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《河北医科大学》 2007年
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黄曲霉毒素G_1诱发小鼠肺腺癌的组织发生及其对肺泡Ⅱ型上皮细胞影响的研究

申海涛  
【摘要】: 黄曲霉毒素(Aflatoxins, AF)是黄曲霉菌(Aspergillus flavus)等真菌产生的具有致癌作用真菌毒素,包括AFB_1、B_2、G_1、G2和M_1等。黄曲霉毒素G_1 (Aflatoxin G_1,AFG_1)在我国胃癌、食管癌高发区居民饮食中的检出率很高,是当地粮食主要的污染真菌毒素。 Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar type II cell, AT-II)是肺泡上皮损伤修复的干细胞。外源性致癌因素如吸烟、粉尘、石英等作用于肺组织可引起AT-II损伤、修复和增生,在外源性致癌因素刺激长期反复作用下,AT-II细胞可发生癌变而导致肺癌发生。外源性致癌因素作用于靶细胞,直接和间接造成细胞损伤引起细胞结构和功能的改变是诱发癌变的重要基础。已有研究表明,多种外源性致癌因素诱发的实验动物肺腺癌均来源于AT-II。 本研究室前期动物诱癌实验结果表明,AFG_1具有致肺癌性,经口给予AFG_1可诱发实验小鼠肺腺癌发生。目前有关AFG_1诱发肺腺癌研究还局限于长期动物诱癌实验及AFG_1诱发不同动物肺癌的验证方面,对AFG_1诱发实验动物肺腺癌的组织来源尚缺乏研究,AFG_1对实验动物肺组织及AT-II的短期影响也未见文献报道。 为进一步探讨AFG_1诱癌机制,研究AFG_1诱发实验动物肺腺癌的组织学来源细胞类型,探讨AFG_1对肺组织和AT-Ⅱ的影响及其可能机制。本研究在前期动物诱癌实验研究的基础上,分析了AFG_1诱发肺腺癌组织AT-Ⅱ特异分化标志物SP-C和支气管无纤毛上皮细胞—Clara细胞特异分化标志物CC-10表达情况;观察了在整体水平和细胞水平上AFG_1急性作用对大鼠肺组织和AT-II结构和功能的影响及其致损伤生物学效应,同时探讨了JNK信号转导通路在AFG_1介导AT-II损伤中的作用。 本研究论文共分为五个部分: 1黄曲霉毒素G_1诱发小鼠肺腺癌组织发生的研究 目的:探讨长期经口给予AFG_1诱发NIH小鼠肺腺癌的组织学来源以及AFG_1长期作用对小鼠肺泡上皮细胞SP-C和PCNA蛋白表达的影响。 方法:采用本实验室存档的AFG_1长期灌胃NIH小鼠58周后存活小鼠肺组织取材石蜡包埋组织块标本24例作为研究对象,其中AFG_1诱发的肺腺癌9例。以同期实验中灌喂生理盐水的12例NIH小鼠正常肺组织作为对照。采用免疫组化方法检测9例肺腺癌组织中SP-C、CC-10、P53和RasP~(21)的表达情况。同时,采用免疫组化方法检测不同剂量AFG_1长期灌胃组和对照组肺组织肺泡上皮细胞SP-C和PCNA蛋白的表达情况。 结果: 1.1实验性肺腺癌组织中SP-C和CC-10免疫组化染色结果免疫组化染色结果表明,所有9例AFG_1诱发的肺腺癌组织SP-C均呈阳性表达,阳性率为100%,而CC-10均呈阴性表达。因此,本结果证实AFG_1诱发的NIH小鼠实验性肺腺癌来源于AT-II。 1.2实验性肺腺癌组织P53和Ras P~(21)免疫组化染色结果实验性肺腺癌组织P53和Ras P~(21)免疫组化染色结果发现本组9例肺腺癌组织均未见突变型P53和Ras P~(21)在蛋白水平上的表达。 1.3 AFG_1长期灌胃对肺组织肺泡上皮细胞SP-C和PCNA蛋白表达的影响不同剂量AFG_1处理组实验小鼠肺泡细胞SP-C阳性标记指数定量分析结果表明,AFG_13μg·kg~(-1)和AFG_1 30μg·kg~(-1)组动物肺脏SP-C阳性标记指数分别为31.63±5.51%和33.58±4.84%,明显高于对照组(19.72±1.92%,p0.01),表明AFG_1长期灌胃NIH小鼠可诱发AT-II细胞增生。AFG_1小剂量组和大剂量组肺泡细胞PCNA标记指数明显高于对照组(p0.01),进一步证明长期灌胃AFG_1可明显增高NIH小鼠肺泡细胞的增殖活性。 2支气管内给予黄曲霉毒素G_1对大鼠肺组织的作用的研究 目的:探讨一次性支气管内给予AFG_1对大鼠肺组织的影响。 方法:按30μg/kg body weight剂量经支气管一次性给予雄性SD大鼠AFG_1处理。AFG_1处理1、3、7和14d后,分别处死实验动物。部分大鼠支气管插管收集支气管-肺泡灌洗液(BALF),离心10min收集上清,采用生化法检测乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(AKP)活力。