收藏本站
《河北农业大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

杆状病毒在转P35基因昆虫细胞系中连续传代的研究

陈莉  
【摘要】:昆虫细胞作为重组病毒的受体能成功高效地表达外源基因,生产具有重要医用价值、具备天然活性的生物工程制品,从而使昆虫细胞培养倍受青睐。目前,可以通过转基因的方法改良现有细胞,从而获得高产昆虫杆状病毒和外源蛋白的昆虫细胞系。 本研究是将粘虫的胚胎细胞系NEAU-Ms-7311和转P35基因细胞系TMsF分别接种昆虫病毒MsNPV和AcNPV,发现AcNPV对两种细胞的感染速度较快,感染率较高,尤其是对TMsF,最高感染率可达74%。 用96孔板对转基因细胞进行克隆,共得到转基因细胞克隆株15株。通过细胞传代,选出生长且状况良好的克隆株共有11株,命名为CT-1、CT-2…CT-11.11株细胞系分别经PBS处理和多角体产量比较筛选出2个细胞克隆株:CT-7和CT-8.接种毒原AcNPV进行离体传代10代,发现AcNPV对对照细胞TMsF和克隆细胞株CT-8的感染率和OB产量都有明显下降趋势,而克隆细胞株CT-7的变化趋势稳定。 CT-7细胞形态主要为纺锤形和圆形,贴壁生长。增殖很快,群体倍增时间为37.1小时,最大生长密度可达9×10~5cells/ml.对AcNPV病毒感染率达80.5%,多角体产量最高为66.4 OBs/cell,是一株高产杆状病毒的细胞系。 对离体传代毒原AcNPV的TCID_(50)/ml测定发现,两种细胞中,AcNPV同时在第三代时滴度达到最大,CT-7细胞第三代时的病毒滴毒值为3×10~8TCID_(50)/ml远远高于对照TMsF细胞,并且滴度曲线比较平直没有明显的下降趋势。然而TMsF细胞的滴度曲线下降趋势变化明显,由2.7×10~7TCID_(50)/ml下降到1.4×10~6TCID_(50)/ml。 CT-7细胞株有较强的营养抗逆性,细胞在无营养的PBS盐缓冲液中1天以后,CT-7细胞有86%存活,比野生型Tn581-4细胞高出36%,第3天时,TMsF细胞全部死亡,CT-7细胞到第5天仍然有6%存活细胞。 在CT-7细胞中离体复制的不同代数的AcNPV病毒,对甜菜夜蛾幼虫的毒力相差不大,甜菜夜蛾的校正死亡率为47%~63%,即多次传代对离体传代产生的病毒多角体毒力影响不大。但在对照组TMsF细胞中复制的多角体随传代次数的增加杀虫活性出现明显下降现象。 昆虫病毒AcNPV在CT-7细胞中离体传代10次,病毒未出现传代效应,其病毒滴度、多角体形态及产量、杀虫毒力均无明显变化。CT-7细胞是昆虫杆状病毒离体复制的优良细胞系。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q78

