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《河北医科大学》 2008年
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塞来昔布对人骨肉瘤细胞MG-63的抑制作用的实验研究

颉朝阳  
【摘要】: 目的:研究塞来昔布(Celecoxib)对人骨肉瘤细胞株MG-63生长的抑制作用并探讨其作用机制。 方法:将人骨肉瘤细胞株MG-63细胞于37℃,5%CO2培养箱内按常规条件进行传代培养,待细胞进入对数生长期后用胰蛋白酶消化成单细胞悬液后进行操作。采用以下实验: 1采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,将骨肉瘤细胞接种于96孔培养板上,贴壁后分别加入不同浓度的塞来昔布,置于培养箱培养24、48小时后分别加入MTT20微升,孵育4小时,弃上清液加入DMSO振荡5min使结晶物充分溶解,在酶联免疫检测分析仪上测定OD490的值,根据公式计算抑制率。 2形态学观察细胞接种贴壁后分别加入不同浓度的药物后分别培养24、48、72小时后在倒置显微镜下观察细胞形态改变。 3流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期分布:收集不同浓度塞来昔布处理48小时后培养细胞的MG63及对照组细胞,冷PBS漂洗。预冷70%乙醇4°C,固定,上机检测前离心去固定夜,0.5%胃蛋白酶消化,碘化丙锭室温避光染色,流式细胞仪上机检测,应用软件进行分析。 4透射电子显微镜观察:取经不同浓度药物处理48小时的细胞,用体积分数为2.5%戊二醛4℃固定,用10 g/L锇酸后固定,丙酮系列脱水,最后用Epon812环氧树脂包埋,超薄切片机切片,醋酸铀与柠檬酸铅双重染色,电镜下观察细胞超微结构并拍照。 结果: 1用不同浓度的塞来昔布作用于MG-63细胞后结果显示塞来昔布能明显抑制细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。药物浓度为200ug/ml时,作用72h后抑制率可达到69.17%(P0.01)。2倒置显微镜下观察对照组细胞贴壁生长,梭形或多角形,核圆形,胞浆透亮。细胞增殖状态良好。2μg/ml的塞来昔布作用24h即可见少量细胞变圆,48h细胞之间距离增大,变圆的细胞数量增多,与对照组相比,细胞生长缓慢甚至停止,胞浆内颗粒增多增粗。透视电镜观察可见典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,胞膜结构保持完整,胞核固缩,核碎裂,染色质浓缩边集,形成新月形胞核,胞浆空泡化明显,细胞表面有较多浓缩的胞质突起。3药物处理后48h的细胞G0/G1期比例增高,S期、G2/M期细胞比例减少。药物浓度为200ug/ml时,细胞G0/G1期比例达63.4±0.85%.而对照组的细胞G0/G1期比例为49.5±0.72%。FCM发现经塞来昔布处理细胞48h后,凋亡率随药物浓度的增加逐渐增高。对照组和药物浓度为200ug/ml时凋亡率分别为4.04±0.52%,21.41±0.85%,两者有显著性差异(P0.01)差异,药物浓度在2~200ug/ml时G0/G1期前出现凋亡峰。 结论:塞来昔布对人骨肉瘤细胞株MG-63有细胞毒性作用,其作用具有时间和剂量依赖性。其机制与抑制肿瘤细胞增殖,使细胞阻滞于GO/G1期,并且能诱导其凋亡有关。其他作用机制有待进一步研究。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R738.1

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