苹果原生质体分离、纯化及培养技术研究

【摘要】： 苹果是我国重要的果树栽培树种，苹果品种和砧木的优劣直接影响着苹果的产量、品质及经济寿命．通过育种手段选育优良的品种和砧木是解决存在问题的重要途径之一。苹果在遗传上的高度杂合性增加了常规育种的难度。原生质体培养及融合技术能扩大遗传重组范围，促进远缘性状的转移，在应用于育种的实践中显示出巨大的应用潜力。苹果原生质体的培养已取得一定进展，但再生成株的基因型有限，试验结果的重复性差等问题一直困扰着从事原生质体研究的工作者们。进一步开展苹果原生质体培养技术的研究对于创造新的种质材料，促进原生质体技术在苹果品种和砧木遗传改良中的应用具有重要意义。 本试验以苹果砧木幼胚子叶、组培苗叶片诱导愈伤组织；并对悬浮系的培养条件进行优化；对影响原生质体分离培养的因素进行了系统的研究。主要结果如下： 1．建立了由苹果幼胚子叶、无菌苗叶片诱导愈伤组织的技术体系。不同的激素组合对愈伤组织的诱导有显著的影响。将诱导出的愈伤组织在继代培养基上经不断选择，可以得到松散颗粒状类型和松脆型的愈伤组织。由幼嫩子叶和叶片诱导产生的愈伤组织可以出现形态分化。叶片愈伤组织在诱导过程中有不定芽分化。本试验诱导出了77-34、嘎拉、珠美海棠的愈伤组织。 2．优化了悬浮细胞系培养的条件：悬浮细胞系的继代时间、谷氨酰胺对悬浮细胞系的生长产生影响。一般继代时间为6～7d，而加入有机氮素谷氨酰胺300mg／l则使细胞内含物丰富。 3．利用组培苗叶片、幼胚子叶、松散的愈伤组织分离原生质体。结果表明：材料的生理状态不同，原生质体的产量和活力不同。幼嫩的刚刚展开的且有光泽的幼叶分离的原生质体的产量和活力高。幼胚子叶在暗中培养2～7d成黄化状态后分离的原生质体的产和活力高于在光下培养的绿色子叶。用愈伤组织分离的原生质体时有一个适宜的继代时间，其时间为2～4个月，在此阶段的愈伤组织分离的原生质体的产量和活力均较高。 4．优化了原生质体培养基：其组成为KM8p+0．6mol／L葡萄糖+300mg／LCH+20mg/LArg+300mg/GIn+500mg/LME+0．5mg/L2,4D+0．5mg／LBA进行低密度培养(0．5X10~5／mL)的液体浅层培养。愈伤组织的原生质体培养3～5d观察到第一次分裂，10d可观察到第三次分裂，15d后观察到多次分裂。

【学位授予单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：S661.1