收藏本站
《河北农业大学》 2012年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

兔抗ES细胞免疫血清对附植前小鼠胚胎的作用

胡春超  
【摘要】:目前,四倍体胚胎补偿技术(Tetraploid Embryos Complementation)被广泛的应用到小鼠克隆之中。但是,与同一时期的二倍体胚胎相比,四倍体胚胎的细胞数目要少一半,而且发育能力要弱。因而,我们希望制作一种没有ICM(内细胞团)的二倍体胚胎来提高这种补偿技术的效率。 小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem cells,ES细胞)是从附植前内细胞团(Inner cell mass,ICM)经体外抑制分化培养而分离。收集大量的小鼠ES细胞,并将其与佐剂乳化,注射到兔子体内,收集抗血清培养小鼠附植前胚胎。有可能会抑制ICM的生长。 用KSOM小鼠胚胎培养基稀释兔抗血清,分别稀释至50倍、100倍、200倍,结果显示:形态学上50倍稀释的血清能够抑制8cell胚胎的发育甚至使其死亡;100倍稀释的抗血清能够延迟8cell胚胎的致密化,并使得胚胎在囊胚化过程中出现空泡化的现象;200倍稀释的抗血清作用不明显。未作免疫处理的兔血清与空白对照组无差异。试验过程中我们发现:兔抗小鼠ES细胞血清能够阻止小鼠胚胎卵裂期的致密化,培养8h发现胚胎致密化效率降低70%;将致密化的胚胎置于抗血清中培养,胚胎会发生去致密化;延长的去致密化胚胎超过32cell后,进一步在抗血清中培养,囊胚的畸形率增加。 在抗血清中持续培养之后,胚胎在囊胚化的过程中会出现两种类型的胚胎:(1)空泡化,胚胎内部没有清晰的囊胚腔,也不包含明显的ICM,而是出现数个流动性的液泡;(2)真囊胚,这类胚胎表现出正常的形态特征。将这两种类型的囊胚移植到2.5dpc的假孕母鼠体内,10天后处死,统计附植情况发现空泡化胚胎和形态正常的胚胎附植率与对照组相比都表现差异极显著(p0.01),但空泡化的附植率与形态正常胚胎附植率相比差异不显著(p0.05)。但即使是附植成功的胚胎,在第十天之前许多胎儿明显已经退化了,只留有未吸收完的组织团块,这些组织团块类似于早期的胎盘。 在8cell胚胎培养到60h后,对试验组和对照组胚胎进行Hochest33342染色,计数细胞数显示,抗血清处理组细胞数显著下降(p0.01)。 胚胎接种试验结果显示,抗血清处理后的胚胎Outgrowth的生长率显著低于对照组,且Outgrowth的形态表现得更分散、立体性不强、面积较小、边缘不够整齐。血清处理组中有极少的一部分胚胎接种后只有滋养层细胞长出,而没有ICM。 对Outgrowth的碱性磷酸酶染色和胚胎多能性因子Oct4的免疫荧光染色显示,抗血清培养后的胚胎依旧存在多能性因子,即仍然有ICM的存在,但ICM的数量减少,在胚胎中的分布也明显变得无序。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S865.13

【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 闫益波;叶绍辉;邓艳美;;家畜胚胎体外生产技术[J];山东农业科学;2006年03期
2 夏丰;苏雷;;卵母细胞成熟及其成熟调控因子[J];中国牛业科学;2008年01期
3 卞江涛;倪明;胡高博;赵鑫;吕自力;卢全晟;薛利;宋彦军;张居农;;不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响[J];中国草食动物;2010年01期
4 李清;;卵母细胞去核方法及其对卵母细胞发育的影响[J];山东畜牧兽医;2007年06期
5 朱亮;章孝荣;刘亚;陶勇;;一氧化氮与卵母细胞发育[J];动物医学进展;2010年02期
6 蔺国珍;樊江峰;余四九;;牦牛妊娠期卵巢、卵泡及黄体的形态学观测[J];甘肃农业大学学报;2006年01期
7 任冬仁,陈从英,黄路生;精子膜蛋白的研究进展[J];中国畜牧兽医;2004年11期
8 赵艳娇;常青;姜怀志;;辽宁绒山羊胎儿发育的初步研究[J];中国草食动物科学;2012年05期
9 李和平;邹琦;商兰;刘伟石;;钙离子载体诱发马鹿精子顶体反应效果[J];东北林业大学学报;2014年01期
10 徐伟;陶勇;朱亮;白海;陈宏权;;早期胎猪的生长发育及其与胎龄的相关性分析[J];黑龙江动物繁殖;2009年04期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 卞江涛;倪明;胡高博;赵鑫;吕自力;卢全晟;薛利;宋彦军;张冰;张居农;;不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
