收藏本站
《河北农业大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63与变铅青链霉菌TK24的原生质体种间融合

刘莲娜  
【摘要】:玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63对多种植物病原真菌和细菌有较强的抑制作用,温室和大田试验表明该菌株的代谢产物对棉花黄萎病和瓜类白粉病有较好的防效作用,其有效成分和作用机理正在研究中。双亲株灭活原生质体融合摆脱了遗传标记给育种工作带来的束缚,使融合子的检出变得直观,是值得推广的一种选育高产菌株的方法。 本文对玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63和变铅青链霉菌TK24的原生质体分别进行热灭活和紫外灭活,在PEG 4000介导下融合,所得“融合子”以棉花黄萎病菌和马铃薯疮痂病菌为指示菌筛选抗生素高产优质菌种,传代培养检测高产“融合子”的稳定性,并观察“融合子”的培养特征和形态特征;利用基因组酶切和可溶性蛋白质电泳验证融合子与亲本的遗传关系;通过摇瓶发酵获得高产融合菌株抗生素粗品的产量,得出增产率;以融合子RH19为代表,采用亲株的发酵培养基对融合子RH19进行摇瓶发酵实验,利用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析融合菌株抗生素粗品。通过玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63与变铅青链霉菌TK24原生质体的种间融合实验,得到了十四株对棉花黄萎病菌和马铃薯疮痂病菌具有抑制作用的融合子,融合子RH19抑菌活性明显强于玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63。经过十次传代发现,融合子的遗传稳定性良好。高产融合子在固体R2YE培养基及液体燕麦培养基上均产生黄绿色色素,并且培养特征和形态特征明显不同于亲株。对基因组DNA进行酶切发现融合子的酶切片段与亲本不同;对“融合子”RH19及亲本的可溶性总蛋白进行了SDS-PAGE分析,发现“融合子”RH19的可溶性总蛋白图谱与双亲有一定的相似性又产生了新的条带;摇瓶发酵实验结果显示融合子粗提抗生素的产量为0.18g/L,而玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63为0.07g/L,增产了159%;TLC和HPLC结果表明此菌株能够产生亲本不能产生的新的次级代谢产物。本研究证实了玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63和变铅青链霉菌TK24之间发生了基因重组。该研究结果为放线菌防治作物病害提供了新资源,具有广泛的应用前景和重要的应用价值。 探索了玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63和变铅青链霉菌TK24的原生质体电击融合方法的可行性,研究结果发现,电击融合并不能得到具有优良性状的融合子,电击条件有待于进一步进行摸索。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S476.1

知网文化
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 Tokumitsu Okamura;廖福荣;;抗生素链霉菌与弗氏链霉菌原生质体的种间电融合[J];国外医药(抗生素分册);1990年04期
2 张瑾阳,李焕娄;细胞电融合技术及其在微生物遗传育种中的应用[J];国外医药(抗生素分册);1993年01期
3 朱振华;胡欣荣;陈五岭;陈亮;;He-Ne激光在异种间原生质体融合中的应用[J];光子学报;2007年01期
4 高炳淼;唐天乐;长孙东亭;罗素兰;;毕赤酵母高效电转化条件的研究[J];中国海洋药物;2010年02期
5 魏明宝;魏丽芳;李军;郑先君;;细胞电融合构建高效蒽降解重组菌株的研究[J];农业环境科学学报;2006年S2期
6 颜念龙;邱思鑫;何红;关雄;胡方平;;原生质体融合构建防病、杀虫和内生多功能工程菌[J];农业生物技术学报;2004年06期
7 王怡平,荚荣,陈伟元,凌芸,徐怀恕;球形红假单胞菌和荚膜红假单胞菌的原生质体融合[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2000年02期
8 余荔华,刘进元,赵南明;克氏固氮菌与枯草芽孢杆菌的原生质体电融合[J];清华大学学报(自然科学版);1999年06期
9 黄勤妮,刘佳,宋秀珍,杨秀山;大肠杆菌和枯草芽胞杆菌的原生质体融合[J];首都师范大学学报(自然科学版);2002年01期
10 汪和睦,汪洲;细胞电穿孔与电融合的机理及应用[J];生物化学与生物物理进展;1994年04期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 邸垫平;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63活性组分的制备及相关基因克隆研究[D];河北农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 梁蕾;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63阻断突变体的筛选及分析[D];河北农业大学;2007年
