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《河北农业大学》 2011年
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核桃LFY同源基因的克隆和表达

何富强  
【摘要】:核桃(Juglans regia L.)是我国重要的经济树种,栽培面积及株数居世界首位。近年来随着生活水平的提高,人们对优质核桃的需求逐年增加。然而漫长的童期严重影响了核桃的早期经济效益。本研究通过克隆花发育过程中的关键基因,研究该基因在核桃各组织的时空表达,构建植物表达载体,旨在为培育缩短童期提早开花的新品种奠定分子基础。主要结果如下: 1.根据LFY同源基因保守序列设计引物,以雄花分化早期‘中林5号’核桃芽cDNA为模板,扩增长为674 bp的一段cDNA片段,以此序列为基础进行3′端和5′端扩增。最终获得1,496 bp的cDNA全长序列,包含1,158 bp的完整的开放阅读框(ORF),54 bp的5′非翻译区,271 bp3′非翻译区及13bp的poly A。将该基因命名为JrLFY(Genebank:GU194836)。 2.将JrLFY ORF与其他物种LFY同源基因内含子/外显子结构比较,设计跨内含子区域引物,以基因组DNA为模板,进行PCR扩增。最后获得完整的JrLFY DNA序列(Genebank:HQ019159),其中包含三个外显子和两个内含子。三个外显子的长度分别为433 bp、362 bp和363 bp,两个内含子的长度分别为545 bp和1,116 bp。 3.该基因编码的JrLFY含有385个氨基酸(Genebank:ACZ48701),推测其分子量为43.15 kDa,等电点为6.78。同源性分析结果表明JrLFY与其他物种LFY同源蛋白高度相似,与山核桃关系最近,相似度达99%。对其氨基酸序列进行生物信息学分析,将JrLFY与山核桃、金鱼草、烟草和拟南芥进行多重比对,在C端只有个别氨基酸不同,保守性很强,可以推测这一区域是该基因功能作用的必需区域。核桃LFY同源基因在5′-N端含有脯氨酸富集区、亮氨酸拉链结构特征,这些结构与大部分双子叶植物LFY同源基因的结构相似,这几个结构特点也是转录因子的特征。因此,JrLFY基因也可能具有转录因子的功能。 4.以18S rRNA作为内参基因,采用RT-PCR半定量分析研究核桃JrLFY组织特异性表达。核桃芽中JrLFY的表达量在雌花生理分化期比雄花生理分化期高,而嫩茎和叶中JrLFY基因表达量在雌雄生理分化期没有明显差异;在所采集的核桃各组织中JrLFY基因均有表达,芽、雄花序和雌花表达量高,嫩茎中表达次之,叶中表达最少;JrLFY在各树龄核桃组织中均有表达,不同树龄差异不明显,各树龄核桃芽在雌花生理分化期比雄花生理分化期表达量高,而不同树龄一年生枝和叶中JrLFY基因表达量在雌雄生理分化期没有明显差异。 5.通过In-Fusion技术构建了高效的pRI 101-AN·JrLFY表达载体,在农杆菌GV3101介导下转入拟南芥,通过双抗生素筛选,每个培养皿可获得20~40株转化植株,转化效率可以达到1%~2%。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S664.1

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 宋艳波;梅霞;吴国良;牛洪斌;;核桃芽总RNA提取及RT-PCR[J];农学学报;2012年07期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘晓菊;洪海波;李敏;刘媛;杨克强;;改良CTAB法提取核桃总RNA试验[J];山东农业科学;2008年01期
2 韩其谦;杨文衡;;核桃雌花分化及其发育动态的观察[J];河北农业大学学报;1985年02期
3 夏雪清;郗荣庭;;核桃雌花芽的生理分化和形态分化时期[J];河北农业大学学报;1989年01期
4 荣瑞芬,郗荣庭;核桃疏雄对树体营养和水分的影响[J];河北农业大学学报;1990年04期
5 刘静;邵建柱;徐继忠;李湘利;郭文武;;农杆菌介导法将LFY基因导入苹果的研究[J];河北农业大学学报;2006年03期
6 曾黎辉,吕柳新;LEAFY基因转化荔枝获得再生植株[J];福建农业大学学报;2001年04期
7 马月萍,戴思兰;植物花芽分化机理研究进展[J];分子植物育种;2003年04期
