收藏本站
《河北农业大学》 2012年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

苏云金芽胞杆菌的分离鉴定及高毒力菌株的研究

苏俊平  
【摘要】:苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种可以形成芽胞和晶体蛋白的革兰氏阳性细菌,属于芽胞杆菌属,在自然界中分布广泛,很多高毒力或具有特异杀虫活性的新菌株不断被发现。本论文围绕苏云金芽胞杆菌新菌株的筛选、鉴定、评价及杀虫基因克隆等方面开展了一系列的研究,主要结果如下: 1.从河北省、内蒙古及吉林省等不同地区共采集367份土样,利用醋酸钠-抗生素筛选法并结合复红染色分离鉴定苏云金芽胞杆菌,共得到75株Bt菌株,出菌率为12.27%。这75株野生菌株的伴胞晶体有菱形、球形、米粒形和不规则形等。 2. PCR-RFLP基因型分析结果表明,这75株Bt菌含有cry1、cry1I、cry2、cry3、cry4、cry5、cry6、cry7、cry8、cry8N、cry9、cry13-14、cry18、cry22、cry26-28、cry34-35、cyt2和vip3A 18种基因型。其中cry2基因含量最高,占总菌株数的43.24%,cry1I基因位居第二,占36.49%。还有12株菌未鉴定出基因型。 3.通过生物测定,发现了菌株L-2、L-10、L-13、L-17、L-22、SC-39和SC-40对二点委夜蛾(Athetis lepigone)的幼虫均表现出较高的杀虫活性,基因型分析表明这些菌株均同时含有cry1Ac、cry2Ac、cry1I、vip3A这四种杀虫基因,初步证实cry1Ac是对二点委夜蛾起主要作用的基因。 4. Bt YX-1菌株对梨小食心虫(Grapholita molesta)、苹小卷叶蛾(Adoxophyes orana)、苹掌舟蛾(Phalera flavescens)苹果蠹蛾(Cydia pomonella)、美国白蛾(Hyphantria cunea)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)、斜纹夜蛾(Prodenia litura)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)以及小菜蛾(Plutella xylostella)等果树及蔬菜害虫表现出广谱杀虫活性,Bt YX-1菌株对这些害虫幼虫的毒力均高于Bt HD-1菌株。Bt YX-1菌株产生菱形伴胞晶体;SDS-PAGE分析表明该菌株表达的主要蛋白条带分子量约为130kDa和60kDa;基因型鉴定表明,Bt YX-1菌株含有cry1Ac、cry2Ac、cry1I、cry34-35和vip3Aa基因。Bt YX-1的最佳培养基配方为:黄豆饼粉32g/L、花生饼粉30g/L、鱼粉16g/L、蛋白胨6g/L、玉米粉18g/L、酵母粉6g/L、蔗糖1g/L、MgSO_4·7H_2O 0.2g/L、KH_2PO_4 1g/L、CaCO_3 0.5g/L、FeSO_4·7H_2O 0.06g/L、余者用水补足。 5. L-27菌株产生球形伴胞晶体,SDS-PAGE检测显示主要表达130kDa和60kDa的蛋白,基因型分析表明该菌株含有cry8、cry8N、cry22、cry26-28基因。利用PCR方法从菌株L-27中分离克隆了cry8的全长基因。序列分析显示,cry8全长基因含有3525个碱基,编码由1175个氨基酸组成的蛋白质。通过在NCBI上应用BLAST软件比较相似性显示,与已发表的登录号为AY551093.1的cry8基因同源性达99%,已提交GenBank登记,登录号为JQ389477。该基因已被国际Bt基因命名委员会正式命名为cry8Fa3。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S476.1

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡英华;朱庆荣;苏加岱;;二点委夜蛾的发生为害及综合防治对策[J];山东农业科学;2011年11期
2 王进忠,孙淑玲,杨宝东;转Bt基因植物的研究与应用前景[J];北京农学院学报;2002年03期
3 吴洪福;郭淑元;李海涛;高继国;;苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白结构和功能研究进展[J];东北农业大学学报;2009年02期
4 王利平;代林远;李鹏;;苏云金芽孢杆菌研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年09期
5 高家合;;苏云金杆菌Bt33发酵条件优化及应用于烟草粉螟防治的研究[J];工业微生物;2006年03期
6 程建新,雷满香;Bt菌株对小猿叶甲的活性筛选[J];湖南化工;2000年05期
7 李建洪,万秋英,王沫,姜锡权,喻子牛;韩国土壤中苏云金芽孢杆菌菌株的分离和鉴定[J];湖南农业大学学报;2000年04期