分别切取实验大鼠肺组织进行如下研究工作:取1mm~3大小的肺组织标本经2.5%戊二醛固定标本24h后,以扫描电镜方法观察大鼠肺组织超微结构变化;取部分肺组织4%多聚甲醛固定4h后,常规石蜡切片制备,采用原位杂交方法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA的表达情况;取部分肺组织10%多聚甲醛固定,常规石蜡切片制备,按S-P法进行采用免疫组化方法检测核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达;取部分肺组织用生理盐水制备成10%的肺匀浆,采用活性氧(ROS)测定法按相应试剂盒操作程序检测肺组中ROS(以H_2O_2为代表)含量。 结果: 2.1黄曲霉毒素G_1对支气管-肺泡灌洗液上清中LDH和AKP的影响给予AFG_1处理1、3和7d后,BALF上清中LDH和AKP酶活力明显升高,至d14时,LDH和AKP活力恢复至正常水平,提示从LDH和AKP酶活性的角度急性给予AFG_1处理对大鼠肺组织具有致损伤作用,但随着毒素在体内代谢,其损伤作用具有可逆性。 2.2黄曲霉毒素G_1对大鼠肺组织影响的病理形态学观察结果 光镜下观察发现对照组、溶剂对照组大鼠肺组织肺泡间隔较薄,无水肿、炎症及纤维组织增生,肺泡腔内未见炎性渗出。AFG_1处理组肺泡壁可见炎性增厚,有淋巴细胞和巨噬细胞浸润,7和14d组还可见有纤维母细胞增生。 扫描电镜观察可见,AFG_1处理后肺泡壁增厚且粗细不均,肺泡腔表面细胞有隆起,细胞肿胀,Ⅱ型肺泡上皮细胞表面微绒毛变短、消失,病变以AFG_1处理后7和14d为明显,证明支气管急性给予AFG_1对大鼠肺组织超微结构具有致损伤作用。 2.3黄曲霉毒素G_1对大鼠肺组织TNF-αmRNA表达的影响 原位杂交结果表明,AFG_1处理后1、3、7和14d组肺泡细胞TNF-αmRNA阳性表达细胞数分别为22.1±4.0%,20.3±4.2%,32.3±4.2%和24.3±3.8%,明显高于相应溶剂对照组(1.2±0.3%,1.1±0.2%,1.3±0.4%和1.0±0.4%,p0.01),提示AFG_1急性作用后可激活处理大鼠肺组织TNF-αmRNA表达。 2.4黄曲霉毒素G_1对大鼠肺组织NF-κB蛋白表达的影响 NF-κB免疫阳性反应定位于细胞浆,呈棕黄色染色颗粒,对照组、溶剂对照组和AFG_1处理组大鼠肺支气管黏膜上皮细胞出现阳性反应,而在肺泡壁上皮细胞未见NF-κB阳性表达,说明给予AFG_1刺激后在蛋白水平上没有激活肺泡壁上皮细胞NF-κB的表达。 2.5黄曲霉毒素G_1对大鼠肺组织抗活性氧能力的影响 AFG_1处理后除d1外,d 3、7和14肺组织抗活性氧活力分别为53.4±12.4,42.7±10.8和47.2±11.0 mol·min~(-1)·g prot~(-1),明显低于溶剂对照3、7和14d组(61.7±4.2、66.3±5.7和64.3±5.4 mol·min~(-1)·g prot~(-1),p0.05),表明AFG_1急性作用可以降低肺组织抗活性氧能力。 3支气管内给予黄曲霉毒素G_1对大鼠肺组织肺泡Ⅱ型上皮细胞影响的研究 目的:探讨一次性支气管给予AFG_1对大鼠肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ)结构和功能的影响 方法:实验动物模型同前一部分。AFG_1处理1、3、7和14d后,分别处死实验动物,切取部分新鲜肺组织,分别进行如下研究,取1mm3大小的新鲜肺组织固定于4%戊二醛中,待制备透射电镜电镜标本,观察AT-II超微结构变化;取部分肺组织10%多聚甲醛固定,常规石蜡切片制备,参照试剂盒说明书按S-P法进行采用免疫组化方法检测SP-C蛋白的表达;部分肺组织固定于70%酒精,采用FCM检测SP-C蛋白的表达;取100mg肺组织加入500μL蛋白裂解液,提取肺组织总蛋白,Western blot方法检测SP-C蛋白的表达;部分肺组织液氮冻存,提取组织RNA,RT-PCR方法检测SP-C和SP-A mRNA的表达情况。 结果: 3.1黄曲霉毒素G_1对大鼠肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞的影响 透射电镜观察可见AFG_1处理组Ⅱ型肺泡上皮细胞出现明显的损伤性变化,表现为板层小体半数空泡化,多数线粒体肿胀、完全空化,粗面内质网核糖体脱颗粒现象,部分细胞表面微绒毛明显减少或消失。 3.2黄曲霉毒素G_1对肺组织肺泡上皮细胞SP-C蛋白表达的影响 免疫组化染色表明,AFG_1处理1、3和14d实验动物肺泡上皮SP-C标记指数与相应对照组及溶剂对照组比较差异无显著性,但AFG_1处理7d时实验组大鼠肺泡上皮细胞SP-C蛋白阳性标记指数为9.10±1.28%,明显低于溶剂对照7d组(13.34±2.31%,p0.05)。 FCM结果显示AFG_1处理1、3和14d肺组织SP-C荧光指数与相应对照组比较差异无显著性,但AFG_1处理7d组肺组织SP-C蛋白荧光指数为0.77±0.03,明显低于溶剂对照7d组(0.95±0.06,p0.05)。 与免疫组化和FCM检测结果一致,Western blot半定量检测结果也提示AFG_1处理7d,AFG_1处理动物肺组织SP-C蛋白表达明显低于相应溶剂对照组。 上述结果均提示,AFG_1可在一定程度上影响实验动物肺组织AT-Ⅱ特异分化标志物SP-C的表达,这种影响具有明显的时间特异性,支气管给予AFG_1处理7d可降低SP-C蛋白表达。 