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《河北农业大学》 2011年
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头孢菌素C生产菌顶头孢霉HC-4原生质体诱变选育的研究

杜淑涛  
【摘要】:头孢菌素C是由顶头孢霉菌产生的一种β-内酰胺类抗生素,其母核7-氨基头孢烷酸是半合成β-内酰胺类抗生素的重要中间体之一。它在抗生素药物中所占比例逐年上升。半合成头孢类抗生素由于其抗菌谱广和过敏性弱的特点,是临床上广泛使用的消炎、抗菌药物。因此生产规模的扩大和生产水平的提高是各大制药公司竞相追求的目标。菌种的诱变选育为发酵工业提高产量做出了突出贡献。原生质体诱变技术作为一种行之有效的育种方法已经广泛应用于微生物菌种的选育中。 本文以顶头孢霉HC-4为出发菌株,对HC-4的原生质体进行氯化锂-紫外线诱变、微波诱变以获得高产菌株,得到了如下结果: (1)利用酶解法制备顶头孢霉HC-4原生质体并对原生质体再生率进行了考察。取菌龄为120 h的菌丝体,采用1%蜗牛酶和1%纤维素酶混合酶液,酶解温度为30℃,50 r·min-1摇床旋转,酶解3.5 h。以KC溶液作为渗透压稳定剂。制备得到的原生质体浓度为4.62×107个/mL。涂布于原生质体再生平板,原生质体再生率达到10.18%。 (2)对氯化锂-紫外线、微波两种诱变方法的诱变参数及诱变效果进行研究,发现氯化锂-紫外线诱变效果优于微波。氯化锂浓度为0.50%、紫外线照射时间为30 s或60 s时诱变效果最好,正突变率达到了50.00%。 (3)对顶头孢霉HC-4的原生质体进行氯化锂-紫外线诱变、微波诱变,得到121株突变株(其中氯化锂-紫外线诱变得到61株,微波诱变得到60株)。以金黄色葡萄球菌作为指示菌,利用滤纸片扩散法进行筛选,得到45株正突变株,76株负突变株。挑选出13株抑菌活性较高的正突变株进行遗传稳定性考察,其中大部分正突变株传代后抑菌能力大幅下降。正突变株ZW3-17遗传性状稳定,连续传代五次之后,其发酵液抑菌圈面积与出发菌株HC-4的发酵液抑菌圈面积的比值分别为R1:1.314209,R2:1.317152,R3:1.084906,R4:1.200840,R5:1.309286。利用高效液相色谱法测定正突变株ZW3-17发酵液中头孢菌素C效价,其头孢菌素C效价为22.923 g/L,比出发菌株HC-4提高了11.972%,并且遗传性状稳定。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:TQ465.1

【参考文献】
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