2 卞江涛;倪明;胡高博;赵鑫;吕自力;卢全晟;薛利;宋彦军;王国旗;张冰;张居农;;不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响[A];《2009中国牛业进展》论文集[C];2009年
3 齐艳萍;李和平;崔凯;;鹿卵母细胞体外培养与体外受精的超微结构研究[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
4 赵艳娇;常青;姜怀志;;辽宁绒山羊胎儿发育初步研究[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2012年
5 李和平;邹琦;商兰;刘伟石;;A23187诱发马鹿精子顶体反应效果的研究[A];2012中国鹿业进展[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李波;内质网分子伴侣与小鼠脑发育的关系[D];中国医科大学;2003年
2 宋晓平;小鼠胚胎干细胞定向诱导分化成骨细胞研究[D];西北农林科技大学;2003年
3 林峰;枯草杆菌生物素操纵子基因的克隆、序列改造及功能表达研究[D];西北农林科技大学;2003年
4 马保华;Aroclor 1254对小鼠生殖毒理的研究[D];西北农林科技大学;2003年
5 姜广建;hrg-1基因表达与功能研究[D];河北医科大学;2004年
6 权赫梅;蛋白激酶在小鼠卵母细胞减数分裂成熟、受精和早期胚胎发育的作用[D];大连医科大学;2004年
7 赵卓;东北四平地区蝗虫配子发生及原癌基因c-kit特异性表达的生殖生态学研究[D];陕西师范大学;2005年
8 张建新;牛完全体外生产胚胎及胚胎性别鉴定取样方法研究[D];山西农业大学;2005年
9 杜立银;热应激对小鼠附植前早期胚胎发育影响的研究[D];东北农业大学;2005年
10 赵永聚;精子因素对精子载体法制备转基因山羊影响的研究[D];第三军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 阿拉达尔;绵羊卵巢发生中组织结构及细胞凋亡的研究[D];内蒙古农业大学;2002年
2 张琇;牛卵母细胞孤雌激活与体外受精[D];西北农林科技大学;2002年
3 刘亚;黄牛体细胞-家兔卵母细胞种间核移植研究[D];安徽农业大学;2002年
4 蔡令波;猪卵母细胞体外成熟与冷冻保存的研究[D];南京农业大学;2002年
5 于玲珠;小鼠和猪成纤维细胞培养方法及细胞周期调控的研究[D];东北农业大学;2003年
6 赵会敏;眼镜蛇(Naja naja)胃肠道的显微、亚显微结构及内分泌细胞的免疫组织化学定位[D];广西大学;2003年
7 翟丹梅;树鼩人工繁育及其相关胚胎生物技术的研究[D];广西大学;2003年
8 刘宇;低分子量羊胎免疫调节因子质量标准的初步研究[D];西南师范大学;2003年
9 王旭光;绵羊卵母细胞体外成熟和孤雌激活的研究[D];新疆农业大学;2003年
10 郭宪;牛卵母细胞体外成熟与体外受精的研究[D];甘肃农业大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 潘庆杰,韩行敏;动物胚胎附植的机理及其在畜牧业中的指导作用[J];内蒙古畜牧科学;1996年01期
2 张富春;家畜附植过程中的局部免疫保护机理[J];动物学杂志;1996年01期
3 王水莲,薛立群,贺建华,袁安文,唐红星,向建州;附植前后兔子宫和胚胎总蛋白含量的变化[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2002年02期
4 陈东宝;早孕相关性血小板减少及其在家畜繁殖中的意义[J];草食家畜;1988年02期
5 龙继蓉,蒋必光;影响家兔胚胎成活率的因素[J];中国养兔杂志;1996年06期
6 Bruce D.Murphy,王恒;水貂胚胎的存活[J];经济动物学报;1985年04期
7 杨在清;家畜早期胚胎分泌因子及其意义[J];动物医学进展;1995年02期
8 王水莲,薛立群,刘进辉,袁安文,许道军;附植前后不同时期兔子宫蛋白质的特异性[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2005年03期
9 王水莲,薛立群,陈小军;干扰素对附植前后哺乳动物妊娠识别与维持的作用[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2005年04期