8 王勇,吴国良,李登科,杨凯,郝炳伟;核桃树体内酚类物质含量的变化[J];果树学报;2003年04期
9 许锋;蔡荣;陈柳吉;常杰;程水源;;核桃不同组织高质量总RNA的提取方法(英文)[J];果树学报;2008年03期
10 何新华;郭永泽;张利;李杨瑞;;金柑LEAFY同源基因克隆与全序列分析[J];广西农业生物科学;2007年04期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 张建业;银杏LEAFY同源基因的分离克隆及其相关基础研究[D];浙江大学;2002年
2 王正加;山核桃分子标记与开花基因CcLFY及其启动子克隆的研究[D];北京林业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 董硕;核桃雌雄性别分化生理特性研究[D];河北农业大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘晓菊;洪海波;李敏;刘媛;杨克强;;改良CTAB法提取核桃总RNA试验[J];山东农业科学;2008年01期
2 马丽;;两种快速提取甘薯块根总RNA的方法[J];山东农业科学;2008年06期
3 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期
4 李利斌;李化银;刘国明;刘立锋;高建伟;;大白菜LEAFY新基因BrLFY1的生物信息学解析[J];山东农业科学;2009年10期
5 任志伟;陈运起;刘世琦;高莉敏;;环境与内源激素对蔬菜抽薹的影响[J];山东农业科学;2009年12期
6 杨晨;徐凤花;单世华;刘宇;李春娟;张廷婷;闫彩霞;;花生子叶RNA提取方法比较与分析[J];山东农业科学;2011年01期
7 卢海敏;高廷旺;单世华;王英华;;植物开花相关基因研究进展[J];安徽农业科学;2008年05期
8 孔冬梅;;激素对高等植物性别分化的调控研究进展[J];安徽农业科学;2009年12期
9 董章慧;张立军;崔震海;汪澈;阮燕晔;;糖对植物成花的调节[J];安徽农业科学;2009年25期
10 王琳琳;孙荣生;戴思兰;;甘菊无土栽培基质试验分析[J];安徽农业科学;2009年29期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张蒙蒙;王永清;严娟;陶炼;;枇杷成花基因研究进展[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
2 刘晓华;张英杰;陈丽娜;吴沙沙;焦雪辉;吴锦娣;吕英民;;观赏植物成花基因研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 陈晓丽;刘凤栾;郗琳;杨会芳;阿布都热扎克·依沙克;李俊香;马男;赵梁军;;观赏植物生物技术研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
4 任洪艳;孙霞;郑成淑;束怀瑞;;利用cDNA-AFLP技术筛选菊花开花相关基因[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
5 彭芳;田敏;王彩霞;龚茂江;;文心兰花芽的解剖结构及组织化学研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
6 尹宝重;张月辰;陶佩君;尹淑丽;邓小鹏;;苗期不同叶龄红小豆对短光照诱导的生化响应[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
7 尹宝重;张月辰;陶佩君;尹淑丽;邓小鹏;;红小豆苗期不同叶龄光周期诱导对开花的影响[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
8 潘凯;奥岩松;王利民;赵金芳;;不同日长条件下晚抽性大白菜发育过程中植株体内蛋白质变化[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
9 陈海江;徐继忠;李晓东;王艳辉;;外源多胺对核桃雌花芽生理分化期内源激素的影响[A];第三届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];2003年
10 姚春潮;王西芳;刘旭峰;龙周侠;;猕猴桃品种选育研究进展[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年