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张立霞;于在江;周剑芳;舒跃龙;;流感病毒样颗粒疫苗研究进展[J];病毒学报;2011年04期
2 郝碧芳;王猛;沈兴家;;家蚕核型多角体病毒orf121克隆以及非翻译区分析[J];西北师范大学学报(自然科学版);2011年04期
3 翁庆北;肖炜;袁美妗;杨凯;庞义;;SeMNPV持续性感染的甜菜夜蛾细胞株的建立[J];病毒学报;2011年04期
4 李赛男;李朝飞;庞义;杨凯;;杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备[J];湖南师范大学自然科学学报;2011年04期
5 李赛男;李朝飞;庞义;杨凯;;斜纹夜蛾核多角体病毒Splt119基因在大肠杆菌中的表达及抗体制备[J];生物技术通报;2011年06期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 贾园;沈阳;邱亚峰;史子学;邵东华;赵福广;马志永;;杆状病毒的应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
2 万永继;;杆状病毒在组织细胞内的感染传输机制及垂直传播途径的分析[A];中国蚕学会商品性小蚕饲养规程和蚕病防控学术研讨会论文集[C];2010年
3 吴琼;洪华珠;;昆虫抗杆状病毒活性物质的诱导及鉴定[A];廿一世纪微生物学发展前沿与应用新技术研讨会论文摘要集[C];2003年
4 熊景文;曾丹云;姜凌;刘买利;;杆状病毒囊膜蛋白融合肽的NMR结构研究[A];第十六届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];2010年
5 张一帆;尹红燕;周翔;;杆状病毒载体介导钠碘转运体报告基因监测干细胞的实验研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
6 郭睿;徐昊平;李彪;;~(131)I辐射正反馈调控杆状病毒介导hNIS基因在脑胶质瘤治疗中的实验研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
7 柯建浩;王殉章;;杆状病毒AcMNPV orf66基因的功能研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
8 郭睿;徐昊平;李彪;;杆状病毒介导NIS治疗人脑胶质瘤的实验研究:~(188)Re与~(131)I的比较[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
9 刘彦文;庞义;蒲蛰龙;;杆状病毒异源重组引起DNA片段缺失[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年
10 倪伟;秦立廷;高玉龙;潘伟;祁小乐;高宏雷;王永强;王笑梅;;J亚群禽白血病病毒gp85基因在杆状病毒中的表达及鉴定[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 黄志斌;斑节对虾杆状病毒病[N];江苏农业科技报;2005年
2 记者 张永兴 记者 钱铮;不怕胃酸,植物病毒也能成为口服疫苗载体[N];新华每日电讯;2006年
3 河北远征药业股份有限公司 段晓燕;斑节对虾杆状病毒病[N];中国畜牧水产报;2001年
4 王瑞;G蛋白偶联受体的高分辨结构 Towards High Resolution Structures of G-proteinCoupledReceptors[N];中国医药报;2006年
5 王顺昌;螯虾病害(下)[N];江苏农业科技报;2004年
6 张文革;几种常用无公害药物和饲料添加剂[N];中国渔业报;2006年
7 华又;病毒的功用[N];中国国门时报;2007年
8 ;南美白对虾病害的诊断[N];中国海洋报;2003年
9 徐彬;武大一博士论文造假疑云[N];南方周末;2003年
10 俞欣 陈茂樑;SARS免疫荧光检测法建立[N];健康报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王鑫;杆状病毒复制和基因表达的表观遗传学调控研究[D];复旦大学;2010年
2 徐增辉;腺相关病毒载体大规模生产系统的建立其机制研究[D];第二军医大学;2012年
3 林旭瑷;杆状病毒泛素、多角体基因启动子分析及表达系统的应用[D];中国农业科学院;2006年
4 李新红;汉滩病毒西安分离毒株84FLi的全基因序列测定与分析及G1和G2糖蛋白杆状病毒表达载体的构建[D];第四军医大学;2002年
5 梁昌镛;杆状病毒与哺乳动物细胞相互作用的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2005年
6 刘小云;杆状病毒作为椎间盘退变基因治疗载体的实验研究[D];中南大学;2006年
7 陈寅;杆状病毒基因组扫描技术筛选病毒因子和顺式元件及其表达系统的应用[D];中国农业科学院;2006年
8 董春升;杆状病毒p10基因的结构和功能研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2006年
9 温晓玉;表达人干扰素调节因子重组杆状病毒对丙型肝炎病毒的抑制作用研究[D];吉林大学;2008年
10 韩焱;柞蚕杆状病毒激活禽类非特异性免疫的研究[D];大连理工大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈莉;杆状病毒在转P35基因昆虫细胞系中连续传代的研究[D];河北农业大学;2005年
2 王舒;杆状病毒(Baculovirus)膜融合蛋白的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2003年
3 贾蕴莉;肌动蛋白抑制杆状病毒多角体蛋白基因的转录与表达[D];华中师范大学;2005年
4 刘强;苹果蠹蛾颗粒体病毒张掖株(CypoGV-zy)的分离与鉴定[D];西北农林科技大学;2010年
5 程健;中蜂囊状幼虫病毒辽宁毒株的结构蛋白鉴定及杆状病毒表达载体的构建[D];辽宁医学院;2011年
6 曾铮;铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因的克隆及在昆虫细胞中的表达研究[D];西南大学;2006年
7 马志明;基因打靶转基因桑蚕载体的构建及杆状病毒几丁质酶基因(ChiA)和半胱氨酸蛋白酶基因(CP)失活表达GIL-3的研究[D];苏州大学;2002年
8 韦永龙;Bm-Bacmid的构建和Ⅱ型猪圆环病毒核衣壳蛋白的原核表达[D];中国农业科学院;2010年
9 李菲;用杆状病毒系统表达丙型肝炎病毒结构蛋白[D];东北农业大学;2002年
10 王冠;杆状病毒早期感染对家蚕血淋巴细胞的影响以及宿主细胞的应激反应研究[D];南京师范大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026