收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

禽白血病病毒B、E和J亚群基因芯片检测方法的建立

张悦  
【摘要】:近年来鸡淋巴白血病(AL)一直危害着我国的养鸡业,已成为影响我国蛋鸡业的第一大疫病。由于常规实验室检测方法费时费力,进口ELISA试剂盒价格高昂且准确率并不理想,所以急需一种快速、灵敏、准确、高通量的检测方法来预防和控制AL发生和传播。本研究基于多重PCR技术,建立禽白血病病毒(ALV)的B、E、J亚群的基因芯片分型和检测方法。 根据NCBI已收录的ALV三个亚群的参考毒株cDNA序列,在各亚群特异性基因突变区,两端选取其保守区域,设计合成三个亚群的通用上游引物1条,以及B、E亚群的通用下游引物和J亚群下游引物各1条,将上述引物用Cy3标记,建立多重PCR体系;参考目的序列内部的三个亚群各自的保守区域,选择亚群之间基因突变位点多的区域,设计5条寡核苷酸探针,合成过程中在每条探针的5’端先加入若干个碱基T,使探针长度达到35mer左右,再进行氨基化修饰,将合成好的探针点制在醛基化玻璃基片上,制作寡核苷酸探针基因检测芯片;以寄主细胞DF-1中提取传代ALV的cDNA,以及合成NCBI收录的各亚群参考毒株的cDNA序列作为检测模板,利用Cy3标记的PCR扩增产物,与基因芯片进行杂交反应,扫描结果。对基因芯片进行特异性、灵敏度实验,并对50份临床样品进行检测。 经杂交反应后,芯片能够准确检测并分型三个亚群的参考毒株,其检测灵敏度能够达到10~2个基因拷贝,能够同时检测到三个亚群参考毒株的多重PCR产物,且与禽类常见的四种病毒均无交叉反应。对临床样品检测的结果与ELISA抗体检测结果相比符合率高。本研究结果证明,基因芯片技术是一种有效地对ALV的B、E和J亚群进行检测和分型的方法,且具有较高的特异性和灵敏度,为今后在临床应用中快速鉴别诊断ALV等免疫抑制病提供可行性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄兴国;;禽白血病的检测与净化研究进展[J];畜禽业;2011年04期
2 卢云博;;专家剖析禽白血病的发病原因及防控方案[J];北方牧业;2010年07期
3 秦红丽;朱明艳;;禽白血病病毒J亚群在我国的流行现状[J];畜牧兽医科技信息;2009年12期
4 刘超男;;致血管瘤型J亚群禽白血病病毒的基因组序列分析[J];中国病理生理杂志;2010年10期
5 刘公平,赵振芬,刘福安;禽白血病病毒研究进展[J];中国兽医学报;2000年06期
6 张胜斌;吴天威;吴丹;韦平;崔治中;吕礼芳;全琛宇;冯世文;玉赵平;王广仁;;广西三黄鸡禽白血病流行病学的调查[J];广西畜牧兽医;2010年01期
7 仇钰;;禽白血病的诊断与防制[J];今日畜牧兽医;2010年12期
8 肖凡;;肉鸡J亚型淋巴白血病的预防与净化[J];中国家禽;2006年24期
9 罗明星;周碧君;汪德生;史开志;杨峰;李永明;;禽白血病的PCR检测[J];黑龙江畜牧兽医;2009年07期
10 刘公平,赵振芬,刘福安;A亚群禽白血病病毒囊膜基因gp85片段在大肠杆菌中的表达[J];中国病毒学;2001年03期
11 祝丽;张玲娟;;禽白血病病毒与免疫抑制[J];山东畜牧兽医;2008年12期
12 唐顺发;;马立克氏病疱疹病毒对反录病毒诱导鸡的淋巴白血病加剧作用[J];上海畜牧兽医通讯;1993年02期
13 王全胜;闫强;敖日格勒;;禽白血病研究进展[J];兽医导刊;2007年03期
14 祝丽;张玲娟;孙磊;;禽白血病病毒与免疫抑制[J];中国动物检疫;2009年04期
15 蔡丽娅;秦爱建;;我国禽白血病病毒生物学特点及其控制[J];中国兽药杂志;2009年11期
16 高玉龙;王笑梅;;禽白血病的防治[J];畜牧兽医科技信息;2010年01期
17 金志强;罗明星;李永明;汪德生;史开志;;单管套式PCR检测外源性禽白血病病毒[J];动物医学进展;2009年11期
18 陈晨,曹红,金英杰,雷霆,庞平,刘海霞,宋铁彬,陈福勇;禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化[J];中国预防兽医学报;2005年06期
19 殷方芝;陶军;马玉玲;黄忠;朱兰;;禽白血病的病原学特征和国内流行现状[J];上海畜牧兽医通讯;2011年01期
20 刘宏霞;;禽白血病诊断技术概述[J];畜禽业;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨玉莹;叶建强;赵振华;秦爱建;顾玉芳;;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
2 刘功振;张洪海;刘青;邱波;王峰;王晓伟;陈洪博;成子强;;感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出B亚群禽白血病病毒[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
3 王彦军;孙淼;曹红;陈福勇;;禽白血病病毒自然感染及抗体变化动态规律[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
4 刘青;成子强;;禽白血病病毒跨膜蛋白在膜融合及免疫抑制中的作用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
