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《河北医科大学》 2005年
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足叶已甙与顺铂合用对卵巢癌细胞杀伤作用的实验研究

马丽丽  
【摘要】:卵巢肿瘤是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一。因为缺乏有效的早期诊断方法,诊断时多为晚期。其死亡率居妇科恶性肿瘤首位,5 年生存率徘徊于30%。随着近代宫颈癌及子宫内膜癌诊治进展,卵巢癌已经成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤。卵巢恶性肿瘤以上皮性卵巢癌为最多见,占卵巢恶性肿瘤的80%-90%。因卵巢深居盆腔,给卵巢癌早期诊断带来困难,故卵巢癌患者初次就诊时,70%-80%已届晚期,很早就会出现广泛转移。对临床医生来说,卵巢癌的诊治一直是很棘手的问题。目前,对卵巢癌患者手术仍是最重要的手段,但是多种方法的综合应用对提高患者的生存率和生活质量必不可少。其中,辅助的多疗程化疗尤其重要,在晚期卵巢癌治疗中具有极为重要的意义。由于卵巢癌发现时多为晚期,手术及化疗后的复发率很高,加上卵巢癌化疗过程中易产生耐药,因此寻找更有效的化疗方案是提高卵巢癌疗效的重要途径。目前多选用顺铂为一线药物,同时由二线化疗药物与之配伍,其中拓扑异构酶II(TopoII)抑制剂更为常用。两者通过不同的作用机制抑制肿瘤细胞的繁殖,其中,顺铂可与DNA 形成链内链间的交叉连结,防止DNA复制,为细胞周期非特异性药物;足叶乙甙为TopoII 毒性抑制剂,它通过稳定Topo-II 复合体,以DNA 断裂为明显特征,主要作用于G2/M 期,与顺铂无交叉耐药。因此,从生化机 制的角度说明足叶乙甙和顺铂有一定协同作用。 目的:本文旨在通过MTT 法对比性研究顺铂(CDDP)的单药应用及足叶乙甙(VP-16)与CDDP 联合化疗对人卵巢癌SKOV3 细胞株的抑制作用,同时用免疫细胞化学法对SKOV3 细胞进行TopoII 表达的测定,联系两药对TopoIIα和TopoIIβ的表达的影响,探讨卵巢癌化疗药物的合理组配,以筛选有效的抗肿瘤药物,提高卵巢癌患者的生存率。 方法: 1 细胞培养SKOV_3 细胞以RPMI-1640 培养基培养,内含10%新生牛血清、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。置37℃、5% CO_2 环境下培养。 2 MTT 法检测药物对卵巢癌细胞抑制作用 2.1 药物浓度选择、实验分组 参考药物的血浆峰浓度(PSC),其中CDDP 为3μg/ml,VP-16 为5μg/ml,进行实验分组。实验组:①CDDP 组:分别用CDDP 的1/10PSC 浓度,PSC 浓度,10×PSC 浓度作用于细胞。②VP-16+CDDP 组:用VP-16 的PSC 浓度分别与CDDP 的上述三种浓度合用。同时设空白对照组。 2.2 MTT 法检测及结果分析 取对数生长期细胞,经0.04%EDTA 消化后,加入培养液吹打均匀,以1×10~5/ml 细胞浓度接种于96 孔培养板,每孔加入100ul 细胞悬液。24h 后加入经无血清培养液稀释的药物10ul,不同药物及浓度均为3 复孔。药物与细胞共培养至0h, 8h,16h,24h,每孔加入5mg/ml MTT 20ul。继续孵育4 小时后,离心吸去上清,加入200ul/孔DMSO 终止反应。用酶标仪测490nm 波长吸光值(A 值)。根据公式:(对
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R737.31

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