RNA干扰细胞周期检测点激酶CHK1和CHK2表达对食管癌细胞照射后细胞周期阻滞的消除作用

【摘要】：我国是食管癌高发国家,发病人数约占全世界50%以上。临床就诊的食管癌病人多数为中晚期,需要接受放射治疗(放疗),放疗成为中晚期食管癌主要治疗方法之一。但食管鳞癌属于中度放射敏感肿瘤,单纯放疗后5年生存率较低,但肿瘤局部未控和复发率很高;如何提高食管癌细胞的放射敏感性,提高肿瘤局部控制率、减少复发而提高疗效,始终是研究的热点和难题。 DNA是放射线作用的主要靶分子,当放射线照射引起DNA损伤发生后,DNA损伤修复系统立即启动,并激活细胞周期检测点出现细胞周期阻滞,促进损伤DNA的修复。细胞周期检测点激酶1和2(CHK1和CHK2)是细胞周期检测点中非常重要的蛋白激酶,它们通过信号传导和放大,调节下游靶蛋白表达,使细胞周期出现阻滞。抑制CHK1和CHK2蛋白表达,可有效地消除肿瘤细胞在放射线或化疗药物作用后的细胞周期阻滞,增加放化疗的敏感性。但在食管癌细胞和食管癌组织中,CHK1和CHK2蛋白表达情况如何、照射后对细胞周期检测点如何调节,尚未见报道。 本研究首先观察食管癌细胞、食管癌组织以及癌旁不典型增生组织中CHK1和CHK2表达情况,并了解CHK1和CHK2表达与食管癌发生、发展以及单纯放疗疗效的关系;其次,观察体外培养的食管癌细胞在单纯照射或照射加药物wortmannin(以下简称WT)共同作用后,对食管癌细胞中CHK1和CHK2表达、细胞周期变化以及放射敏感性的影响;最后,通过脂质体介导的CHK1和CHK2反义寡核苷酸转染技术以及脂质体介导、质粒连接CHK1和CHK2短发卡状RNA(shRNA)的RNA干扰(RNAi)技术,探讨食管癌细胞转染前后,对CHK1和CHK2表达的变化以及照射后细胞周期的影响,为进一步进行体内和临床前期研究创造条件。 第一部分CHK1和CHK2在食管癌细胞和组织中的表达及其临床意义 目的:观察食管癌细胞、食管癌组织以及癌旁不典型增生组织中CHK1和CHK2的表达情况,了解食管癌组织中CHK1和CHK2表达与其发