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《河北农业大学》 2006年
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昆虫病原线虫发育相关基因的鉴定以及spi-583基因的克隆与表达

夏颖伟  
【摘要】:斯氏属(Steinernema)与异小杆属(Heterorhabditis)昆虫病原线虫(Entomopathogenic Nematode)是国际上新型的生物杀虫剂,其感染期幼虫在食物信息的诱导下恢复、发育以及大量繁殖,在这类线虫的产业化培养中发挥着重要作用。了解线虫在恢复发育过程中差异表达的基因对探讨其代谢途径具有十分重要的意义。 本论文通过构建无菌小卷蛾斯氏线虫Steinernema carpocapsae A24在共生细菌上清液诱导后恢复发育时的cDNA文库,筛选差异表达的基因,并将其中一个与线虫生长发育密切相关的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因进行了原核表达。 论文叙述了分离共生细菌上清液诱导后恢复发育的Steinernema carpocapsae A24线虫总RNA,通过RLM-RACE(RNA ligase mediated Rapid Amplification cDNA End,RLM-RACE)技术获得了全长的cDNA文库,通过点杂交,筛选到48个差异表达的克隆,经测序和生物信息学分析获得34个DNA序列,这些序列按照蛋白质功能包括多个核糖体大小亚基蛋白(ribosomal protein)、延伸因子(translation elongation factor1-alpha)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor)、细胞分裂蛋白激酶(celldivision protein kinase 5)等。 以Steinernema carpocapsae A24总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得了spi-583基因,将目的基因与pET-15b表达载体进行体外连接,构建了重组表达载体pET-15b-spi-583;经传代实验证明了重组质粒pET-15b-spi-583在重组大肠杆菌中的稳定性;于重组菌的对数生长期前期加入诱导剂IPTG(1mmol/L),25℃下诱导表达8h~12h后,获得分子量约为19.54kDa的融合蛋白;融合蛋白以包涵体形式存在,胞外未有目的蛋白的渗漏表达;利用His·Tag融合标签的免疫印迹检测表明融合蛋白含丝氨酸蛋白酶抑制剂SPI-583。 本研究结果不仅有利于昆虫病原线虫—细菌共生关系的研究,而且将促进这类线虫的产业化。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S476.15

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【引证文献】
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1 张军鸽;斯氏线虫抗逆性幼虫cDNA文库和差减文库的建立与基因表达分析[D];甘肃农业大学;2008年
【参考文献】
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1 邱晓颖,朱红惠,卢秋雁,丘元盛;质粒 pMC73A 在宿主细菌中的稳定性研究[J];高技术通讯;1998年06期
2 董国伟,刘贤进,余向阳,董健;昆虫病原线虫研究概况[J];昆虫知识;2001年02期
3 丛斌,刘维志,杨怀文;昆虫病原线虫研究和利用的历史、现状与展望[J];沈阳农业大学学报;1999年03期
4 王立霞,杨怀文,黄大昉;昆虫病原线虫共生细菌致病机理的研究进展[J];微生物学报;2000年04期
5 崔龙,邱礼鸿,房媛媛,庞义,李国勋;Xenorhabdus nematophilus BP品系杀虫毒素基因的克隆与鉴别[J];中山大学学报(自然科学版);2003年03期
【共引文献】
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1 吴丛梅,黄天华,吴德生,谢庆东,徐小虎;pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
2 阮烨,王晓云,谢庆东,黄天华;外源DNA转染精子的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
3 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
4 陈传德,吴中亮,陈家堃;乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
5 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
6 吕慧贞;张建朋;陈新;刘静;张元湖;;一种改进的鸭梨总RNA提取方法[J];山东农业科学;2007年05期
7 张秀华;王文锋;;微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨[J];山东农业科学;2009年06期
8 张学民,王金生;碱裂解法提取质粒DNA方法的改进[J];安徽大学学报(自然科学版);2000年04期
9 倪大虎,向太和,张盘娣,吴家道,杨剑波,贾士荣,余增亮;应用低能离子束将抗菌肽ShivaA基因导入恢复系明恢63的研究(简报)[J];安徽农业科学;2000年04期
10 许晓风,郁锋,杨启银,陈育如,彭荣淮,贺海生,王程辉;烟草工业下脚料综合利用研究(I)——抗菌成分的提取与抑菌效果测定[J];安徽农业科学;2003年02期
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1 黄家强;卜夏;李卓娅;龚非力;;人TNFα分泌型、跨膜型和跨膜稳定型重组体的构建表达及杀瘤效应[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