8 严建民;作物转Bt抗虫基因育种研究进展[J];核农学报;2000年03期
9 闵恩泽,傅军;绿色化学的进展[J];化学通报;1999年01期
10 宋萍;王勤英;吴会贤;陆秀君;王永;;苏云金芽胞杆菌WZ-9菌株对马铃薯瓢虫的毒力及其杀虫基因的研究[J];农业生物技术学报;2008年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 齐新安;朱祖林;;安徽电大远程开放教育专业招生规模与发展态势的灰关联分析[J];安徽广播电视大学学报;2007年03期
2 魏鑫;王玉霞;王淑敏;董文轩;;平欧杂种榛过氧化物同工酶研究[J];山东农业科学;2008年01期
3 马雪;邱丽娜;弓爱君;郎序菲;王兆龙;;Bt生物农药研究进展[J];山东农业科学;2009年10期
4 卢合全;李振怀;董合忠;李维江;唐薇;张冬梅;罗振;;杂交棉种植密度与留叶枝对产量及其构成因素的互作效应研究[J];山东农业科学;2009年11期
5 于海涛;闫美;徐磊;李安飞;;小麦新品系配合力和遗传力分析[J];山东农业科学;2009年12期
6 刘俊恒;何代元;张学舜;;14个玉米自交系的一般配合力分析[J];山东农业科学;2009年12期
7 罗振;李维江;董合忠;唐薇;张冬梅;卢合全;李振怀;;密度与整枝对抗虫杂交棉产量分布的影响[J];山东农业科学;2009年12期
8 孙嵬;崔娟;臧冬初;史树森;;温度和土壤含水量对东亚飞蝗卵孵化的影响[J];山东农业科学;2010年03期
9 赵洪亮;于谦林;卢合全;董合忠;;山东生态条件下纯作春棉的适宜密度研究[J];山东农业科学;2010年12期
10 刘淑云;李景岭;张秀兰;朱建华;;鲁西南冬小麦产量与气候因子的相关和通径分析[J];山东农业科学;2011年03期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵玖华;尚佑芬;王升吉;李燕霞;郭和平;;番茄黄化曲叶病的发生危害、病原检测及防治措施[J];山东农业科学;2010年02期
2 曹海波;徐瑞娟;;砀山县2006年梨小食心虫大发生为害特点及成因浅析[J];安徽农学通报;2006年11期
3 王进忠,孙淑玲,杨宝东;转Bt基因植物的研究与应用前景[J];北京农学院学报;2002年03期
4 朱永兴;茶树生长调节剂的研究与应用[J];中国茶叶;1998年02期
5 陈宗懋;各国茶叶中农药MRL标准的剖析与思考[J];中国茶叶;2002年01期
6 吴锡端;2001年茶叶经济形势分析[J];中国茶叶;2002年01期
7 江用文;加入WTO后我国茶业发展的对策[J];中国茶叶;2002年06期
8 阮建云;关于无公害茶叶生产的几点认识[J];中国茶叶;2003年03期
9 高彩云;面对绿色壁垒的我国茶叶出口贸易[J];中国茶叶;2003年03期
10 吴锡端;2003年我国茶叶产销形势分析[J];中国茶叶;2004年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蔡启良,刘子铎,喻子牛;苏云金芽胞杆菌生物活性成分研究进展[J];应用与环境生物学报;2003年02期
2 姚宝安,钟勤,王乾兰,赵俊龙,马丽华,喻子牛;对捻转血矛线虫幼虫有杀灭作用的苏云金芽胞杆菌的筛选[J];华中农业大学学报;1995年02期
3 喻子牛,孙明,陈亚华,刘子锋,喻凌,罗曦霞,戴经元;苏云金芽胞杆菌生物活性蛋白基因在动、植物病虫害防治中的应用(综述)[J];农业生物技术学报;1995年02期
4 王清锋,喻子牛;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1E的改造[J];华中农业大学学报;1998年05期
5 孙明,刘子铎,喻子牛;苏云金芽胞杆菌YBT-1520杀虫晶体蛋白基因的属性[J];微生物学报;2000年04期
6 刘刚;;湖南师大“苏云金芽胞杆菌杀虫伴胞晶体蛋白质组学研究”取得重要成果[J];农药市场信息;2009年12期
7 姚宝安;王祥;夏雪山;赵俊龙;马丽华;孙明;喻子牛;;苏云金芽胞杆菌晶体蛋白对羊捻转血矛线虫成虫的作用[J];中国农业大学学报;1998年S2期
8 姚江,田广,喻子牛;苏云金芽胞杆菌Ly30株最适发酵培养基配比的初步研究[J];连云港师范高等专科学校学报;1999年04期
9 周琴,孙明,李林,杨在清,喻子牛;苏云金芽胞杆菌标记重组菌株的构建与杀虫基因水平转移[J];应用生态学报;2005年01期
10 周学永;陈守文;孙宇;梁宝臣;;由苏云金芽胞杆菌胞晶混合物直接提取原毒素的方法[J];农业环境科学学报;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 喻子牛;孟盈;孙明;何进;李明顺;郑世学;;苏云金芽胞杆菌新基因资源的发掘策略[A];第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集[C];2011年