3.3黄曲霉毒素G_1对肺组织中SP-C mRNA表达的影响 RT-PCR SP-C mRNA表达的检测结果表明,给予AFG_1作用1和3d后,肺组织SP-C mRNA未见明显改变,AFG_1作用7d,肺组织SP-C mRNA的表达明显降低(p 0.01),至d14时SP-C mRNA表达又恢复至正常水平,提示给予AFG_1急性作用后可以时间特异性地降低肺组织SP-C mRNA的表达。给予AFG_1作用一定时间后,SP-C在蛋白和mRNA水平的表达趋势相一致,7d时表达下降,14d恢复至正常水平,进一步表明随着毒素在体内代谢一段时间,其损伤作用具有可逆性。 3.4黄曲霉毒素G_1对肺组织中SP-A mRNA表达的影响 RT-PCR检测SP-A mRNA的表达结果显示,AFG_1作用3和7d组SP-A mRNA表达量分别为0.72±0.09和0.43±0.12,明显低于相应溶剂对照3和7d组(1.03±0.21和1.06±0.10,p0.01)。 4黄曲霉毒素G_1对体外培养的大鼠肺泡II型上皮细胞影响的研究 目的:进一步探讨AFG_1对体外培养的大鼠AT-Ⅱ致损伤作用。 方法:以酶消化法原代分离、培养大鼠AT-Ⅱ,将10~15mL细胞悬液接种于0.1g·L~(-1)大鼠IgG处理后的平皿中纯化3h,纯化后AT-Ⅱ用20%DMEM调整细胞浓度为(1~2)×10~9L~(-1),接种于96孔板、24孔板和细胞培养瓶中培养24h。用10%DMEM换液后继续培养12h,实验组分别给予不同浓度(0.5, 1.0和2.0mg·L~(-1))的AFG_1处理,溶剂对照组和对照组给予DMSO(0.4mL·L~(-1))和生理盐水处理。AFG_1作用24h后,收集96孔板细胞采用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;收集24孔板培养基上清液,采用生物化学方法检测上清液乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(AKP)活力;离心收集细胞于2.5%戊二醛中前固定24h,超薄切片(厚度50nm),醋酸铀-柠檬酸铅染色,日立H-7500透射电镜观察AT-Ⅱ超微结构的改变;收集24孔板细胞,Fluo-3/AM负载40min,采用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM )检测细胞内[Ca~(2+)];收集24孔板细胞,采用免疫细胞化学、CLSM方法检测AT-II SP-C的表达;离心收集细胞于70%酒精固定,采用FCM方法检测AT-II SP-C蛋白表达。 结果: 4.1肺泡Ⅱ型上皮细胞的培养和鉴定 透射电镜观察可见,本研究纯化的细胞内具有AT-II特征性板层小体;纯化细胞涂片,碱性磷酸酶染色可见﹥95%细胞胞浆内有深蓝色酶阳性产物,证明原代分离细胞经纯化后主要为AT-II。 4.2黄曲霉毒素G_1对AT-II细胞损伤影响 MTT检测结果发现,AFG_1作用后体外培养AT-Ⅱ细胞存活率分别为88±3%、80±9%和72±8%,明显低于溶剂对照组(101±2%, p0.01)。AFG_1处理组培养上清中LDH和AKP活力明显高于溶剂对照组(p0.01),随着处理浓度的增加,LDH和AKP活力也增加,提示AFG_1对原代培养的AT-Ⅱ具有一定增殖抑制和致损伤作用,随着处理浓度的增加,其致损伤作用逐渐增强。 4.3黄曲霉毒素G_1对AT-II超微结构的影响 透射电镜观察可见AFG_1处理组AT-II细胞出现板层小体空化,线粒体肿胀、空泡化等损伤性变化,表明给予AFG_1处理对体外培养的AT-Ⅱ的超微结构具有明显的致损伤作用。 4.4黄曲霉毒素G_1对AT-Ⅱ细胞内[Ca~(2+)]的影响 激光扫描共聚焦显微镜方法检测发现,AFG_1 0.5、1.0和2.0mg·L~(-1)组细胞内平均钙离子浓度荧光强度分别为200±21、225±14和229±12,明显高于溶剂对照组(161±28,p0.01),随着AFG_1处理浓度的增加,平均钙离子浓度荧光强度,呈剂量依赖关系(r=0.849, p0.01),研究结果表明随着处理浓度的增加,AFG_1明显增加体外培养的AT-Ⅱ细胞内[Ca~(2+)]。 4.5黄曲霉毒素G_1对AT-Ⅱ细胞SP-C蛋白表达的影响 免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微镜方法检测发现各组AT-II中均可见SP-C蛋白表达,定量检测结果表明,AFG_1 0.5、1.0和2.0mg·L~(-1)组SP-C蛋白表达荧光强度分别为225±18、209±14和195±13,均明显低于溶剂对照组(243±8, p0.01)。 FCM定量检测结果发现,随着AFG_1浓度的增加,AT-Ⅱ细胞SP-C蛋白表达FI明显下降,AFG_1 0.5、1.0和2.0mg·L~(-1)组分别为0.91±0.04、0.88±0.06和0.76±0.05,均明显低于溶剂对照组(0.99±0.06,p0.01)。表明AFG_1可以降低体外培养的AT-ⅡSP-C蛋白的表达。 