5 李中明;王景艳;张青婵;赵冬敏;崔治中;马诚太;王丽;;某进口蛋用型祖代鸡群禽白血病病毒感染状态的持续观察[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
6 周碧君;毛君婷;罗明星;王开功;文明;程振涛;;贵州省禽白血病病毒不同亚群感染情况调查研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
7 顾小雪;韩雪;蔡林;张硕;李晓霞;汪葆玥;遇秀玲;翟新验;;血管瘤型J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
8 王林山;尹燕博;徐守振;郭妍妍;吴珊珊;胡永新;;鸡J亚群禽白血病病毒与七种常见病毒混合感染调查[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
9 范书才;李虹;肖睿;;禽白血病病毒分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
10 王建新;崔治中;张纪元;王增福;陈本龙;王锡乐;;J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒共感染对肉鸡生长和免疫功能的抑制作用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
3 张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
4 付朝阳;J亚群禽白血病病毒分离株变异分析及重组抗原ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2004年
5 吴晓平;商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究[D];扬州大学;2010年
6 秦爱建;禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D];扬州大学;1999年
7 杨玉莹;J亚群禽白血病病毒内蒙株的分离鉴定及其部分分子生物学特性的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
8 成子强;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D];内蒙古农业大学;2002年
9 杨林;猪瘟病毒基因芯片诊断技术的研究及应用[D];中国农业大学;2005年
10 刘雪强;乌头碱逆转耐药性人口腔上皮鳞状癌细胞分子机制研究[D];北京中医药大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张悦;禽白血病病毒B、E和J亚群基因芯片检测方法的建立[D];河北农业大学;2012年
2 朱美真;山东某地方品系鸡鸡胚中禽白血病病毒的分离及序列分析[D];山东农业大学;2010年
3 石文慧;禽B型白血病病毒生物学特性的分析及研究[D];河北农业大学;2010年
4 朱钰峰;地方品系蛋鸡群中禽白血病病毒的鉴定和J亚群禽白血病病毒受体蛋白的分离[D];扬州大学;2011年
5 李传龙;J亚群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病试验[D];山东农业大学;2012年
6 刘功振;禽白血病病毒J亚群、B亚群的分离鉴定及核酸探针的制备[D];山东农业大学;2010年
7 康忠惠;A、B亚群禽白血病病毒LAMP检测方法的建立及初步应用[D];东北农业大学;2011年
8 刘丽娜;J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆表达及初步应用[D];华中农业大学;2012年
9 邱波;血管瘤型J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2010年
10 张伟伟;J亚型禽白血病病毒抗体检测方法的建立及LTR体外启动活性分析[D];浙江师范大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 季明 徐寿松;基因芯片亮相上海[N];新华每日电讯;2002年
2 记者 刘熙;省一院基因芯片诊断技术获卫生部认证[N];云南日报;2010年
3 南方日报记者 陈枫 通讯员 宋忠雷 彭文斌;省二医应急大楼:全省首家“移动医院” 省妇幼番禺新院:有了地贫基因芯片[N];南方日报;2011年
4 周向东;基因芯片:神奇的医生[N];中国医药报;2001年
5 林海慧;共建全国最大基因芯片基地[N];证券时报;2000年
6 记者 季洪光;基因芯片可望大规模临床应用[N];科技日报;2003年
7 ;基因芯片——新世纪医学的“宠儿”[N];市场报;2001年
8 记者 郑晓强 通讯员 陈海峰;全国首个遗传病基因芯片开放式检测平台在厦建成[N];福建日报;2009年
9 ;应时而生前景灿烂[N];中国医药报;2002年
10 吕建强;深圳积极创新基因芯片检测方法[N];中国食品报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978