2 郭艳平;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63诱变菌株的筛选及其活性成分的研究[D];河北农业大学;2007年
3 刘金艳;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63转化体系的建立[D];河北农业大学;2007年
4 丁成翔;水稻稻瘟病害拮抗链霉菌原生质体融合育种研究[D];四川大学;2007年
5 陈丽萍;原生质体融合提高植物内生放线菌抗菌活性[D];西北农林科技大学;2008年
6 孙伟明;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63抗生素生物合成基因相关线性质粒的研究[D];河北农业大学;2009年
7 沈凤英;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63接合转移体系及nsdA基因的研究[D];河北农业大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 牛永东,许丽艳,李恩民;酵母单杂交诱饵质粒pHis-3NF和pLacZ-3NF的构建与鉴定[J];癌变.畸变.突变;2003年01期
2 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
3 李涛,石年,吴又桐,周丽,董洁,王素青,陈亮;Bcl-2在溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡机制中的作用[J];癌变.畸变.突变;2004年05期
4 于雪云;扈进冬;杨合同;;木霉菌抗药性研究进展[J];山东农业科学;2007年06期
5 徐莹莹;杜秉海;丁延芹;王翠翠;王璇;姚良同;;生姜根际姜瘟病拮抗菌的筛选及鉴定[J];山东农业科学;2012年01期
6 史冬燕;程在全;;元江普通野生稻金属硫蛋白基因的获得和序列分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2009年03期
7 张静;;原生质体融合技术及其在微生物育种中的应用[J];安徽农学通报;2008年17期
8 鞠玉栋;郑回勇;吴维坚;陈永快;何炎森;吴松海;;中国水仙MADS-box基因克隆及其序列分析[J];安徽农学通报;2008年21期
9 邢鲲,韩巨才,刘慧平,张姝;辣椒内生放线菌的分离·鉴定和拮抗作用[J];安徽农业科学;2005年05期
10 王国昌;余昊;张育平;;石榴茎窗蛾致病性白僵菌的初步研究[J];安徽农业科学;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 田永强;张荣意;朱中元;;人乳头瘤病毒线性平行杂交分型检测条件的建立及优化[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
2 孙倩云;侯晓坤;;废水中持续性有机物(POPs)处理技术评述[A];四川省环境科学学会二〇一一年学术年会论文集[C];2011年
3 梁权;毛培菊;罗春贞;王缦;;HIV-1跨膜蛋白gp41的截短表达及其免疫反应性[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
4 朱勤勋;严雪;韩友斌;;鼠源IgG抗体F(ab')2片段及Fab片段的制备纯化及其免疫活性研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
5 农向群;吴正铠;;丝状真菌原生质体的分离再生和融合[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
6 张增艳;吕泽勋;穆国骏;李会玉;;苏云金杆菌原生质体制备的新方法[A];杀虫微生物[C];1992年
7 朱美财;占志;王雅静;蔡庆;;刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中的表达及在TPA纯化中的应用[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
8 刘俊莹;张华鹏;王聪聪;张剑峰;;马铃薯卷叶病毒ORF1克隆及序列分析[A];马铃薯产业与科技扶贫(2011)[C];2011年
9 冯琦;孙秉中;赵永同;孙凯;张英起;颜真;韩苇;;Bcr-abl特异性系列核酶载体的构建及初步鉴定[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
10 白玉杰;苏成芳;杨安刚;;抗人CD3单链抗体基因的构建及表达[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年
2 郭爱疆;猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原表位及组织定位的研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年
4 王发明;柚(citrus grandis Osbeck)单染色体AFLP分子标记体系及文库的建立[D];福建农林大学;2010年
5 于蕾;野西瓜极性生物碱A10组分诱导SGC-7901细胞凋亡线粒体通路的研究[D];北京中医药大学;2010年
