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《河北农业大学》 2005年
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化学发光及共振光散射测定植物多胺的研究

吴秋华  
【摘要】:多胺(精胺、亚精胺和腐胺)是生物体内广泛存在的直链脂肪族含氮化合物,在植物的生长发育过程中起着重要作用,直接参与生物体内的多种生理活动,如核酸的复制、转录和翻译、蛋白质的合成以及稳定膜的结构,是生物体生长和细胞代谢所必需的痕量活性物质,生物体内多胺的含量与组织的病变、生长发育的水平有直接的关系。因此发展选择性好、灵敏度高、经济实用的分析多胺的方法一直是人们关注和研究的热点之一。 化学发光分析因为仪器简单、灵敏度高等优点,成为近年来痕量分析十分重要的领域。本文发现精胺与Cu(Ⅱ)离子结合生成的不饱和配合物对Luminol-H_2O_2化学发光反应具有强烈的催化作用,在一定范围内化学发光强度与精胺的浓度成正比。据此机理,建立了精胺的液相化学发光测定法,该方法具有操作简单,线性范围宽,灵敏度高等优点。在最佳实验条件下,测定精胺的线性范围为:1.0×10~(-5)~1.0×10~(-7)mol/L,检出限为4.0×10~(-9)mol/L,对1.0×10~(-7)mol/L的精胺测定的相对标准偏差(RSD)为5.6%(n=5)。 利用多胺络合溶解Cu(OH)_2形成多胺-Cu(Ⅱ)不饱和配合物的方法,建立了固态Cu(OH)_2柱测定多胺的流动注射化学发光分析法,与柱后固定化多胺氧化酶化学发光方法比较,本方法具有灵敏度高,分析速度快,操作简单的特点。测定精胺、亚精胺和腐胺的检出限分别为0.17 pmol,0.38 pmol,0.44 pmol,对1.0×10~(-7)mol/L的三种多胺测定的RSD分别为0.64%,1.10%,3.30%,线性范围为:1.0×10~(-5)~1.0×10~(-7)mol/L。 以甲醇-水(体积比为20:80)为流动相,用Symmetry C18反相色谱柱(5 μm,3.9×150mm)分离多胺,利用多胺通过Cu(OH)_2柱时会与Cu~(2+)发生配位反应,生成多胺-铜配合物,基于该配合物对Luminol-H_2O_2化学发光反应的催化作用,建立了高效液相色谱分离化学发光检测测定多胺的新方法。但是虽经多途径条件优化,本文未能将精胺和亚精胺分开,腐胺有较好的分离。所以本方法可用于检测植物中腐胺的含量及精胺和亚精胺的总量,检出限为2 pmol,该方法用于苹果和草莓中多胺的测定,取得了较为满意的结果。 此外,我们还利用共振光散射方法研究了多胺与DNA的相互作用,结果发现精胺与DNA结合后能使共振光散射强度大为增强,其散射峰位于300 nm,并且共振光散射的强度与精胺的浓度呈现良好的线性关系。在测定精胺的线性范围内亚精胺和腐胺不产生干扰,据此建立了选择性测定精胺的新方法,线性范围为:5.0×10~(-7)~1.0×10~(-5)mol/L,检出限为7.4×10~(-8)mol/L,该方法不需要分离就可以直接测定精胺的含量,大大简化了操作过程,缩短了分析时间。该法应用于新几内亚凤仙中精胺的测定,得到满意结果。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q946

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