5 JNK信号转导通路在黄曲霉毒素G_1诱导A549细胞损伤中的意义 目的:探讨JNK信号转导通路在AFG_1诱导A549细胞损伤中的作用及其机制。 方法: 5.1 AFG_1处理24h对A549细胞毒性作用、JNK激酶活性、SP-C表达及细胞内[Ca~(2+)]影响的检测 A549细胞复苏培养后,取对数生长期A549细胞,用10%DMEM调整细胞浓度为(1~2)×10~8L~(-1),接种于96孔板。实验按AFG_1处理8、16、24和48h不同时间分为4个时间点,每个时间点按0.1、0.5、1.0和2.0mg·L~(-1)AFG_1依次给予AFG_1处理、溶剂对照组和对照组分别给予DMSO(0.4mL·L~(-1))和生理盐水处理。以MTT比色法检测AT-Ⅱ存活率。 取对数生长期A549细胞,用10%DMEM调整细胞浓度为(1~2)×108L~(-1),接种于24孔培养板和细胞培养瓶中。细胞培养24h后,更换2%低血清DMEM培养基,实验组分别给予AFG_10.5、1.0和2.0mg·L~(-1)处理,溶剂对照组和对照组分别给予DMSO(0.4mL·L~(-1))和生理盐水处理,继续细胞培养24h。收集24孔板细胞,Fluo-3/AM负载40min,采用CLSM检测细胞内[Ca~(2+)];采用免疫细胞化学和CLSM方法检测A549细胞p-JNK水平;采用Western blot方法检测A549细胞JNK蛋白表达情况和p-JNK水平。采用RT-PCR方法检测A549细胞SP-C mRNA的表达情况。 5.2 JNK抑制剂SP600125预处理对AFG_1诱导细胞毒性作用、JNK激酶活性和SP-C表达变化影响的检测 取对数生长期A549细胞用10%DMEM调整细胞浓度为(1~2)×108L~(-1),接种于96孔培养板,随机分为9组:溶剂对照组、对照组、1μM SP600125组、0.5μM SP600125组、0.1μM SP600125组、1μM SP600125+ AFG_1 1.0 mg·L~(-1)组、0.5μM SP600125+ AFG_1 1.0 mg·L~(-1)组、0.1μM SP600125+ AFG_1 1.0 mg·L~(-1)组和AFG_1 1.0 mg·L~(-1)组。细胞培养24h后,更换2%低血清DMEM培养基,溶剂对照组和对照组给予DMSO(0.4mL·L~(-1))和生理盐水处理。其余各组(不包括1.0 mg·L~(-1)AFG_1组)加入不同浓度SP600125预处理,30min后含有AFG_1各组加入1.0 mg·L~(-1)AFG_1,A549细胞培养24h后,MTT方法检测细胞存活率。 取对数生长期A549细胞用10%DMEM调整细胞浓度为(1~2)×10~8L~(-1),接种于培养瓶。按JNK特异阻断剂SP600125对AFG_1作用后A549细胞存活率实验结果,给予0.5μM SP600125预处理细胞。实验分为4组,即溶剂对照组、对照组、阻断剂组和AFG_1处理组。细胞培养24h后,更换2%低血清DMEM培养基,阻断剂组加入JNK特异性阻断剂SP600125, 0.5μM。30min后AFG_1组和阻断剂组分别给予1.0 mg·L~(-1)AFG_1,溶剂对照组和对照组给予DMSO(0.4mL·L~(-1))和生理盐水处理。A549细胞培养24h后离心收细胞,采用Western blot方法检测A549细胞p-JNK水平。采用RT-PCR方法检测A549细胞SP-C mRNA的表达情况。 结果: 5.1黄曲霉毒素G_1对A549细胞存活率的影响 MTT检测结果表明,AFG_1在小剂量和短时间内对A549细胞没有明显损伤作用,一定剂量的AFG_1只有作用一定时间才能对A549细胞产生明显的致损伤作用,降低细胞存活率。 5.2黄曲霉毒素G_1对A549细胞p-JNK水平的影响 5.2.1p-JNK表达免疫细胞化学和激光扫描共聚焦显微镜方法检测结果 免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微镜方法检测发现随着AFG_1处理浓度的增加,A549细胞p-JNK荧光强度明显增强。半定量结果显示AFG_10.5、1.0和2.0mg·L~(-1)处理组p-JNK表达的FI值分别为126±11, 157±14和175±11,明显高于溶剂对照组(104±9,p0.05),实验结果表明给予AFG_1处理可以激活A549细胞JNK激酶。 5.2.2 p-JNK水平的Western方法检测 采用图像分析系统对杂交条带进行定量分析,结果显示AFG_1 0.5、1.0和2.0mg·L~(-1)处理组相对p-JNK水平分别为0.40±0.02、0.51±0.08和0.58±0.05,明显高于溶剂对照组(0.29±0.05,p0.05),进一步表明AFG_1提高A549细胞JNK磷酸化水平,AFG_1激活A549细胞JNK信号转导通路。 5.3黄曲霉毒素G_1对A549细胞JNK蛋白表达的影响 Western Blot结果显示,给予不同剂量AFG_1,体外培养的A549细胞JNK蛋白的表达与溶剂对照组比较差异无显著性,表明AFG_1对JNK蛋白的表达没有影响。 