6 王欣梅;大肠杆菌f2噬菌体分子印迹膜的制备、评价和应用[D];华中科技大学;2011年
7 赵雪倩;维甲酸相关孤核受体α在α-黑素细胞刺激素及其类似物STY39调控树突状细胞成熟中的作用[D];第二军医大学;2011年
8 高尚;组合式白腐真菌反应器处理实际染料废水过程中生态结构和功能解析[D];华东师范大学;2011年
9 张荻;百子莲花芽分化及开花机理研究[D];东北林业大学;2011年
10 罗其花;中国小蜂螨自然种系构成、流行病学调查及寄生生物学研究[D];中国农业科学院;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 韩秀萍;幽门螺杆菌基因敲除方法的建立及其应用研究[D];华中农业大学;2010年
2 陈若雯;高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化[D];华中农业大学;2010年
3 郭俊红;利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 余姣姣;天蓝放线紫红素生物合成上调基因的克隆及其对阿维菌素产量的影响[D];华中农业大学;2010年
5 黄潘;鸡胚性分化早期性别差异表达miRNAs的鉴定及其特性分析[D];华中农业大学;2010年
6 王萍萍;盾壳霉产孢相关基因的克隆及腺苷脱氨酶(CMADA)基因的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 曹晶;风疹病毒(RV)包膜糖蛋白E1特异基因片段的原核表达[D];南京医科大学;2009年
8 王涛;糖皮质激素受体基因转染阿霉素肾病大鼠模型改善糖皮质激素疗效的研究[D];南京医科大学;2009年
9 高岩;拟南芥fad8基因在烟草叶绿体基因组表达研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
10 李艳华;半夏软腐病根际拮抗细菌的筛选及其鉴定[D];浙江理工大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 丰泉;早稻稻瘟病流行原因及对策[J];安徽科技;1998年04期
2 李丽梅;纪明山;王新一;李新;;植物病原真菌拮抗放线菌的筛选[J];安徽农业科学;2006年04期
3 李祥锴,安志东,朱非;林肯链霉菌双亲灭活原生质体融合的研究[J];氨基酸和生物资源;2001年04期
4 丁琳;;复合诱变选育林肯霉素高产菌株[J];氨基酸和生物资源;2006年04期
5 朱非,安志东;链霉菌育种进展[J];氨基酸和生物资源;1998年03期
6 柳长福;复合表面活性剂在硅钢清洗剂中的应用[J];材料保护;2000年12期
7 刘大群,杨文香,祁碧菽,王朝花;拮抗链霉菌Men-myco-93-63及其发酵液对棉花黄萎病菌生长的影响[J];河北农业大学学报;1999年04期
8 魏艳敏,刘大群,田世民,张汀;链霉菌(Strepto myces spp.)对几种蔬菜病原菌的拮抗作用[J];河北农业大学学报;2000年03期
9 张艳;孟庆芳;杨文香;刘大群;李亚宁;张汀;牛昆;;生防菌株Men-myco-93-63发酵培养基优化条件的研究[J];河北农业大学学报;2006年02期
10 陈菲莉,方呈祥,张甲耀;降解系统构建菌的原生质体制备及诱变研究[J];环境科学与技术;2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 张汀;赤国彤;杨文香;孟庆芳;李永亮;祁海霞;刘大群;;Men-myco-93-63链霉菌不同剂型发酵液防治茄子黄萎病的田间小区药效试验研究[A];第二届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 刘二明;水稻品种与稻瘟病菌的遗传多样性及稻瘟病持续控制研究[D];四川农业大学;2001年
2 吴兴泉;福建马铃薯病毒的分子鉴定与检测技术[D];福建农林大学;2002年
3 刘秋;抗真菌生物农药—凯地菌素的研究[D];沈阳农业大学;2002年
4 刘占良;拮抗链霉菌Men-myco-93-63分类学鉴定及其几丁质酶基因研究[D];河北农业大学;2003年
5 邸垫平;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63活性组分的制备及相关基因克隆研究[D];河北农业大学;2006年
6 侯艳华;四株海洋放线菌遗传转化体系的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 吴胜;黑暗链霉菌基因转移系统的研究[D];沈阳药科大学;2001年
2 张莉滟;双歧杆菌与乳杆菌原生质体融合的初步研究[D];重庆医科大学;2002年
3 刘力强;链霉菌几丁质酶基因分子检测及克隆[D];河北农业大学;2003年
4 沈金花;吸水链霉菌10-22的5102-Ⅲ号素生物合成基因簇的定位与克隆[D];华中农业大学;2001年
5 李永亮;链霉菌Men-myco-93-63抗生素的提取纯化及生防制剂的研究[D];河北农业大学;2004年
6 赵志泉;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63发酵液及菌丝中抑菌活性成分分离[D];河北农业大学;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026