我国棉花抗枯黄萎病部分骨干品种的AFLP研究

【摘要】： 棉花黄萎病(Verticillium wilt)、枯萎病(Fusarium wilt)是严重危害世界许多国家棉花生产的两大主要病害，也是我国棉花生产上的重要病害。实践证明，利用抗病品种是防治棉花枯、黄萎病的根本措施和有效的途径。 本研究利用AFLP银染技术对30个棉花骨干抗病品种进行了指纹图谱的研究。研究目的包括：第一，建立一套适合棉花指纹图谱分析的AFLP技术体系；第二，获得品种的指纹图谱；第三，结合系谱分析，进行分子水平的遗传多样性研究。主要结果如下： 1．对影响棉花AFLP指纹分析的各个因素进行了试验与摸索。最终建立了一套适合棉花AFLP指纹分析的最适体系。该体系中各优化因素为：①模板DNA浓度为150ng·μL~(-1)；②酶切体系中，MseI和EcoRI各加入3units，使用NEB buffer #2，反应时间为2h；③连接最适反应时间为10h；④连接产物最适稀释倍数为10倍；⑤预扩增产物最适稀释倍数为10倍。 2．利用AFLP银染技术，采用4碱基切点的MseI和6碱基切点的EcoRI双酶切体系，对30个骨干抗病品种进行AFLP指纹分析。从100个引物组合进行筛选，选出25个引物组合对30个抗病品种进行AFLP分析。25个引物组合共扩出1858条谱带，其中多态性条带数为737条。获得了11个品种的指纹图谱。试验结果证明AFLP银染技术非常适合于棉花遗传多样性及指纹图谱的研究， 3．利用SPSS 10.0软件对AFLPs数据进行聚类分析，得到聚类树状图。多数品种都依据其遗传关系远近进行分类，与系谱资料基本吻合。统计结果结合系谱分析可知，我国现有的陆地棉抗病品种的遗传基础狭窄，遗传变异水平低下，岱字棉系统为主要遗传来源，其次是乌干达棉、斯字棉、金字棉。试验还为两个抗性来源不清的品种进行了分类，表明苏棉4号可能与豫棉一号有相近的亲缘关系；鲁棉12可能与Auburn623RNR有相近的亲缘关系。