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《河北农业大学》 2006年
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玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63发酵液及菌丝中抑菌活性成分分离

赵志泉  
【摘要】:玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63是从马铃薯疮痂病自然衰退土壤中分离出的一种对多种植物病原菌有抑制作用的生防链霉菌。本文的主要目的是对该菌株的发酵液及其菌丝的主要成分进行分析,对其产生的抗生素进行分离纯化,研究其性质并确定其结构。 本实验采用以马铃薯疮痂病菌为指示菌的平皿筛选模型,对发酵液中的活性成分进行筛选。发酵液采用甲壳素水溶液进行预处理,沉淀其中的蛋白质成分,选用D312大孔吸附树脂对发酵液进行初步的脂溶性、水溶性物质的分离。脂溶性部分采取乙醇梯度洗脱,分为40%、70%、95%三个梯度部分并辅以生物活性检测跟踪。确定70%乙醇的洗脱部分为活性集中部分后,利用分子筛凝胶柱Sephadex G-15进行细分离,分步收取的下柱液采取Waters 2996 PDA检测器进行检测,色谱柱为Agilent ZORBAX Extend-C18,5μm,4.6×250mm,色谱条件:30%—80%—100%(乙腈:水)流速:1mL/min,室温。发现其中分离产物很不稳定,在冷藏条件下即发生分解。水溶性部分采取离子交换树脂D81进行处理,以5%的HAc水溶液为交换液洗脱,经过NH_3·H_2O调pH值到中性后利用分子筛凝胶柱Sephadex G-10进行细分离,下柱液经过活性跟踪测定和蒸发光检测器检测的结果相互对照后,合并浓缩,冷冻干燥后获得白色粉末状物,经检测活性丧失。 对菌丝提取物采用以棉花黄萎病菌为指示菌的平皿筛选模型,菌丝采用丙酮为提取剂进行超声处理,经丙酮浸提后获得母液。母液经减压蒸发后,利用适量乙酸乙酯进行初步结晶,获得淡黄色粉末状物。粉末溶于水后利用大孔吸附树脂XAD-1600进行初级分离,经过ODS C18中压分离柱的细分离后得到一组性质非常相似的物质。HPLC制备后发现制备出的单体物质自行分解,30min后分解为原制备情况。对其进行IR、ESI-MS、H-NMR检测后初步认为这一组物质的分子量为737D左右,但是由于无法获得单体物质,尚不能对其详细结构进行推断。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S482.2

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【引证文献】
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