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《河北农业大学》 2003年
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棉花基因枪转化体系的建立

于娅  
【摘要】: 棉花是世界主要的经济作物之一,但是近几年受到虫害,尤其是棉铃虫的危害,其产量与品质均受到严重影响。广泛使用化学杀虫剂控制害虫,不但破坏生态平衡,污染环境,而且害虫还逐渐对其产生了抗耐性。植物基因工程研究的深入,为控制农业害虫开辟了一条新途径。我们将不同抗虫机理的双价抗虫基因(Bt+CpTI)导入陆地棉品种,旨在培育双价转基因抗虫棉,拓宽棉花的抗虫谱,同时建立基因枪遗传转化棉花的技术体系,为棉花的现代分子育种增添新的内容和新的种质材料。 本试验以陆地棉栽培品种“中棉所19”、“中棉所24”、“中棉所27”的茎尖分生组织,以“中棉所24”的胚性愈伤组织为材料,建立起了比较完善的基因枪转化体系。并把抗虫双价基因Bt+CpTI表达载体导入了棉花,获得了抗卡那霉素的转基因棉花新材料。主要结果如下: 1 以棉花茎尖分生组织为轰击受体的技术体系建立 取棉花种仁接于MSB培养基中,取苗龄为40~60小时的茎尖,将茎尖制备成(生长点+2叶原基)的状态,将制备好的茎尖分生组织竖直放于培养皿中。轰击压力为1300psi,距离为9cm,真空度为27~28inHg,轰击后接入加有活性炭1g/L的MSB培养基中过渡培养4~7天,至组织长成为肉眼可见的明显长大的绿芽点时,将其转移到筛选培养基MSB+KM(0,45,60,80,85~100mg/L)上进行筛选,获得抗性植株。三个品种茎尖的平均转化率为2.94%。 2 以胚性愈伤组织为轰击受体的技术体系的初步建立 取7日苗龄的下胚轴,接入MSB+0.01mg/L IAA+0.01mg/L KT+0.01mg/L 2,4-D以诱导愈伤组织,进而转入合适培养基中诱导出胚性愈伤组织。选取颜色新鲜、颗粒状的胚性愈伤组织,平铺于培养皿中心直径3cm处。渗透处理以甘露醇为渗透剂,浓度为0.3mol/L,前处理时间为2~4hr,后处理时间为16hr为最佳。轰击参数:飞行距离9cm,真空度27~28inHg,气压1300psi。过渡培养后接于培养基 MSB+KM(25,50mg/L)中筛选抗性胚性愈伤组织转化子,然后再诱导分化至获得j可生 抗性植株。 3转基因植株的鉴定 抗性转化植株经PCR检测,证明目的基因Bt杀虫基因及 CPTI基因均导入了棉 花基冈组中。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S562

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 燕树锋;转基因抗草甘膦棉花种质系的创造及利用[D];浙江大学;2011年
【参考文献】
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1 张浩;棉花茎尖基因枪—农杆菌转化体系的建立和GLU-CHI基因的导入[D];西南农业大学;2002年
【共引文献】
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10 杜健;冯浩;贾涛;王秉荣;夏志明;王成;;强致病落叶型黄萎病遗传基因转化体系构建研究[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
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1 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
2 罗新宁;基于SPAD的棉花氮素营养诊断及氮营养特性研究[D];新疆农业大学;2010年
3 生书晶;何首乌芪合酶基因(FmSTS)的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年
4 文亚峰;人心果品种资源亲缘关系及其授粉亲和性的研究[D];中南林业科技大学;2006年
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6 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
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10 杜振国;三种水稻病毒基因沉默抑制子的鉴定和研究[D];福建农林大学;2011年
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1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 兰楠;利用天南星科凝集素构建内生工程真菌及其抗虫防病效果研究[D];华中农业大学;2010年
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5 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
6 姚秋林;水稻根特异表达启动子的克隆及功能分析[D];华中农业大学;2010年
7 李超;Ac/Ds-Enh转座插入的棉花抗病突变体主要特性分析[D];华中农业大学;2010年
8 吴寿明;转基因抗虫棉单交种、三交种的优势分析[D];华中农业大学;2010年
9 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
10 徐娟;农杆菌介导的Ac/Ds转座系统转化甘蓝型油菜的研究[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
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1 刘柱;可变盐单胞菌中草甘膦抗性EPSP合酶新基因克隆、大肠杆菌表达及其抗性机制的研究[D];四川大学;2004年
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【二级引证文献】
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1 梅磊;陈进红;何秋伶;祝水金;;草甘膦对转EPSPS-G6基因棉花种质系配子育性的影响[J];棉花学报;2013年02期
【二级参考文献】
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10 别墅;王坤波;孔繁玲;周有耀;邹美娟;王春英;;棉花基因组重复序列研究进展[A];实施科技兴农战略促进农村经济发展学术交流论文集[C];2004年
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