2 王延玲;新疆红肉苹果红色发育机理的初步研究[D];山东农业大学;2011年
3 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
4 刘玉博;细胞分裂素和生长素调控拟南芥体细胞胚根端分生组织建立的分子基础[D];山东农业大学;2011年
5 孙宇涵;秋水仙素诱导银杏2n雄配子低得率的机理研究[D];北京林业大学;2011年
6 龙茹;湖北大老岭落叶阔叶林群落结构和植物性系统多样性研究[D];北京林业大学;2011年
7 林小涵;银杏和木兰属植物的转录组、叶绿体基因组及其相关研究[D];北京协和医学院;2011年
8 官华忠;水稻包穗的遗传研究[D];福建农林大学;2011年
9 艾育芳;早晚熟油菜成花机理的初步研究[D];福建农林大学;2011年
10 徐军;外来入侵植物—少花蒺藜草的分布与生物学特性研究[D];内蒙古农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
2 李红莲;早实枳TFL1/CEN同源基因的表达分析及功能特征[D];华中农业大学;2010年
3 丛倩倩;二穗短柄草的遗传转化及INDETERMINATE1基因的克隆[D];山东农业大学;2010年
4 孙翠;核桃(Juglans regia L.)坚果仁维生素E含量分析及jrMPBQ基因克隆[D];山东农业大学;2010年
5 王京梅;叶籽银杏叶生雌性生殖器官发育相关基因的克隆与序列分析[D];山东农业大学;2010年
6 任志伟;大葱抽薹机理与调控技术研究[D];山东农业大学;2010年
7 曲益涛;栝楼性别转化的RAPD-SCAR标记研究[D];安徽农业大学;2010年
8 蔡中芳;四季花龙眼花芽分化期营养动态变化的研究[D];甘肃农业大学;2010年
9 王钰;光皮桦天然林木材纤维性状变异及Bl4CL基因克隆[D];浙江农林大学;2010年
10 陈喜;矮生杉木解剖构造及CCR和CesA1基因克隆的研究[D];浙江农林大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘晓菊;洪海波;李敏;刘媛;杨克强;;改良CTAB法提取核桃总RNA试验[J];山东农业科学;2008年01期
2 李晓毓;赵德刚;李丰伯;;一种适用于木本植物RNA提取的方法[J];安徽农学通报;2007年23期
3 史成颖;宛晓春;江昌俊;孙俊;;提取高质量茶树总RNA的方法研究[J];安徽农业大学学报;2007年03期
4 许平;车代弟;王金刚;龚束芳;樊金萍;;观赏山梨叶片总RNA的提取及质量分析[J];东北农业大学学报;2008年03期
5 庄军平;苏菁;陈维信;;一种从香蕉果实提取高质量RNA的方法[J];分子植物育种;2006年01期
6 姚玉新,赵玲玲,郝玉金,翟衡;改良热硼酸法高效提取苹果果实RNA[J];果树学报;2005年06期
7 许锋;蔡荣;陈柳吉;常杰;程水源;;核桃不同组织高质量总RNA的提取方法(英文)[J];果树学报;2008年03期
8 陈建;;几种提取杜仲RNA方法的比较[J];林业科技开发;2007年05期
9 胡根海;喻树迅;;利用改良的CTAB法提取棉花叶片总RNA[J];棉花学报;2007年01期
10 尹慧;陈莉;李晓艳;陈秋明;义鸣放;;百合叶片总RNA提取方法比较及优化[J];中国农业大学学报;2008年04期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 凌经球,刘孝云,陆伦东,丁亚斌;歙县山核桃生产现状、问题与改进措施[J];安徽农学通报;2000年02期
2 祝学范,祝学龙;金寨县山核桃资源调查及开发前景[J];安徽农业科学;2001年05期
3 杨其光 ,杜国华 ,任立中;板栗花性别分化的研究——Ⅰ、乙烯利和尿素对板栗性别表現的作用[J];安徽农学院学报;1981年01期
4 魏胜林,刘业好,王家保,屈海泳;PP_(333)对菊花生长开花及褐斑病抗性的影响[J];安徽农业大学学报;2001年04期
5 胡蕙露,胡翠玲,杨枝发;银杏茎段组织培养正交试验[J];安徽农业大学学报;1997年02期
6 孙文全;;植物激素分布、相互作用及平衡关系对果树花芽分化影响[J];北方园艺;1989年Z2期
7 桂仁意,曹福亮,沈惠娟,谢寅峰;石竹试管苗成花与多胺代谢的研究[J];北京林业大学学报;2003年02期
8 刘建斌,陈新露,方海,张云芳;用银染方法分析RAPD产物[J];北京农学院学报;1996年02期
