SARS-CoV致肺损伤动物模型及其病理机制研究

【摘要】： 严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)是一种新发的人类传染病,病死率较高,自2002年11月起在中国的广东省及全球范围内流行。至2003年7月11日,全球共发病8,437例,死亡813例,仅中国大陆就有5,327例患者,死亡348例。2003年3月,世界卫生组织(WHO)发出了对SARS患者的警告,并建立了研究和监测网络,涉及10个国家的13个实验室。该病主要症状为高热、干咳、头痛、腹泻和缺氧,重症患者可发生急性呼吸困难和多器官衰竭(MOF)。病理学变化主要为肺脏肝样实变并伴有心、脾、肝和肾在内的多器官损害。重症SARS患者的肺脏有三个方面的改变:①弥漫性肺水肿伴有透明膜形成(1-2周内死亡);②大面积组织坏死伴有上皮细胞脱落(3-4周死亡);③早期纤维化(5-6周死亡)。这些病变呈渐进性和交叉性出现。脾和淋巴结有凋亡、坏死和出血性改变,后期可见再生修复现象。SARS-CoV对血管内皮细胞、肺泡上皮细胞和淋巴细胞亲合力强,这可能与SARS-CoV的功能性受体ACE2有关。为了探讨SARS-CoV致病机制和防治措施,建立SARS-CoV感染动物模型,已经成为一个迫切的任务和公认的重大科研课题,也是开发抗病毒药物和疫苗的基础性工作。 目的:建立SARS动物模型,为阐明SARS发病机制和为研发抗SARS- CoV药物及疫苗提供试验平台。方法: 1.动物感染,使用SARS-CoV PUMC01病毒株,用Vero细胞分离培养至第11代。通过鼻腔喷雾方法感染动物,病毒滴度为105 TCID50 (0.1-0.5 ml)。 2.RT-PCR,来源于感染动物和对照动物的咽拭子或不同组织样品,用MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit-Large Volume (Roche, #3264793)分离病毒RNA。使用一步法RNA PCR kit (Takara, #BK2610)用特异性引物扩增SARS-CoV pp1b片断进行RT-PCR,用于样品中的病毒检测。