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《河北医科大学》 2007年
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慢传输型便秘大鼠血浆及肠道胃动素变化的实验研究

陈硕  
【摘要】: 目的:本研究课题利用大黄灌胃建立慢传输型便秘大鼠模型,通过测定模型大鼠血浆及十二指肠、回肠、横结肠组织匀浆中胃动素(MTL)含量,观察模型大鼠肠道胃动素免疫反应性变化,探讨血浆及肠道MTL水平与慢传输型便秘的关系。 方法:1、动物分组:选取健康Wistar大鼠40只,雌雄各半,按照完全随机的方法进行分组,实验组20只,对照组20只,分组后各组间体重、性别无显著性差异。 2、动物处理:实验组采用大黄浸液灌胃,首日剂量为800mg/kg(生粉) ,此后每日剂量在前一日基础上增加200mg/kg(生粉),直至实验组出现半数大鼠粪便变稀,保持剂量至80%的稀便消失,继续加量给药,至又有半数大鼠粪便变稀,如此程序循环3次,待实验组第三次80%的稀便消失一周后停止建模,对照组以同等体积蒸馏水灌胃。 3、标本取材:实验组及对照组大鼠禁食8小时后乙醚麻醉,股动脉取抗凝血3ml,切取距幽门5cm十二指肠、距回盲瓣5cm回肠、横结肠中段组织各两块,每块长约1cm,其中一块组织多聚甲醛固定,包埋切片后进行HE染色、MTL免疫组织化学染色,观察免疫反应阳性细胞数量及形态变化。另一块组织称重,匀浆,应用荧光分光光度法测量血浆及组织匀浆中MTL含量。 4、半定量分析:根据MTL免疫反应阳性细胞的分布密度及活动性强弱,做相对半定量比较。所有视野未见阳性细胞为(-);有少数阳性细胞为(+),染色为淡黄色;阳性细胞较多见为(++),染色为棕黄色;阳性细胞多见为(+++),染色为棕褐色。 5、图像分析:在CMIAS系列多功能病理图像分析系统下,每组选5例染色良好的切片,在显微镜物镜放大10倍下观察,每张切片随机选取5个视野,共25个视野摄入计算机(分辨率为800×600),测量每个视野阳性染色区域的表面积密度,即面密度。最后计算每组的平均值。并用尼康光镜照相机拍摄典型视野。 6、统计分析:本实验计数资料数据采用X±s表示,应用SPSS10.0统计软件,选用成组t检验进行统计分析,检验水准α=0.05。半定量分析结果采用Excel编程统计,检验方法选用成组设计多个样本比较的秩和检验(Kruskal-Wallis法),检验水准α=0.05。 结果:1、肠道大体病理变化及HE染色:两组大鼠肠道外观无明显差别,结肠粘膜无色素沉着。对照组大鼠肠道切片HE染色未发现病变,实验组大鼠肠道切片HE染色可见粘膜慢性炎症改变。 2、MTL免疫组织化学结果:肠道的MTL免疫组织化学染色显示其阳性产物呈棕黄色沉淀。十二指肠、回肠粘膜及粘膜下层可见MTL免疫反应阳性细胞分布, MTL免疫反应阳性细胞呈圆形,着色淡。实验组及对照组十二指肠肌层及肌间神经丛、回肠肌层及肌间神经丛以及横结肠全层未见阳性细胞及阳性纤维。实验组十二指肠MTL免疫反应性较对照组明显降低(p0.05);实验组回肠MTL免疫反应性较对照组明显降低(P0.05)。 对MTL免疫组织化学图像分析的结果与半定量分析一致。 3、血浆中MTL含量:实验组大鼠血浆中MTL含量较对照组降低(p0.05)。 4、肠道组织匀浆中MTL含量:实验组及对照组大鼠十二指肠组织匀浆中MTL含量均高于同组回肠组织匀浆中MTL含量(p0.05);实验组大鼠十二指肠组织匀浆中MTL含量较对照组十二指肠组织匀浆中MTL含量降低(p0.05),实验组大鼠回肠组织匀浆中MTL含量较对照组回肠组织匀浆中MTL含量降低(p0.05);实验组及对照组大鼠横结肠组织匀浆中MTL均未测出。 结论:1、应用大黄灌胃制造STC大鼠模型更为精确,是探讨STC发病机制的一个较好模型。 2、大鼠MTL主要集中在近端小肠,在结肠中没有分布。慢传输型便秘大鼠血浆与肠道粘膜MTL含量及免疫反应性降低,血浆及肠道粘膜MTL水平与STC有一定相关性。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R574.62

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