收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

梨果实cDNA文库的构建

李海权  
【摘要】:人类基因组计划(HGP)的开展和实施,带来了生物技术上的革命。一些相关的学科,例如生物信息学、比较基因组学、结构基因组学、功能基因组学和蛋白质组学应运而生。随着人类和一些重要模式生物测序任务的相继完成,其相应的研究任务已经由结构基因组学研究转向功能基因组学研究。梨基因组研究在人类基因组和其他一些模式植物基因组计划的影响下,正在采用结构和功能基因组研究并重的技术路线,不断完善遗传图谱饱和密度的同时,努力加强梨功能基因组学研究,为利用基因工程技术进行梨的遗传改良,满足人们日益增长的果品需求奠定坚实的基础。 本试验通过吸光比值分析和凝胶电泳比较了改进异硫氰酸胍法、热硼酸法、改良CTAB法和Qiagen Rneasy试剂盒四种提取总RNA的方法提取梨果实组织总RNA的可行性。结果表明:改进异硫氰酸胍法获得的总RNA纯度高、完整性好。其吸光比值的比值OD_(260)/OD_(280)在1.7~2.0之间,OD_(260)/OD_(230)大于2。电泳检测显示28S、18SrRNA条带清晰,且28S亮度明显大于18S。其它方法提取的总RNA吸光比值OD_(260)/OD_(280)均小于1.7,OD_(260)/OD_(230)均小于2.0。说明产物中有不同程度的多糖、多酚和蛋白的污染。 利用M-MLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA,并合成双链cDNA。然后用SPIN-400Column对cDNA进行分级分离,去除小于500bp的cDNA片段。在双连cDNA两端加上接头,与载体λgt11连接,用Gigapack Gold Ⅲ Packaging Extract包装。包装产物侵染Y1088后构建cDNA文库,最后进行文库扩增。该文库的滴度为1.192×10~6,文库克隆数为1.151×10~6。插入片断平均大小为1kb左右,蓝白斑筛选证实其重组率大于93%。完全符合cDNA文库的要求。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 周明兵,王红珍,赵德刚;杜仲叶和树皮总RNA的快速提取法[J];山地农业生物学报;2003年05期
2 庄军平;苏菁;陈维信;;一种从香蕉果实提取高质量RNA的方法[J];分子植物育种;2006年01期
3 陈建;;几种提取杜仲RNA方法的比较[J];林业科技开发;2007年05期
4 李晓毓;赵德刚;李丰伯;;一种适用于木本植物RNA提取的方法[J];安徽农学通报;2007年23期
5 王红波;金晓玲;;改良TRIZOL试剂法提取矮牵牛衰老花瓣总RNA[J];中国农学通报;2010年07期
6 王玉成,杨传平,姜静;木本植物组织总RNA提取的要点与原理[J];东北林业大学学报;2002年02期
7 杨传平,姜 静,那冬辰,魏志刚;白桦花芽RNA的快速提取[J];东北林业大学学报;2002年03期
8 杨谷良;谭晓风;;热硼酸盐法提取梨雌蕊RNA方法改进及提取效果[J];西北林学院学报;2006年02期
9 刘永忠;刘庆;陶能国;邓秀新;;一种适合于成熟脐橙果皮和果肉的RNA提取方法(英文)[J];华中农业大学学报(自然科学版);2006年03期
10 陈晖;何海福;;植物组织总RNA提取方法的进展研究[J];甘肃农业;2006年08期
11 宋贵生;翟红利;魏刚;朱祯;;一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法(英文)[J];中国农业科技导报;2007年04期
12 聂洪丽;宋先强;邓科君;杨足君;;鼠尾草属植物的DNA及RNA高效提取方法[J];安徽农业科学;2007年30期
13 严明理;刘忠松;官春云;陈社员;刘显军;;一种提取高质量油菜种子和种皮RNA的方法[J];生物技术通报;2007年06期
14 乔新安;朱彦彩;范沛;都军霞;贾海丽;韩立强;杨国宇;;乳汁中RNA提取方法的建立[J];中国畜牧兽医;2008年01期
15 陈弟;殷晓敏;张荣意;;一种适合于提取香蕉果实总RNA的简便方法[J];广西热带农业;2008年02期
16 曹随忠;姚学萍;赵兴绪;;一种简单有效的提取外周血白细胞总RNA的方法[J];安徽农业科学;2008年14期
17 徐进;李帅;施季森;;鹅掌楸属植物总RNA提取方法的比较与分析[J];福建林学院学报;2008年02期