9 叶向斌,张晚风,谭光营;NAA和IBA对菊花生长发育和花期的影响[J];北京农学院学报;1998年04期
10 许卉;蓝光对菊花生长和开花的影响[J];滨州教育学院学报;2000年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 张建业;银杏LEAFY同源基因的分离克隆及其相关基础研究[D];浙江大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 李晓东;多胺在核桃雌雄花芽孕育和分化中的作用研究[D];河北农业大学;2002年
2 黄晓德;农杆菌介导铁相关基因转化苹果的研究[D];南京农业大学;2002年
3 马良;东方梨生理活性成分的HPLC分析研究[D];河北农业大学;2004年
【相似文献】
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1 王玲平,曹家树,叶纨芝,向珣,余小林;十字花科植物CYP86MF同源基因的克隆及特征分析[J];农业生物技术学报;2005年02期
2 郭长禄,陈力耕,何新华,戴正,袁海英;银杏LEAFY同源基因的时空表达[J];遗传;2005年02期
3 彭金彪;韩宏晓;洪炀;王艳;郭凡吉;石耀军;傅志强;刘金明;程国锋;林矫矫;;日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析[J];生物工程学报;2010年03期
4 付满良,李惠,武梅,王丽焕,吴凯源,宁健可,高荣;牦牛白细胞介素2(IL2)基因cDNA的分子克隆和表达研究(英文)[J];四川动物;2005年04期
5 常泓;南庆贤;岳文斌;;UK114基因的克隆和表达载体的构建[J];山西农业大学学报(自然科学版);2006年01期
6 徐志本;余为一;仲大莲;李槿年;周杰;;鸡MHCⅡβ链基因的克隆和表达及其抗体制备[J];安徽农业大学学报;2006年01期
7 李楠;孙一敏;赵宝华;;鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究[J];生物工程学报;2006年03期
8 陆秀君;郝会海;宋萍;杜克久;李国勋;;苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白vip3A-LS1基因的克隆与表达[J];农业生物技术学报;2007年05期
9 王全伟;曲敏;张海玲;徐香玲;;菜豆几丁质酶基因Bchi的克隆及其在转基因烟草中的表达[J];分子植物育种;2008年01期
10 廖威;陈维春;贾艳华;庞义;;苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析[J];微生物学报;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曹秋芬;孙海峰;孟玉平;;板枣LEAFY同源基因的分子克隆初报[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
2 张可浩;傅玉才;章家新;;单细胞原生动物阴道毛滴虫中沉默信息调节因子2同源基因克隆及其原核表达[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
3 贝锦新;末武弘章;菊池潔;铃木譲;林浩然;;鱼类白细胞介素(IL)-15同源基因的克隆及其功能分析[A];第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会论文集[C];2005年
4 倪为民;陈晓亚;卫志明;许智宏 ;薛红卫;;生长素极性运输相关的芥菜pin1同源基因的克隆[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
5 宋虎卫;;枇杷成花相关基因EJTFL1 cDNA的克隆与表达特性研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
6 高志红;陈素梅;安藤敏夫;侯计华;章镇;;果梅雌蕊调控基因AGAMOUS同源基因的克隆及表达分析[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
7 叶春秀;牛建新;;新疆核桃LFY同源基因的克隆与特征分析[A];中国园艺学会2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
