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《河北医科大学》 2007年
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调气类方调治功能性消化不良的物质基础及作用机制的实验研究

谢伟  
【摘要】: 目的:本次研究的主要目的有:1尝试用“不规则喂养配合夹尾刺激法”建立FD动物模型。2研究调气类方(四逆散、枳术丸、小陷胸汤)治疗FD的物质基础和作用机制,探寻调理气机法治疗FD的科学依据。 方法 实验一:功能性消化不良动物模型的改进 第一步:动物模型的建立 健康清洁级雄性Wistar大鼠32只,平均体重200克,随机分为4组,每组8只,分别称作:1.正常组(NG),正常喂养。2.不规则喂养组(IG):单日喂食,双日禁食。3.夹尾刺激组(CG):正常喂养,每日用长镊子钳夹大鼠尾巴末端1/3处,每次30分钟,隔半小时一次,4小时后停止。4.不规则喂养配和夹尾刺激组(ICG):单日喂食,双日禁食,禁食日用夹尾刺激,每次10分钟,隔1小时一次,4小时后停止。观察大鼠饮食量、体重、毛色、粪便以及性情的变化。 第二步:动物模型的验证 将上述4组大鼠禁食水24小时,然后用1g/ml淀粉糊剂灌胃(10ml/kg),静置1小时后,断头处死,剖开腹腔,结扎贲门和幽门,将胃取出,称重;剪开胃壁,用蒸馏水洗去胃内容物,用滤纸吸干,再称空胃的重量,计算胃排空率,并观察胃黏膜。 实验二:调气类方调治功能性消化不良的物质基础及作用机制的实验研究 第一步:造模和治疗健康清洁级雄性Wistar大鼠48只,平均体重200克, 随机分成6组,每组8只。取一组作为空白对照组(BG),正常喂养14天。余下5组按“不规则喂养配合夹尾刺激法”造模14天。空白组用生理盐水灌胃14天;其余5组分别称为模型对照组(MG)、四逆散组(SG)、枳术丸组(ZG)、小陷胸汤组(XG)、多潘力酮组(DG),分别采用生理盐水、四逆散水煎液、枳术丸水煎液、小陷胸汤水煎液、多潘力酮溶液灌胃14天。治疗前后观察各组大鼠一般状况,体重和饮食量。 第二步:指标检测 胃排空实验:将上述6组大鼠禁食水24小时,后用淀粉糊剂(1g/ml)以10mg/kg灌胃,静置1小时后,断头处死,先取血4ml,放入抗凝管内冷藏备用待测NO、AchE、MTL;剖开腹腔,取胃,称重;剪开胃壁,洗去内容物,再称空胃重,计算胃排空率,并观察胃黏膜。剪下胃窦部放入10%甲醛溶液中固定,其余胃组织研制成10%组织匀浆备用待测NO、AchE。 采用硝酸还原酶法检测胃壁组织和血清内NO含量,采用化学比色法检测胃壁组织和血浆内AchE活性;采用放免法检测血浆内MTL含量。 胃窦组织结构观察:将排空实验中留取的胃窦标本取出,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,4μm切片,HE染色,在光学显微镜下观察胃窦组织结构。 结果 实验一 1大鼠一般状况及胃黏膜形态 NG大鼠饮食量稳定;毛色洁白光亮,柔软光滑;粪便成形,气味不大;性情较温和,精神状态良好;胃黏膜淡红色,未见充血水肿,表面完整。IG大鼠上述各项未见明显改变;CG大鼠和ICG大鼠进食紊乱,饮水量增加;毛色发黄干枯;粪便不成形,臭秽难闻;性情暴躁,精神疲惫;胃黏膜充血水肿,CG大鼠出现糜烂和溃疡。 体重增加值比较(g): IG(22.99±4.51),CG(12.26±5.32)和ICG(17.54±8.77)均明显低于NG(33.71±7.45) (P0.01);造模各组之间比较,CG明显低于IG(P0.01)。 2大鼠胃排空率的比较(%) 与NG(27.00±4.06)相比,CG(15.94±4.09)和ICG(20.88±1.19)明显降低(PCG0.01,PICG0.05)。造模各组之间比较,CG明显低于IG(24.75±1.10) (P0.01)。 