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《河北农业大学》 2003年
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猪瘟病毒E2基因克隆、序列分析及最佳猪瘟免疫程序的制定

赵志军  
【摘要】: 猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的一种病毒性传染病。猪瘟兔化弱毒疫苗有效地控制了猪瘟在我国的急性发生和大流行。但自80年代以来,我国出现了温和型、非典型性猪瘟。本研究主要是对猪瘟兔化弱毒疫苗、猪瘟病毒野毒株抗原基因(E2)进行序列分析和同源性比较,分析发生非典型性猪瘟的原因,并在此基础上制定最佳猪瘟免疫程序。 以猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞毒(HCLV)中提取的细胞总RNA为模板,以RT-PCR技术,扩增出了完整E2基因的cDNA片段。经电泳、酶切分析,证实了所扩增片段为E2基因特异性片段。随后对其进行了核苷酸序列测定和氨基酸序列的推导和同源性分析。收集疑似猪瘟病料13份,经荧光抗体检查、兔体交互免疫试验,结果均为阳性。取其中2份(HC-JN:来源于江苏省江宁县、HC-YC来源于江苏省盐城市),接种PK-15传代细胞,分离培养,获得猪瘟病毒野毒第六代细胞毒(HCV-JN,HCV-YC)。以此病毒RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增出了猪瘟野毒株HCV-JN、HCV-YC完整的E2基因,用pMD-18T载体克隆,经电泳检测、酶切分析及PCR鉴定初步证实了所扩增片段的特异性。随后对其进行了核苷酸序列测定和氨基酸序列的推导,并与测得的HCLV、国外测得的C株(FC)及我国的SHIMEN株、法国的Alfort株等的相应序列进行了同源性比较。结果发现,HCLV与FC间核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为98.3%、99.2%;两个野毒株与HCLV和FC株之间的同源性也分别在98%以上,与Alfort株的同源性最低,分别在83%、89%左右。据此,可推测HCLV、猪瘟野毒株和C株之间的E2基因序列及氨基酸序列无明显差异。 给空怀母猪接种不同剂量的猪瘟兔化弱毒疫苗,分别于不同时期用PPA-ELISA检测血清抗体。结果表明,每年免疫2次,4头份/次,可使怀孕母猪的猪瘟抗体全年均维持在较高水平,此程序为繁殖母猪的最佳免疫程序。初生健康仔猪不进行免疫,于不同日龄检测其母源抗体的水平,确定仔猪的最佳初免时间为乳前免疫或25日龄免疫。选择健康仔猪于不同日龄、不同免疫剂量接种HCLV细胞苗,再分别于不同时期检测抗体,结果表明,0日龄2头份或25日龄4头份首免,60日龄加强免疫4头份可使仔猪在整个育肥期得到有效的免疫保护。攻毒试验再一次证实仔猪按此程序2次免疫,于150日龄攻毒时试验组均未发病,保护率100%。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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