2 周帼萍;闫建平;郑大胜;周晓慧;袁志明;;苏云金芽胞杆菌在食品中分布及来源分析[A];中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》论文摘要[C];2008年
3 张春鸽;束长龙;高继国;宋福平;张杰;;高通量测序在苏云金芽胞杆菌基因发掘中的运用[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
4 何晓明;刘晓垒;陆琼;束长龙;张永军;张杰;宋福平;;苏云金芽胞杆菌中新型vip3基因的克隆与活性分析[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
5 喻子牛;孙明;刘子铎;戴经元;陈亚华;;苏云金芽胞杆菌Cry基因命名十年的进展[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年
6 刘小锦;朱晨光;王莉;孙明;喻子牛;;苏云金芽胞杆菌AiiA蛋白的活性[A];廿一世纪微生物学发展前沿与应用新技术研讨会论文摘要集[C];2003年
7 孙明;;苏云金芽胞杆菌YBT-1520的功能组分析[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
8 张剑冰;罗朝来;喻子牛;;2.4-D诱导苏云金芽胞杆菌CT-43菌株进入小麦细胞的初步研究[A];杀虫微生物[C];1992年
9 乐超银;孙明;喻子牛;;苏云金芽胞杆菌广谱、遗传稳定工程菌的构建[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
10 谭芙蓉;唐雪明;;四川生态区苏云金芽胞杆菌资源的筛选鉴定及其新型杀虫基因的克隆表达研究[A];第二届上海市植物生理学青年学术研讨会论文摘要集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 本报记者 李徽;技改创新独领风骚[N];宁夏日报;2010年
2 林敏 张木;我国农业重组微生物技术产业化现状[N];科技日报;2002年
3 李晓云;农科中心的留美博士[N];人民政协报;2005年
4 谈海亮 金安江;“转基因抗虫水稻品种培育”在华中农大启动[N];农民日报;2009年
5 上海农科热线供稿;应对转基因水稻严格进行安全性评价[N];东方城乡报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘子铎;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白和辅助蛋白基因的克隆表达[D];华中农业大学;1999年
2 李林;苏云金芽胞杆菌高频转化系统的建立及其性能[D];华中农业大学;1999年
3 鲁松清;苏云金芽胞杆菌对鳞翅目昆虫广谱高毒基因工程菌的构建[D];华中农业大学;1999年
4 周琴;绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达与应用[D];华中农业大学;2004年
5 张琼;苏云金芽胞杆菌蛋白Aii及其对植物病原菌致病性的影响[D];华中农业大学;2001年
6 张利莉;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白cry1D的表达调控[D];华中农业大学;2000年
7 邵宗泽;苏云金芽胞杆菌帮助蛋白对杀虫晶体蛋白表达的影响[D];华中农业大学;2000年
8 吴岚;苏云金芽胞杆菌解离载体的构建及其特性[D];华中农业大学;2000年
9 周学永;苏云金芽胞杆菌喷雾干燥工艺和杀虫蛋白纳米材料吸附剂型的研究[D];华中农业大学;2004年
10 朱晨光;苏云金芽胞杆菌抗病杀虫和广谱工程菌的构建[D];华中农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苏俊平;苏云金芽胞杆菌的分离鉴定及高毒力菌株的研究[D];河北农业大学;2012年
2 逯晋忠;苏云金芽胞杆菌对云斑天牛的抗性研究[D];华中农业大学;2010年
3 舒正玉;重组苏云金芽胞杆菌WG-001环境安全性分析[D];华中农业大学;2003年
4 王忠勇;一株杀线虫苏云金芽胞杆菌的分离鉴定及其ICPs基因的克隆[D];湖南农业大学;2013年
5 邵志会;苏云金芽胞杆菌的分批发酵动力学[D];华中农业大学;2004年
6 郎晓磊;肠道菌对苏云金芽胞杆菌家蚕杀虫活性的作用[D];华中农业大学;2010年
7 葛东华;苏云金芽胞杆菌MB-15菌株特性及其可湿性粉剂的研究[D];河北农业大学;2012年
8 吴怀光;利用Tn5401转座子构建解离载体并在苏云金芽胞杆菌中高效、稳定表达AiiA蛋白[D];华中农业大学;2004年
9 刘姣;苏云金芽胞杆菌Sigma35因子对杀虫晶体蛋白基因表达的影响[D];华中农业大学;2010年
10 何晓明;苏云金芽胞杆菌新型vip3基因克隆、表达及活性分析[D];东北农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026