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《河北农业大学》 2002年
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拮抗链霉菌Men-myco-93-63的复壮及其抗生素的提取纯化

董立  
【摘要】： 本文通过对农用抗生素Men-myco-93-63菌株在不同pH值培养基上抑菌圈直径和最终发酵效价的相关性比较，建立了菌株复壮的琼脂柱初筛法。在此基础上，应用“三级传代”选育法对由衰退菌株在五种常用链霉菌复壮培养基(TSB培养基、天门冬酰胺燕麦培养基、5460复壮培养基、0.25％硝酸钾马铃薯培养基、盐酸葡萄糖胺琼胶培养基)及燕麦培养基上自然分离所得的100多株单菌落进行筛选，从中筛选出两株较原株在培养性状和产素水平上明显改善的复壮菌株y-13、A-25及一株在培养性状上明显异于原株的高产菌株A-19。并通过对各复壮培养基上所分离菌株初筛效价总体水平及培养性状的比较确定天门冬酰胺燕麦培养基对菌株Men-myco-93-63具有较好的复壮作用。 以往研究表明，菌株Men-myco-93-63所产抗生素主要为脂溶性抗生素；抗生素在40℃仍能保持对棉花黄萎病菌的抑制活性。在此基础上，本实验经过对Men-myco-93-63发酵液4000rpm离心，上清液无机沉淀剂预处理后大孔吸附树脂HZ-803吸附，然后用30％甲醇、100％甲醇分段洗脱；将100％甲醇段洗脱液浓缩后乙酸乙酯萃取；萃取有机相浓缩后再经硅胶柱层析处理；然后对层析活性部分进行紫外波长扫描，确定240nm作为高压液相色谱检测波长。以240nm作为检测波长利用反向C18分析柱选择高压液相分离条件，并经制备柱进一步选择，确定30％-80％-100％甲醇作为抗生素纯化制备的条件可以将大部分活性物质洗脱且活性峰分离较好。经对所分离各部分进行生物活性测定显示：菌株Men-myco-93-63发酵产物至少有13个活性组分。
【关键词】：复壮 农用抗生素 提取纯化
【学位授予单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：TQ455
【目录】：
  • 文献综述8-20
  • 1 农用抗生素的研究现状8-10
  • 2 新农用抗生素的研究开发10-19
  • 2．1 农用抗生素研究的意义10-11
  • 2．2 农用抗生素的一般开发模式11
  • 2．3 新型农用抗生素筛选11-13
  • 2．4 农用抗生素的生物合成—发酵13-14
  • 2．5 农用抗生素的下游加工14-17
  • 2．6 菌种改良17-19
  • 3 农用抗生素应用展望19-20
  • 引言20-21
  • 材料和方法21-28
  • 1． 实验材料21-22
  • 2． Men-myco-93-63复壮菌株筛选22-23
  • 2．1 初筛方法的建立22
  • 2．2 菌株复壮22-23
  • 3． Men-myco-93-63活性物质的提取纯化23-28
  • 3．1 抗生素提取路线图23
  • 3．2 发酵液制备23
  • 3．3 发酵液活性测定方式确定23-24
  • 3．4 发酵液预处理24
  • 3．5 大孔吸附树脂柱洗脱24-25
  • 3．6 萃取25
  • 3．7 硅胶柱洗脱25-26
  • 3．8 高效液相色谱制备26-28
  • 结果分析28-41
  • 1 Men-myco-93-63复壮菌株筛选28-31
  • 1．1 初筛方法的确定28-29
  • 1．2 菌株复壮29-31
  • 2 Men-myco-93-63活性物质的提取纯化31-41
  • 2．1 发酵液活性测定方式确定31
  • 2．2 发酵液的预处理31-33
  • 2．3 大孔吸附树脂柱吸附33-34
  • 2．4 萃取34
  • 2．5 硅胶柱吸附34-36
  • 2．6 高效液相色谱制备36-41
  • 讨论41-43
  • 结论43-44
  • 参考文献44-53
  • 英文摘要53-54
  • 致谢54-55
  • 附录Ⅰ55-56
  • 附录Ⅱ56-58

【引证文献】
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