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《河北农业大学》 2004年
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黑曲霉Uγ-2(Aspergillus niger Uγ-2)菊粉酶的分布与性质研究

于宏伟  
【摘要】:本实验建立了一套黑曲霉Uγ-2(Aspergillus niger Uγ-2)胞壁、胞外菊粉酶提纯方法,对细胞所产菊粉酶分布进行了研究,并系统的研究了其酶学性质。细胞发酵液经过超滤、盐析、脱盐、离子交换层析、分子筛层析之后,经毛细管电泳鉴定,得到了纯的胞外酶组分;细胞破碎液经过超滤、盐析、脱盐、离子交换层析、分子筛层析、离子交换层析之后,也得到了纯的细胞内菊粉酶组分。所得酶蛋白,经毛细管电泳鉴定,为单一的蛋白吸收峰其中。所得胞壁、胞外菊粉酶经纯化均为单一组分,胞外提纯7.71倍,纯品比活力为220.5U/mg,胞壁提纯70.04倍,纯品比活力693.4U/mg。结合实验室前期工作,确定所得细胞内组分为胞壁组分,胞外组分与原始菌株相比,由原来的多个组分变为单个组分。 经SDS-PAGE测定,菊粉酶的胞壁组分分子量为108.7kD、胞外组分为62.3kD。硫酸苯酚法测定糖基化程度,胞外为24.16%,胞壁为12.38%。胞壁、胞外酶组分的表面电荷性质有较大差异,毛细管电泳测定胞壁酶组分等电点为5.37,胞外酶组分等电点4.10。分别以菊糖、蔗糖为底物,测定酶的动力学为对菊糖而言,经双倒数作图,胞外Km值为0.84375mmo·L~(-1),Vmax为52.08mmol·L~(-1),胞壁酶菊糖Km为0.633mmol·L~(-1),Vmax为44.64mmol·L~(-1);对蔗糖而言,胞外Km为5.1515mmol·L~(-1),蔗糖Vmax为75.75mmol·L~(-1),胞壁蔗糖Km为7.4809mmol·L~(-1),蔗糖Vmax为76.33mmol·L~(-1);在pH3~5的范围内,胞壁、胞外酶活很高,在中性时,胞壁,胞外酶活都很低,它们的的最适pH值胞壁为pH5.0,胞外4.5。胞壁、胞外最适温度均为60℃,它们在50~70℃时酶活性较高;在pH3~7的范围内,它们的稳定性很好,室温保温24h,基本无酶活力丧失。胞壁酶的热稳定性略优于胞外,高温保温70min后,胞壁酶活的丧失程度低于胞外。Cu~(2+)对胞外酶有较强的抑制作用,对pb~(2+)无反应;胞壁对pb~(2+)较敏感,对Cu~(2+)无反应。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q936

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