0.01)。 WP=6 4 红细胞SOD含量:I组和III组分别为268.42±22.62 ng·mL-1 和205.44±17.84 ng·mL-1,与II组(350.65±26.24 ng· mL-1)相比明显减少,差异有显著性意义(P0.05和 P0.01)。III组明显低于I组,差异有显著性意义(P0.05)。 5 相关分析:双凹圆盘形红细胞率与RBC-C3bRR、表达CD35阳性的红细胞百分率及SOD含量均成正相关,但均无显著性意义(P0.05)。红细胞SOD含量与表达CD35阳性的红细胞百分率成正相关,有显著性意义(r=0.248,P=0.018)。 结 论:洗涤式自体血液回收对红细胞免疫功能有一定程度的损害,对回收红细胞超微形态的影响较轻,但仍有一定的临床意义,血液回收技术应进一步提高改进。回收红细胞的超微形态和免疫?


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