5.4黄曲霉毒素G_1对A549细胞内[Ca~(2+)]的影响 激光扫描共聚焦显微镜方法检测发现,随着AFG_1处理浓度的增加,AFG_1处理0.5、1.0和2.0mg·L~(-1)组,A549细胞内平均钙离子浓度荧光强度分别为169±13、204±16和228±11,明显高于溶剂对照组(134±12,p0.01),AFG_1处理浓度和细胞内平均钙离子浓度荧光强度有剂量依赖关系(r=0.932, p0.01),随着AFG_1浓度的增加,A549细胞内[Ca~(2+)]水平增加。 5.5黄曲霉毒素G_1对A549细胞SP-C mRNA表达的影响 A549细胞SP-C mRNA表达的RT-PCR检测结果发现, AFG_10.5、1.0和2.0mg·L~(-1)处理组A549细胞SP-C mRNA相对表达量分别为0.39±0.11,0.30±0.03和0.28±0.02,明显低于溶剂对照组(0.56±0.16,p0.05),说明给予AFG_1作用可以降低A549细胞SP-C mRNA的表达。 5.6 SP600125预处理对AFG_1作用后A549细胞存活率的影响 0.1μM SP600125+1.0 mg?L~(-1)AFG_1组和0.5μM SP600125+1.0 mg?L~(-1) AFG_1组细胞存活率分别为87±5%和89±5%,明显高于1.0 mg·L~(-1)AFG_1组细胞78±8%,但低于溶剂对照组(98±10%,p0.05),而1.0μM SP600125+1.0 mg?L~(-1)AFG_1组细胞存活率与AFG_1组比较无显著性差异(p0.05)。提示小剂量SP600125对AFG_1细胞损伤效应具有部分阻断作用,0.5μM SP600125的阻断作用尤为显著,AFG_1通过JNK信号转导通路部分参与介导A549细胞死亡。 5.7 SP600125预处理对AFG_1作用后A549细胞p-JNK激酶活性和SP-C mRNA表达的影响 Western blot结果表明,1.0 mg·L~(-1)AFG_1处理A549细胞24h,处理组细胞相对p-JNK水平明显高于溶剂对照组,给予SP600125预处理后, p-JNK水平明显降低(p0.05),说明SP600125对JNK的磷酸化具有特异阻断作用,进一步证实AFG_1可以激活JNK蛋白激酶。 给予SP600125预处理后,1.0 mg·L~(-1)AFG_1处理A549细胞24h,RT-PCR分析发现,AFG_1组和阻断剂组SP-C mRNA相对表达量分别为0.37±0.08和0.35±0.05,明显低于溶剂对照组(0.66±0.11,p0.05),阻断剂组SP-C mRNA相对表达量与AFG_1组比较差异无显著性。说明SP600125预处理对SP-C mRNA的表达没有抑制作用,AFG_1不通过JNK信号转导途径介导SP-C mRNA的表达。 结论: 1.长期经口灌胃NIH小鼠AFG_1所诱发的肺腺癌组织来源于AT-II,肺腺癌组织中未见突变型P53和Ras P~(21)蛋白表达;AFG_1长期经口灌胃NIH小鼠促进肺泡上皮细胞SP-C和PCNA的表达。 2.急性支气管给予AFG_1可以增加处理大鼠BALF中LDH和AKP的活力,导致大鼠肺组织超微结构出现损伤性变化;激活肺泡细胞TNF-αmRNA的表达,降低肺组织抗活性氧能力,但对肺组织NF-κB蛋白的表达没有影响。 3.急性支气管给予AFG_1可时间特异性地降低大鼠肺组织SP-C在蛋白水平上的表达,降低SP-C和SP-A在mRNA水平的表达。 4. AFG_1对原代培养的大鼠AT-II具有明显的致损伤作用,可以增加大鼠AT-II细胞内[Ca~(2+)],降低原代培养的大鼠AT-II SP-C蛋白的表达。 5. AFG_1作用于A549细胞可以增加A549细胞内[Ca~(2+)]、激活JNK蛋白激酶、降低A549细胞SP-C mRNA的表达;给予JNK特异性阻断剂-SP600125预处理可以部分抑制AFG_1对A549细胞的细胞毒性作用,但对AFG_1诱导SP-C mRNA表达降低没有影响。JNK信号转导通路可能部分参与介导AFG_1致AT-II损伤生物学作用。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R734.2

【参考文献】
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10 张祥宏,谢同欣,严霞,左连富,王凤荣;杂色曲霉素处理后体外培养的人胚肺细胞增殖情况及p53和rasp21蛋白表达的变化[J];中华物理医学杂志;1995年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王刚;郭文智;孙卓;何东伟;广田满;董玫;;鳞盖肉齿菌的抗肿瘤细胞增殖活性及其机制的研究[J];癌变.畸变.突变;2006年05期
2 左敏;倪志宇;许立;于峰;吕飒;陈仕萍;广田满;铃木信夫;董玫;;野鸦椿对HeLa细胞的抗增殖作用及其机制的初步研究[J];癌变.畸变.突变;2008年05期
