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《河北农业大学》 2002年
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对基于同源序列候选基因法克隆R基因的探讨

卢志国  
【摘要】: 以NBS-LRR类R基因中的几个保守序列为依据合成寡核苷酸引物,并组成不同的引物组合,通过对两套玉米抗大斑病Ht基因近等基因系(OH43,OH43Ht_1,OH43Ht_2;B37,B37 Ht_1,B37Ht_2)基因组DNA进行扩增,对基于同源序列的候选基因法(Homology-based candidate gene method)克隆R基因作进一步探讨。主要研究结果表明: 1.依据NBS-LRR类R基因特有的两个保守序列GLPL和CFLY(两者相距约70个氨基酸)合成所有可能的简并寡核苷酸引物(左引物16个,右引物8个,共组成128个引物组合)对玉米基因组DNA进行扩增的结果表明:在6个引物组合中得到了扩增产物,产物长度在500~1000bp之间;没有获得特异性扩增产物(指仅从含Ht基因材料中得到,长度约210bp的DNA片断)。说明玉米Ht基因不含绝大多数R基因特有的两个保守序列GLPL和CFLY,或者说Ht基因不属于NBS-LRR类R基因。 2.依据拟南芥RPS2和烟草N基因中的两个保守序列GGVGKTT和GLPLAL(两者相距约500bp)合成寡核苷酸引物(左引物2个,右引物2个,组成4个引物组合),对玉米基因组DNA进行扩增的结果表明:在2个引物组合中获得了大约500bp的扩增产物,但这两个扩增产物同样也存在与不含Ht基因的玉米基因组中,说明这两个500bp左右的DNA片断并非Ht基因的类似序列。 3.R基因类型的多样性和不可预测性,使基于同源序列的候选基因法克隆R基因带有一定的盲目性。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q785

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