2 郭昱嵩;王中铎;刘楚吾;陈志明;刘筠;;勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)线粒体DNA全序列的测定与分析[A];中国海洋学会2007年学术年会论文集(下册)[C];2007年
3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4 刘奇志;赵映霞;宋艳丽;潘登;童越敏;;我国昆虫病原线虫制剂研制与应用现状分析[A];新世纪(首届)全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年
5 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG2基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
6 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
7 唐小江;马争;黄建勋;黄汉林;李来玉;牛侨;;正己烷引起红细胞膜血影蛋白交联的研究[A];中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会论文集[C];2004年
8 张兴;马志卿;李广泽;江志利;何军;冯俊涛;;生物农药评述[A];全国安全用药技术研讨会论文集[C];2001年
9 严家彬;李新辉;吴淑勤;杜合军;;鳜鱼病毒核酸特异片段表达及高效价抗体制备[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
10 赵晓瑜;柳伟强;李晓霞;;蚯蚓抗菌肽40kDa Fetidin基因的原核表达与复性[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
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4 陈其华;前癃通胶囊治疗良性前列腺增生症临床观察及其对间质细胞作用的实验研究[D];湖南中医药大学;2011年
5 马丽菊;云南宣威肺癌细胞系侧群细胞特征分析[D];昆明医学院;2011年
6 许雷;大青杨纤维素合酶基因的克隆与遗传转化的研究[D];东北林业大学;2011年
7 朱伟;摄食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1对机体胰岛素敏感性的影响[D];重庆医科大学;2011年
8 王金鹏;4α糖基转移酶环化活性定向控制及其大环糊精产物的分离及应用研究[D];江南大学;2011年
9 程光平;巴马繐唇鲃生物学及遗传学研究[D];中国海洋大学;2011年
10 宋娜;西北太平洋两种海洋鱼类的分子系统地理学研究及分子标记在褐牙鲆增殖放流中的应用[D];中国海洋大学;2011年
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2 钱静;携带Apoptin双调控溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究[D];浙江理工大学;2010年
3 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
4 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
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7 张燕松;肾移植术后患者PBMCs中NF-κB的活性和TNF-α mRNA的表达研究[D];郑州大学;2010年
8 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
9 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
10 陈操;日本七鳃鳗抗增殖蛋白Prohibitin1研究及类B淋巴细胞免疫调节初探[D];辽宁师范大学;2010年
【同被引文献】
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1 白俊杰,劳海华,叶星,李英华,罗建仁;两种鲟半胱氨酸蛋白酶抑制剂成熟肽cDNA的克隆与分析[J];动物学报;2002年04期
2 王慧,曾勇庆,李铁坚,宗希阁,栗磊;昆虫病原线虫的室内人工繁殖研究[J];山东畜牧兽医;1998年02期
3 钱秀娟,许艳丽,Wang Yi,刘长仲,李春杰,赵风平;昆虫病原线虫对大豆地下害虫东北大黑鳃金龟幼虫的致病力研究[J];大豆科学;2005年03期
4 钱秀娟,许艳丽,刘长仲;昆虫病原线虫研究的历史现状及其发展应用动力[J];甘肃农业大学学报;2005年05期
5 王英;半胱氨酸蛋白酶在寄生虫与宿主的相互关系中的作用[J];国外医学(寄生虫病分册);2001年04期
6 刘奇志;;斯氏线虫CB-2Y品系对李实蜂的侵染试验[J];昆虫天敌;1993年02期
7 丘雪红;韩日畴;;昆虫病原线虫资源概况和分类技术进展[J];昆虫学报;2007年03期
8 夏颖伟;韩日畴;李瑞军;;昆虫病原线虫与其共生细菌共生关系的研究进展[J];昆虫知识;2006年03期
9 李晓宇,郭付振;昆虫病原线虫共生细菌研究进展[J];陕西农业科学;2005年05期
10 丛斌,刘维志,杨怀文;昆虫病原线虫研究和利用的历史、现状与展望[J];沈阳农业大学学报;1999年03期
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1 董玉芝;渗透胁迫下白花柽柳SSH文库构建及质膜水孔蛋白基因克隆[D];东北林业大学;2006年
2 陈云芳;小麦叶锈菌诱导TcLr19cDNA文库的构建与EST分析[D];河北农业大学;2007年
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1 齐小强;野大麦盐胁迫诱导基因的克隆及功能分析[D];中国农业科学院;2003年
2 罗洪林;大片吸虫成虫cDNA文库的构建及其表达序列标签(EST)的研究[D];广西大学;2005年