实验二 1一般状况和胃黏膜形态 空白组大鼠饮食量稳定上升;体重明显增加;毛色洁白,柔软光滑;粪便成形,气味不大;性情较温和,精神良好;胃黏膜淡红色,表面完整。模型组大鼠进食紊乱,饮水量增加;体重增长缓慢;毛色发黄干枯;粪便不成形,臭秽难闻;性情暴躁,精神疲惫;胃黏膜充血水肿,表面完整。多潘力酮组和三个中药组治疗前与模型组基本相同,经过治疗饮食量、体重、毛色、粪便均有所改善。性情较治疗前温和,精神好转。胃黏膜略红,表面完整。 2胃排空率(%)与模型组(16.25±3.82)比较,四逆散(26.19±0.84)、枳术丸(25.50±1.00)、小陷胸汤(25.38±1.19)都能明显升高胃排空率(PSG0.01,PZG,XG0.05),其中四逆散明显优于多潘力酮(22.69±0.96) (P0.01)。三方之间是等效的(P0.05)。 3胃组织和血清中NO含量 胃组织(μmol/gprot):与模型组(4.08±0.23)相比较,四逆散(2.80±0.20),枳术丸(3.10±0.24),小陷胸汤(3.39±0.14)都能显著降低胃组织NO含量(P0.01),且都明显优于多潘力酮(3.68±0.23) (P0.01)。三方之间比较,作用由强至弱为:四逆散、枳术丸、小陷胸汤(P0.05)。 血清(μmol/L):与模型组(59.75±10.96)相比较,四逆散(42.56±4.55)、枳术丸(45.53±5.34)、小陷胸汤(46.64±10.37)均能显著降低血清NO含量(P0.05),且与多潘力酮(47.52±9.59)等效(P0.05)。三方之间也是等效的(P0.05)。 4胃组织和血浆中AchE活性 胃组织(U/mgprot):与模型组(0.74±0.11)相比较,四逆散(0.88±0.07)、枳术丸(0.87±0.06)、小陷胸汤(0.84±0.06)均能明显升高胃组织AchE活性(P0.05),相应增加Ach含量,且与多潘力酮(0.85±0.09)等效(P0.05)。三方之间也是等效的(P0.05)。 血浆(U/ml):与模型组(7.02±0.90)相比较,四逆散(11.43±1.80)、枳术丸(9.96±2.20)、小陷胸汤(8.96±1.60)均能明显增强血浆AchE活性(PXG0.05,其余P0.01),相应增加Ach含量;其中四逆散优于多潘力酮(9.37±2.33)(P0.05)。三方之间比较,四逆散明显优于小陷胸汤(P0.01)。 5血浆MTL含量(pg/ml)与模型组(385.21±10.98)相比较,四逆散(430.04±8.25)、枳术丸(422.04±12.46)、小陷胸汤(417.67±9.05)均能显著升高血浆MTL含量(P0.01),其中四逆散和枳术丸明显优于多潘力酮(408.29±11.11) (PSG0.01,PZG0.05)。三方之间比较,四逆散明显优于小陷胸汤(P0.05)。 6胃窦组织结构 模型组大鼠胃窦黏膜层完整,可见充血水肿和炎细胞浸润。多潘力酮组和三个中药组黏膜层完整,未见充血、水肿及炎细胞浸润。 结论 1“不规则喂养配和夹尾刺激法”较之以往各种造模方法更适合于建立FD动物模型。本方法与FD发病特点接近,操作较简便,实验周期不长;大鼠一般状况,胃黏膜形态和胃排空率改变明显;可控性好,不易发生意外。 2四逆散、枳术丸和小陷胸汤能改善FD大鼠一般状况和胃黏膜形态;提高其胃固体排空率;减轻NO对胃排空的抑制;增强Ach和MTL含量,促进胃排空。其中以四逆散综合效果最佳,在提高胃固体排空率,降低胃组织NO,增强血浆中AchE和MTL方面明显优于多潘力酮。枳术丸在降低胃组织NO和增强血浆MTL方面优于多潘力酮。小陷胸汤与多潘力酮等效。临床上可根据辨证分型的结果选择应用或适当配伍以增强疗效。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R259

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