3 司亚茹;李珊珊;姜霞;王思明;李学慧;郑燕;史清文;董玫;张红真;;3种倍半萜化合物抑制妇科肿瘤细胞增殖活性及其作用机制探讨[J];癌变.畸变.突变;2010年01期
4 张冬成,陈秉燮,梅品超,龚光甫;食管癌多部位DNA含量分析及其临床意义[J];癌症;1999年01期
5 韦伟,龚建平,裘法祖;大鼠肝癌发生期间细胞增殖与凋亡关系初探[J];癌症;1999年05期
6 刘丽华;单保恩;邵丽丽;王士杰;;IL-27基因对Eca109细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制[J];癌症;2008年01期
7 钱慧慧;牛更智;何敏;剡海阔;马勇江;卢培成;刘本杰;邓衔柏;;免疫组织化学法定位猪肾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究[J];现代农业科技;2010年16期
8 卢培成;贺利民;牛更智;剡海阔;马勇江;范小龙;李玉谷;邓衔柏;;免疫组织化学法定位猪脾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究[J];现代农业科技;2010年18期
9 梁思;马楠;徐婉筠;邓兆泽;刘鹏飞;冉靓;赵春生;;天津郊区夏季气溶胶谱分布特征观测研究[J];北京大学学报(自然科学版);2012年02期
10 张正浩,张孙曦,李菊香,何其华,牛大地,王述姮,袁杰,唐朝枢;钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用[J];北京大学学报(医学版);2002年03期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 孟金萍;刘云波;张以河;吕凤柱;杨旭;孙淑华;王艳蓉;;纳米TiO_2影响细胞生长活性的尺寸效应研究(英文)[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
2 邓利娟;李湛军;范慧红;;F1013对Gal N/LPS引起大鼠爆发性肝衰竭的保护作用[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
3 曹海军;陈淼;;HO-1对ARDS大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞保护作用的研究进展[A];贵州省医学会重症医学分会第三届学术年会论文汇编[C];2008年
4 何江;黄敏;陈浩;伍玲;高鹏;王艳;雷庆;;辐照法降解食品中污染物的研究进展[A];第六届核农学青年科技工作者学术交流会暨中国核学会2011年学术年会核农学分会论文集[C];2011年
5 张伟;袭著革;杨丹凤;张华山;林本;马力;;冬季北京交通源大气颗粒物的监测及所致大鼠肺毒性反应研究[A];中国毒理学会环境与生态毒理学专业委员会成立大会会议论文集[C];2008年
6 简弘民;陈姿名;叶幸真;黄俊超;徐礼业;;新竹地区大气环境奈米微粒粒径分布及数目浓度变化研究[A];中国颗粒学会2006年年会暨海峡两岸颗粒技术研讨会论文集[C];2006年
7 吴艳;陈淼;王洪敏;吴双;钱明江;王宇辉;傅小云;;HO-1对原代培养大鼠AEC-Ⅱ细胞凋亡及Bcl-2、p53的影响[A];《中华急诊医学杂志》更名十周年、World Journal of Emergency Medicine创刊一周年庆典《中华急诊医学杂志》第十届组稿会、第三届急诊医学青年论坛论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蔺新丽;纳米二氧化硅颗粒肺毒性及其相关机制研究[D];吉林大学;2011年
2 周婷;生产性粉尘致巨噬细胞炎性反应及其与接尘工人健康损害的关系[D];华中科技大学;2012年
3 王建奇;脑胶质瘤增殖、凋亡及端粒酶反义基因治疗的实验研究[D];第二军医大学;2001年
4 程何祥;氧自由基、钙离子在心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸、胺碘酮、钾通道开放剂等的影响研究[D];第四军医大学;2001年
5 胡永珍;活髓片治疗再障的临床和实验研究[D];广州中医药大学;2002年
6 柳琪林;表皮细胞生长因子对烟雾吸入性损伤大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞形态和功能的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
7 张林西;环氧化酶在食管上皮癌变中的表达及NSAIDs对食管癌细胞作用研究[D];河北医科大学;2003年
8 李月红;脱氧雪腐镰刀菌烯醇对机体免疫功能影响的实验研究[D];河北医科大学;2003年
9 晁敏;应用流式细胞计研究超微型浮游植物在中国东、黄海典型水域的分布[D];华东师范大学;2002年
10 方昌阁;小鼠类乳腺干细胞的分离、培养和鉴定[D];中国农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘晓慧;二氧化钛和磷酸钙纳米对雌性生殖系统影响的研究[D];南京医科大学;2009年