3 郭娴;小麦白粉菌诱导早期的基因表达分析[D];中国农业科学院;2005年
4 李春杰;昆虫病原线虫大量繁殖技术研究[D];甘肃农业大学;2006年
【二级参考文献】
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1 徐洁莲;杨广球;;斜纹夜蛾侧沟茧蜂生物学特性观察[J];昆虫天敌;1983年01期
2 刘南欣;梁梅芳;张振英;郑莲生;梁永奇;;格氏线虫中国品系(85011)防治竹象虫的施用技术及与农药混用的研究[J];昆虫天敌;1990年03期
3 徐洁莲;昆虫病原线虫(斯氏科和异小杆科)分类研究近况[J];昆虫天敌;1998年03期
4 朱明军,谭字榴,吴振强,梁世中,韩日畴,李秋贱,李丽英;昆虫病原线虫的生物反应器培养[J];中国生物防治;1998年04期
5 杨秀芬,杨怀文;昆虫病原线虫的致病机理[J];中国生物防治;1998年04期
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1 陈式斌,黄文玲,陈清林;中国昆虫病原线虫研究进展[J];西南林学院学报;2002年04期
2 翟文涛;江守起;;昆虫病原线虫在林业害虫防治中的应用[J];科技资讯;2006年04期
3 刘南欣;张振英;;土壤中的昆虫病原线虫[J];昆虫天敌;1982年04期
4 曾勇庆,王慧,宗希阁;昆虫病原线虫的研究与应用进展[J];山东畜牧兽医;1997年03期
5 许艳丽;;利用昆虫病原线虫防治大豆田地下害虫取得进展[J];大豆科学;2008年02期
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9 王宝升,苏骏,张书芳,崔景岳;昆虫病原线虫利用的研究 Ⅰ.我国北方蛴螬对昆虫病原线虫的敏感性[J];华北农学报;1990年04期
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2 夏艳勋;林矫矫;赵传壁;陈益;贺桂芬;;日本血吸虫性别差异表达基因的筛选及研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
3 山蓝;王葆利;张继澍;;柿果实成熟期间差异表达基因的研究[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
4 李吕力;李晓峰;罗永坚;王敏莉;肖继东;;重症肌无力患者免疫相关基因差异表达的基因芯片研究[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
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7 杨宇飞;邬冬华;;中药抗癌症恶病变基因芯片研究[A];2002中医药博士论坛——中医药的继承、创新与发展[C];2002年
8 周津;刘芝华;王秀琴;丁芳;周传农;赵峻;张汝刚;吴旻;;抑制消减杂交与反Northern结合分离食管癌差异表达基因的初步研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
9 夏丁;陈志强;朱旋;叶章群;;特发性高草酸尿症大鼠肝脏差异表达基因的筛选研究[A];第十六届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2009年
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1 ;鲑鱼鱼白DNA对小鼠胸腺作用的差异表达基因筛选[N];中国医药报;2003年
2 ;肾癌差异表达基因鉴定及功能研究[N];中国医药报;2002年
3 本报记者 赵佳月;生物农药的出路在于产业化[N];广东科技报;2004年
4 罗刚;构建基因文库解析病毒密码[N];健康报;2004年
5 李艳芳;表达谱基因芯片与心肾疾病研究[N];中国医药报;2002年
6 山东省绿色食品发展中心;可用于生产绿色食品的农药种类[N];山东科技报;2002年
7 记者 杜有全;第四军医大学克隆出六个人类口腔新基因[N];中国商报;2000年
8 山东省沂水县职教中心 侯和菊;花卉常用生物农药的种类[N];中国花卉报;2008年
9 范田;绿色农药开发新趋势[N];中国化工报;2004年
10 ;防治蔬菜病虫须防农药污染[N];湖南科技报;2002年
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1 王方;胎肝细胞对HBV感染应答基因的初步分离和鉴定[D];第三军医大学;2004年
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6 简华刚;皮肤创伤愈合相关差异表达基因的克隆、筛选及鉴定[D];重庆医科大学;2002年
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1 夏颖伟;昆虫病原线虫发育相关基因的鉴定以及spi-583基因的克隆与表达[D];河北农业大学;2006年
2 蒋峥;乳腺癌基因芯片实验数据分析与挖掘[D];重庆医科大学;2011年
3 郝震锋;免疫抑制小鼠阿萨希丝孢酵母菌皮肤感染差异表达基因的初步筛选[D];第三军医大学;2004年
4 吴扬;应用cDNA-AFLP技术分离安吉白茶阶段性返白过程的差异表达基因[D];湖南农业大学;2010年
5 谢文娟;泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的分析[D];新疆大学;2010年
6 张惠;沙门氏菌诱导家蝇幼虫SSH文库构建及差异表达基因分析[D];吉林农业大学;2011年
7 林凯;正加速度(+Gz)重复暴露致大鼠脑损伤差异表达基因的筛选[D];第三军医大学;2002年
8 王玉鹏;基于基因芯片的基因表达模式分析[D];厦门大学;2007年
9 王宇;大鼠脊髓损伤与修复相关基因:生物信息学分析及SCIRR10分子特性[D];吉林大学;2005年
10 奚沁华;食管—胃结合部癌的基因表达谱研究[D];苏州大学;2006年
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