枸杞多糖、槲皮素对双酚A致小鼠睾丸损伤的保护作用

【摘要】：本试验主要研究枸杞多糖(LBP)、槲皮素(Que)对双酚A (BPA)致成年小鼠睾丸损伤的缓解作用。通过称量计算脏器系数;光镜检测睾丸病理学改变;试剂盒检测抗氧化能力;酶联免疫法检测血清中各种生殖激素水平的变化等方法,探讨枸杞多糖、槲皮素保护睾丸的生精功能及可能的作用机制,寻找环境雌激素诱导雄性动物生殖损伤的缓解措施。试验分三个部分: 一、BPA对成年小鼠睾丸的损伤作用及机理研究 研究不同剂量的BPA对雄性小鼠生殖系统的损伤作用。将25g左右的雄性小鼠40只,随机分成对照组、BPA 10、20、50、100 mg/kg染毒组,每组10只,连续7 d对小鼠腹腔注射BPA,对照组注射等量的橄榄油,1次/d,染毒结束24h后摘取并称量大鼠睾丸、附睾质量并计算脏器系数;光镜检测睾丸病理学改变;酶联免疫法检测血中睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。结果表明与对照组相比,小鼠睾丸重量、附睾重量及其脏器系数显著降低(P0.05,P0.01);不同剂量BPA组,尤其是高剂量BPA组的曲细精管部分支持细胞与生精细胞分离,生精细胞松散,无规律,各层细胞排列紊乱;随染毒剂量的增加,小鼠血清中T和LH的含量显著降低(P0.05),20、50、100 mg/kg是三个剂量组T和LH的浓度与对照组相比差异极显著(P0.01),因此BPA适合作为研究雌激素对成年雄性小鼠睾丸损伤的模型。 二、LBP对BPA所致睾丸损伤的缓解作用 本试验旨在研究LBP对BPA诱导的成年小鼠睾丸损伤的保护作用。将成年雄性小鼠随机分为5组,除对照组A组外,其余4组的小鼠分别腹腔注射20 mg/kg的BPA,连续7 d,A组小鼠注射等量橄榄油;同时C、D、E组的小鼠分别灌服50、100、200 mg/kg的LBP,A组和B组小鼠灌服等量的生理盐水,连续7 d。处理结束24h后计算睾丸、附睾重量及脏器系数;检测睾丸病理学改变;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的含量;检测血清中睾酮(T)、黄体生成素(LH)和促性腺激素释放激素(GnRH)的水平。结果表明,与BPA模型组比较,LBP各组睾丸质量、睾丸系数、附睾质量和附睾系数及其组织学变化均有改善趋势,其中补充100和200 mg/kg LBP的小鼠变化显著。抗氧化结果显示,LBP各剂量组血清中的SOD、GSH-Px活性均高于BPA组,差异极显著,其中100 mg/kg LBP组抗氧化酶的活性最高,MDA含量随LBP的增加而降低。补充LBP后,血清中T、LH和GnRH的含量均显著增加。结果提示,LBP对BPA导致的小鼠生殖损伤具有显著缓解作用。 三、Que对BPA所致睾丸损伤的缓解作用 Que对BPA致小鼠睾丸损伤的保护作用,并探讨其最佳剂量。方法:50只雄性昆明小鼠随机分为5组,A组(n=10)正常喂饲,B、C、D、E组(各10只)小鼠均腹腔注射50 mg/kg的BPA,1次/d,构建小鼠睾丸损伤模型,同时C、D、E组分别用100、200、400 mg/kg浓度的槲皮素灌胃7天,A组和B组给予等量生理盐水。记录小鼠的一般状况、体征及体重变化和实验结束时睾丸、附睾的重量;试剂盒检测血清中SOD、GSH-Px和MDA的含量;酶联免疫法测定T、LH和GnRH的水平;对睾丸组织进行组织学观察。结果:200mg/kg槲皮素组小鼠体重、各脏器质量均较B组有明显改善(P0.05或P0.01 ),接近A组,C组和E组只有附睾重量变化显著(P0.05);Que各剂量组血清中的SOD、GSH-Px活性均高于BPA组,差异极显著(P0.01),其中D组抗氧化酶的活性最高,MDA结果显示,D组明显降低,差异极显著(P0.01),E组也有所降低,差异显著(P0.05);C、D、E组小鼠血清生殖激素水平均有一定程度的恢复,但D组各生殖激素指标均接近A组;组织学观察见各给药组睾丸生精小管生精细胞层数、精子数目均高于B组,尤以D组200 mg/kg恢复最为明显。结论:Que能够促进BPA致小鼠睾丸生精功能障碍后生精功能的恢复。 总之,本试验通过BPA构建成年雄性小鼠睾丸损伤模型,添加LBP或Que后,明显降低了睾丸组织脂质过氧化水平、提高了雄性小鼠的抗氧化能力,使生殖激素也保持一定的平衡,说明LBP和Que可以有效对抗BPA造成的生精损害,提示LBP和Que均是缓解环境雌激素生殖毒性的有效中药成分。

【关键词】：枸杞多糖 槲皮素 双酚A 小鼠 睾丸 生精损伤
【学位授予单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：S853.7;S858.91
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