2 李孜音;AFB1对高表达CYP2A13的BEAS-2B细胞的毒效应研究[D];南京医科大学;2010年
3 任明;金属硫蛋白对百草枯致小鼠急性肺损伤的保护效应及机制研究[D];吉林大学;2011年
4 洪丽玲;两种纳米与常规材料DNA损伤和亚慢性毒性的比较研究[D];第二军医大学;2011年
5 陀晓宇;个旧矿粉诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮与肺成纤维细胞共培养相互作用的研究[D];昆明医学院;2011年
6 李国平;尿路上皮念珠菌感染与膀胱癌的相关性研究[D];兰州大学;2011年
7 王琦;淫羊藿苷诱导MLTC-1凋亡及其机制研究[D];重庆医科大学;2011年
8 曾悦翔;利多卡因对LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5表达的影响[D];中南大学;2011年
9 王在岩;白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化及其HIF-1α和NF-κB表达的影响[D];南华大学;2011年
10 刘佩英;辛伐他汀对LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道α亚基mRNA的影响及可能机制[D];中南大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张祥宏,谢同欣,严霞,王俊灵,王凤荣;杂色曲霉素对体外培养人胚支气管粘膜上皮的致癌作用初步研究[J];癌症;1996年05期
2 邱忠民,何冰,宋明臣,李海潮;老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞细胞外基质成分和基底膜厚度的变化[J];北京医科大学学报;2000年06期
3 张祥宏,王凤荣,王俊灵,严霞,黄向华,谢同欣,张振东;真菌及其毒素诱发肺癌的动物实验研究[J];北京大学学报(医学版);2003年01期
4 丁自强,吴中立;肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离培养和磷脂酶A_2的损伤作用[J];第二军医大学学报;1992年01期
5 李贤,黄中新,夏潮涌;胎肺中甲状腺转录因子-1的表达及其生物学作用[J];解剖学研究;2001年04期
6 熊轶,黄中新,覃莉;人胎肺Ⅱ型肺泡细胞中表面蛋白-B的表达及意义[J];解剖学研究;2002年04期
7 喻伦银,刘铭球,邹祖玉,江曼,张正彬;肺癌组织的P53基因突变与细胞增殖———P53与增殖细胞核抗原免疫组化研究[J];湖北医科大学学报;1996年03期
8 张祥宏;张振东;谭少波;付承光;;磁县酸菜汤的霉菌培养和霉菌毒素检测[J];河北医学院学报;1984年01期
9 黄向华,张祥宏,李月红,王俊灵,严霞,杨建柱,刘艳丽,刘晋红,王凤荣;3种真菌毒素诱发NIH小鼠肺癌的实验研究[J];河北医科大学学报;2003年01期
10 孙旭明,严霞,张祥宏,谢同欣,王俊灵,曹文军,王凤荣;杂色曲霉素体外对人胚肺细胞致恶性转化作用的研究[J];河北医科大学学报;1998年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 路陶生;;黄曲霉毒素危险性评价——人类流行病学资料的意义[J];国外医学.卫生学分册;1992年02期
3 廖冰君;;RIDA~QUICK Aflatoxin黄曲霉毒素快速检测条:保障粮食收购的安全[J];食品安全导刊;2009年02期
4 子荫;周艳琼;;莫吃霉变食品[J];食品与健康;2002年05期
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6 章静波;酚类抗氧化剂丁基羟基茴香醚和丁基羟基甲苯呈剂量相关地抑制黄曲霉毒素B_1诱导的致肝癌作用[J];国外医学.卫生学分册;1987年02期
7 黄淑英;邓居昌;;牛奶中黄曲霉毒素M_1的快速反相液相色谱分析[J];预防医学情报杂志;1987年03期
8 张树身;;等标层析法筛选黄曲霉毒素[J];中国卫生检验杂志;1991年03期
9 林怡;黎乐群;彭涛;;黄曲霉毒素B_1代谢及致肝癌机制的研究进展[J];中国现代医药杂志;2007年12期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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2 涂彩虹;秦文;胡欣洁;;黄曲霉及其毒素微生物防治研究进展[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
3 计成;赵丽红;马秋刚;;黄曲霉毒素生物降解的研究进展[A];饲料营养研究进展(2010)[C];2010年