8 曹家树;王玲平;叶纨芝;向珣;余小林;;CYP86MF同源基因的克隆及特征分析[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
9 商璇;何焱;何春江;张雷;陈波;杨潇;程汉华;周荣家;;黄鳝S100同源基因的克隆和表达分析[A];湖北省遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2004年
10 张颖;石静;朱常香;郭兴启;;心叶烟NPR1同源基因(NgNPR3)的克隆、表达特点及抗病功能分析[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 汪敏华;养老鼠,能否成产业?[N];解放日报;2006年
2 杨焕明;人类与水稻基因组测序与分析[N];科技日报;2002年
3 紫箕 花林;糖式“特洛伊木马”力克癌症[N];医药经济报;2006年
4 本报记者 邹学润;云南野生稻研究取得重大突破[N];云南科技报;2007年
5 洪敏;细胞凋亡研究引人关注[N];中国医药报;2008年
6 湖北省肿瘤医院 徐崇明;浅谈癌症的基因治疗[N];湖北科技报;2001年
7 李菲;EPO“黄金时代”来临[N];医药经济报;2006年
8 ;细胞工程实验室 细胞生物和肿瘤[N];科技日报;2000年
9 记者 刘志伟通讯员 夏杨;我国第一个杀蚊微生物全基因组测序完成[N];科技日报;2008年
10 董映璧;人体乳腺癌病毒源自老鼠[N];科技日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 何富强;核桃LFY同源基因的克隆和表达[D];河北农业大学;2011年
2 萧莅勍;大鼠附睾特异抗菌肽Bin1b及其在小鼠中的同源基因的表达特性及功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
3 孟庆长;大豆GmNAC和GmLFY转录因子编码基因的克隆、鉴定和种子性状的QTL定位研究[D];南京农业大学;2006年
4 陈绍春;早衰小鼠P8(SAMP8)额叶脑衰老相关人鼠同源基因筛选及功能研究[D];昆明医学院;2010年
5 查幸福;家蚕(Bombyx mori)性别决定网络及其关键基因BmSxl的cDNA克隆和功能研究[D];西南大学;2006年
6 王玲平;十字花科植物CYP86MF同源基因的结构、功能及进化关系的研究[D];浙江大学;2004年
7 张建业;银杏LEAFY同源基因的分离克隆及其相关基础研究[D];浙江大学;2002年
8 王万能;Rhodobacter sphaeroides puc2BA的功能及Rhodovulum sulfidophilum pucsBA在Rhodobacter sphaeroides中的异源表达研究[D];重庆大学;2008年
9 范净;柑橘转GFP、AP1和LFY基因植株群体的分子鉴定与基因表达研究[D];华中农业大学;2010年
10 周盛梅;苹果和草莓APETALA2同源基因的克隆以及皇家嘎啦苹果的转化[D];山东农业大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙颖;油桐LFY同源基因的克隆及花芽分化生理基础研究[D];中南林业科技大学;2008年
2 彭细桥;番茄高效离体再生体系的建立与番茄COI1同源基因的转化[D];湖南农业大学;2005年
3 朱娜;龙眼LFY同源基因表达及启动子克隆[D];福建农林大学;2010年
4 郑萍;大白菜PHK4基因的克隆和序列分析[D];辽宁师范大学;2008年
5 詹菁;百合AGAMOUS同源基因的克隆、载体构建及遗传转化[D];华中农业大学;2010年
6 李宗恩;鸡TMEM9B同源基因的克隆及Akirin2基因的免疫功能研究[D];哈尔滨师范大学;2012年
7 过聪;梅花CBF/DREB1同源基因的克隆和功能的初步分析[D];华中农业大学;2010年
8 蒋丽;植物LrgB同源基因调控程序性细胞死亡的初步研究[D];浙江大学;2012年
9 丁峰;荔枝FLOWERING LOCUS T (FT)同源基因的克隆及功能研究[D];广西大学;2012年
10 王弋;雷竹中CO/FT同源基因的克隆及表达特性研究[D];浙江农林大学;2010年
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