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《河北医科大学》 2010年
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牛磺酸对视神经损伤形态学及Nogo-A mRNA表达的影响

王庆金  
【摘要】: 目的:外伤性视神经病变可以引起不同程度的视力下降或丧失。视神经损伤的治疗一直为人们所重视,既往认为视神经损伤后是不可再生的,近年来国内外学者发现视神经在特定的条件下是可以再生的。纵观近年来对视神经损伤后促进再生的方法主要有药物治疗、基因治疗及手术治疗,而早期的药物治疗仍然是视神经损伤的主要治疗手段。牛磺酸(Taurine)具有广泛的生理药理作用,能调节机体的糖代谢和脂代谢,具有细胞保护、抗氧化、改善视觉信号传导等作用。现制备大鼠视神经不全损伤模型,腹腔注射牛磺酸,观察视神经形态学改变及Nogo-A mRNA表达的变化,从而观察牛磺酸对外伤性视神经损伤的作用,为牛磺酸治疗视神经损伤提供实验依据。 方法:雌性清洁级SD大鼠84只,(河北医科大学动物实验中心提供)体重250g±10g,随机分为四组:正常组12只,对照组24只,治疗组24只和预处理组24只。对照组、治疗组及预处理组共72只大鼠均右眼制作视神经不完全损伤模型,左眼不予处理。按伤后处死时间3天、7天、14天及28天各分为4个时间点,每个时间点对照组、治疗组、预处理组各取6只大鼠(均取右眼),正常组3只大鼠(均取双眼)。对照组于伤后1小时开始给予蒸馏水250mg/kg腹腔注射,每日1次,至实验结束;治疗组于伤后1小时开始给予5%牛磺酸250mg/kg腹腔注射(蒸馏水配制),每日1次,至实验结束;预处理组于致伤前3天开始给予同剂量牛磺酸腹腔注射,每日1次,至实验结束;正常组不做处理。于术后相应时间点取各组大鼠视神经组织用于实验研究。采用光学显微镜观察各组视神经组织形态学变化、透射电子显微镜观察超微结构、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)测定视神经Nogo-A mRNA的表达。本实验数据用x±s表示,采用方差分析,SPSS 13.0软件包进行统计学分析。 结果: 1.视神经HE染色实验3天、7天、14天、28天正常组视神经结构整齐,胶质细胞排列整齐与神经纤维走向一致。对照组视神经结构紊乱,神经纤维排列紊乱,胶质细胞核增多,胞质水肿,部分细胞空泡变性、核溶解,3天、7天、14天、28天损伤逐渐加重。治疗组及预处理组均可见上述改变,但各时间点损伤均较对照组轻微,预处理组3天时损伤较治疗组轻微,7天、14天、28天较治疗组无明显变化。 2.视神经超微结构观察:正常视神经主要由视网膜神经节细胞的轴突及周围的髓鞘、间质内的神经胶质细胞组成,大量的轴突排列整齐,横切面类圆形,包绕髓鞘。髓鞘致密,呈致密板层排列,轴突内布满微管、微丝,并可见线粒体等细胞器。各时间点无明显变化。对照组视神经部分轴突内基质水肿,轴索变小,髓鞘变薄松解,板层结构分裂呈洋葱样改变或变薄,线粒体肿胀、空泡化,部分微丝微管消失,3天、7天、14天、28天损伤逐渐加重。治疗组及预处理组均可见上述改变,但各时间点损伤较对照组轻微。 3.轴突计数结果:在实验的3天、7天、14天、28天治疗组及预处理组视神经轴突数均高于同时间点对照组,差异有显著性(p0.05);预处理组3天轴突计数为335.89±22.55/1000μm2高于同时间点治疗组轴突计数270.45±21.78/1000μm2,差异有显著性(p0.05);7天、14天、28天预处理组轴突计数较治疗组无明显差异(p0.05)。对照组3天、7天、14天、28天之间轴突数呈减少趋势,组内有非常显著性差异(p0.01);治疗组3天、7天、14天之间轴突计数逐渐增加,有显著性差异(p0.05),14天、28天之间无明显差异(p0.05);预处理组轴突计数变化趋势同治疗组,表现为3天、7天、14天之间轴突计数逐渐增加,有显著差异(p0.05),14天、28天之间无明显差异(p0.05)。 4.正常视神经组织中可见Nogo-A mRNA特异性扩增条带,对照组、治疗组及预处理组均可见Nogo-A mRNA特异扩增条带。3天、7天、14天、28天预处理组、治疗组及对照组Nogo-A mRNA与β-actin积分光密度比值均较正常组增高,P0.05,有统计学意义。3天、7天、14天、28天预处理组、治疗组Nogo-A mRNA与β-actin积分光密度比值较对照组低,P0.05,有统计学意义。3天时预处理组Nogo-A mRNA与β-actin积分光密度比值为0.466±0.040低于同时间点治疗组积分光密度比值0.570±0.030,P0.05,有统计学意义,7天、14天、28天时预处理组积分光密度比值较治疗组无明显差异,P0.05,无统计学意义。 5.对照组3天、7天、14天、28天之间Nogo-A mRNA与β-actin积分光密度比值逐渐增加,组内有显著性差异,P0.05,有统计学意义。治疗组3天、7天、14天之间Nogo-A mRNA与β-actin积分光密度比值比较有显著差异,P0.05,有统计学意义,14天、28天之间Nogo-A mRNA与β-actin积分光密度比值比较无显著差异,P0.05,无统计学意义。预处理组视神经Nogo-A mRNA与β-actin积分光密度比值变化趋势同治疗组,表现为3天、7天、14天之间比较有显著差异,P0.05,有统计学意义,14天、28天之间比较无显著差异,P0.05,无统计学意义。 结论: 1.外伤性视神经损伤后视神经组织结构紊乱,神经纤维排列紊乱; 2.牛磺酸可使视神经损伤后大体及超微结构改变减轻,并可抑制Nogo-A mRNA的表达; 3.牛磺酸对视神经损伤后有一定的促再生、修复作用。
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R774.6

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