10 朱猛进,丁家桐,刘红林;一氧化氮(NO)对动物妊娠生理的调节[J];贵州畜牧兽医;2000年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 靳亚平;王爱华;马勇江;;妊娠早期山羊子宫局部细胞因子检测[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
2 裴国凤;刘国祥;胡征宇;;云南高原湖泊沿岸带底栖藻类群落的分布[A];中国海洋湖沼学会藻类学分会第七届会员大会暨第十四次学术讨论会论文摘要集[C];2007年
3 李兴坤;魏殿辉;梁志峰;;对直肠检查发现问题的牛及时进行治疗并配种不影响受胎率[A];中国奶牛协会2007年会论文集(上册)[C];2007年
4 刘艳;黄海军;高其双;蒋思文;;山羊类ES细胞的分离与培养[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
5 陈晓;任倩;杨珣;王爱国;傅金恋;;猪MUC1基因多态性与产仔数关系的研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
6 李勇;吴德;方正峰;郭海燕;郑爱荣;张果;;营养水平对妊娠早期母猪免疫状况及胚胎存活的影响[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
7 吴纪华;陈慧丽;;外来植物互花米草对土壤线虫群落的影响及其机制[A];第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2007年
8 黄江南;赵书红;朱猛进;张总平;余梅;;猪ISG15基因在子宫内膜组织中的表达以及与繁殖性状的关联分析的研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
9 雷霆;夏涛;甘莉;袁继红;朱意;陈小东;杨在清;;家兔早期胚胎LIF基因表达与母体子宫的应答效应[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
10 喻林华;薛立群;袁安文;许道军;向建洲;刘扬;;小鼠附植前胚胎发育过程中nNOS and iNOS mRNA的表达[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 迁西县畜牧水产局 陈秀茹;试试用孕酮防治奶牛习惯性流产[N];河北科技报;2008年
2 周彬;孕产母猪的保健[N];中国畜牧兽医报;2007年
3 河北远征药业 周彬;孕产母猪保健方案①[N];河北农民报;2007年
4 侯小俊;猪各阶段饲养管理与预防保健方案[N];中国畜牧兽医报;2009年
5 陈德胜;妊娠母猪的饲养管理[N];山东科技报;2004年
6 河南省周口地区畜禽改良站 欧广志;单方治牛羊宫寒不孕[N];中国畜牧水产报;2000年
7 董以爱 黄爱连 王景彩;鹅病毒性肝炎的诊治[N];中国畜牧水产报;2001年
8 童红卫 刘全;夏秋养鸡防热应激[N];农民日报;2003年
9 陈继成;树石盆景的通孔深植[N];中国花卉报;2004年
10 张金平;饲养妊娠母猪抓好两个关键期[N];山西科技报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 王红芳;瘦素在猪胚胎附植中的功能及其信号通路的研究[D];中国农业大学;2014年
2 杜立银;热应激对小鼠附植前早期胚胎发育影响的研究[D];东北农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈海燕;用分子鉴定方法对岩礁海藻附植动物多样性和生态学的探索研究[D];中国海洋大学;2010年
2 王敏;附植藻类对太湖流域常见沉水植物的影响研究[D];南京信息工程大学;2013年
3 胡春超;兔抗ES细胞免疫血清对附植前小鼠胚胎的作用[D];河北农业大学;2012年
4 张高英;妊娠早中期大白猪与梅山猪子宫免疫特征研究[D];华中农业大学;2009年
5 屠迪;牦牛子宫内膜腺上皮和基质细胞的分离培养和鉴定[D];甘肃农业大学;2006年
6 温晓辉;遗传背景对小鼠四倍体胚胎发育的影响[D];河北农业大学;2008年
7 喻林华;小鼠早期胚胎发育过程中iNOS和nNOSmRNA的表达[D];湖南农业大学;2004年
8 李勇;营养水平对妊娠早期母猪和胚胎免疫力的影响[D];四川农业大学;2008年
9 杨美玖;氨氮浓度对太湖附着藻类的定植及演替的影响[D];南京信息工程大学;2012年
10 兰杰;牛的成熟配子,体外受精胚以及克隆胚中多能性相关基因5'端区域的甲基化模式[D];西北农林科技大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026