18 杨楠;徐正进;周永力;;改良TRIZOL法提取真菌RNA的方法[J];黑龙江科技信息;2008年24期
19 高爱保;王兰;;长江华溪蟹组织RNA提取的研究[J];海洋水产研究;2008年05期
20 王丹丹;尹伟伦;夏新莉;;沙冬青cDNA-AFLP体系的建立及引物筛选[J];安徽农业科学;2009年24期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘志浩;张玉星;申连英;;鸭梨组培苗与田间植株组织的总RNA提取质量分析[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
2 焦朝霞;邵建柱;孙建设;;苹果成熟组织RNA高效提取方法的研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
3 张上隆;;富含多糖猕猴桃果实组织中总RNA提取方法的改进[A];张上隆果树学文选[C];2006年
4 郑佳;席梦利;陆叶;吕运舟;施季森;;杨树休眠期形成层区细胞的激光显微切割与RNA提取[A];第二届中国林业学术大会——S2 功能基因组时代的林木遗传与改良论文集[C];2009年
5 黄河;王琳琳;王顺利;曹华雯;戴思兰;;适于cDNA-AFLP的甘菊RNA快速高效提取方法[A];中国观赏园艺研究进展 2009[C];2009年
6 敖翔;成仿云;;芍药花蕾总RNA提取方法的探讨[A];中国园艺学会2010年学术年会论文摘要集[C];2010年
7 赵卫国;彭金英;黄勇平;潘一乐;;一种高质量桑树的RNA提取方法[A];中国蚕学会第七次全国代表大会论文集[C];2003年
8 梅晓宏;高红岩;罗云波;;提取猕猴桃果实总RNA的新方法[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
9 陈金慧;吴淳;龙伟;李婷婷;边黎明;施季森;;杂交鹅掌楸体胚发生体系优化及体胚发生相关基因分子检测研究[A];江苏省遗传学会第七届二次代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
10 胡姣;谭晓风;张琳;龙洪旭;田晓明;;油茶种子胚乳总RNA提取方法研究及改良[A];第二届中国林业学术大会——S9 木本粮油产业化论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 黑爱莲;严重急性呼吸综合征冠状病毒全基因组基因的克隆及SARS-Cov分子富集检测体系的研究[D];中国协和医科大学;2004年
2 姚建亭;海带蓝光受体及相关基因的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
3 孙冰;乳腺癌新辅助化疗疗效判断及基因表达与预后分析研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
4 秦巧平;柑橘果糖激酶分子生理特性及功能研究[D];浙江大学;2004年
5 王合;结合珠蛋白在正常人皮肤内的表达及相关性研究[D];中国医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王昆;西洋参根cDNA文库构建及鉴定[D];东北师范大学;2006年
2 崔东辉;强优势玉米杂交种豫玉22雌穗均一化cDNA文库的构建与鉴定[D];中国农业大学;2005年
3 刘中成;枣总RNA提取及mRNA差异显示技术体系的建立[D];河北农业大学;2005年
4 王前梁;十字花科蔬菜防御基因-黑芥子酶基因的研究[D];福建农林大学;2005年
5 汪涛;银杏幼苗叶片发育初期光系统Ⅱ亚基表达水平的分析研究以及psbA基因的克隆[D];四川大学;2005年
6 韩斌;枣果实总RNA的提取及其反转录技术体系的建立[D];河北农业大学;2006年
7 王天奎;番茄高可溶性固形物代谢途径中相关基因的克隆和分析[D];西北农林科技大学;2007年
8 曹竹婷;间接ELISA检测犊牛轮状病毒抗体方法的建立及其疫苗的初步研制[D];新疆农业大学;2008年
9 李帅;鹅掌揪属植物基因差异表达与杂种优势的关系[D];南京林业大学;2009年
10 张亚冰;葡萄扇叶病和卷叶病的RT-PCR检测技术研究[D];西北农林科技大学;2002年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978