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5 贺竹梅;;黄曲霉毒素食品安全问题分析及对策研究与思考[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
6 刘付香;李玲;梁炫强;;黄曲霉拮抗菌(GZ101)的鉴定及碱性蛋白酶基因克隆、表达[A];广东省植物学会第十九期学术研讨会论文集[C];2010年
7 张利民;叶央芳;安艳捧;田园;王玉兰;唐惠儒;;大鼠对黄曲霉毒素B1暴露应答的代谢组学研究[A];第十六届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];2010年
8 李红波;胡梁斌;孙俊良;王淼焱;;几种多糖对黄曲霉菌生长及产毒的抑制作用[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
9 王会娟;刘阳;邢福国;;降解黄曲霉毒素B_1漆酶的筛选[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
10 孙兴荣;裴世春;柳家朋;;抗黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的制备[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王宁 马秋刚 张建云 胡新旭 计成;黄曲霉毒素的传统去毒方法和生物降解研究进展[N];中国畜牧兽医报;2009年
2 记者 高原;多吃青菜可减少黄曲霉毒素危害[N];新华每日电讯;2010年
3 中国WTO/TBT-SPS中心供稿;欧盟发布黄曲霉毒素污染风险法规[N];中国国门时报;2010年
4 上海交通大学 徐建雄 教授;切莫小视饲料中黄曲霉毒素的危害[N];中国畜牧报;2003年
5 徐建雄;切莫小视饲料中黄曲霉毒素的危害[N];中国畜牧报;2003年
6 本报记者 汤江峰 通讯员 雷少榕 谢星;黄曲霉毒素“毒”在哪里?[N];大众卫生报;2001年
7 林祥 梁斌 白艳青 崔顺花;黄曲霉毒素的污染与预防[N];中国畜牧水产报;2001年
8 中国WTO/TBT-SPS通报咨询中心供稿;欧盟拟修改食品内黄曲霉毒素抽样方法[N];中国国门时报;2009年
9 四川农业大学 李梦云 陈代文;黄曲霉毒素的毒害及残留[N];中国畜牧报;2004年
10 四川农业大学 李梦云 陈代文;黄曲霉毒素的毒害及残留[N];中国畜牧报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 丁小霞;中国产后花生黄曲霉毒素污染与风险评估方法研究[D];中国农业科学院;2011年
2 张道宏;黄曲霉毒素杂交瘤细胞株的选育及免疫层析检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
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5 王琢;抑黄曲霉毒素的Hitwh-B05菌株有效成分的分离纯化与鉴定[D];哈尔滨工业大学;2013年
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7 王蓓;脉冲强光、紫外和红外辐射对稻谷黄曲霉及其毒素的杀灭降解研究[D];江苏大学;2014年
8 管笛;黄曲霉毒素M_1单克隆抗体及检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
9 谢光洪;黄曲霉毒素B1免疫层析试纸条快速检测方法的研制[D];吉林大学;2008年
10 史莹华;纳米级硅酸盐结构微粒(NSP)吸附猪饲粮中黄曲霉毒素的研究[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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2 高明;黄曲霉毒素降解酶在酿酒酵母细胞表面上的展示及酶活性质的研究[D];曲阜师范大学;2012年
3 吴清华;茶叶中抑制黄曲霉毒素产生的组分及相关特性研究[D];西北农林科技大学;2013年
4 崔捷;添加黄曲霉毒素降解酶对肉牛生产性能、胴体品质、血液指标和组织残留量的影响[D];河北农业大学;2013年
5 王涛;发酵豆制品中黄曲霉毒素的控制[D];西华大学;2010年
6 刘雪芬;基于环糊精的黄曲霉毒素B_1荧光增敏检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
7 涂彩虹;黄曲霉拮抗菌分离鉴定、培养条件优化及其发酵上清液部分特性初步研究[D];四川农业大学;2011年
8 王艳霞;基于磁性微粒的黄曲霉毒素样本净化及层析试纸条研究[D];西北大学;2012年
9 晏丽;黄曲霉毒素产毒菌检测方法的研究及其应用[D];江南大学;2012年
10 梁雅婷;亚麻酸抑制黄曲霉毒素合成的代谢调控研究[D];苏州大学;2013年
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