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《河北农业大学》 2007年
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农杆菌介导玉米大斑病菌的遗传转化

刘建光  
【摘要】: 玉米大斑病菌(无性态Exserohilum turcicum,有性态Setosphaeria turcica)引起的玉米大斑病是玉米生产上一种重要的真菌病害,在世界主要玉米产区都曾造成过严重的经济损失。目前,致病相关基因功能研究的最直接的方法是通过创建该基因的缺失突变体,进一步观察突变体表型上的变化,进而推测该基因的功能。农杆菌介导(Agrobacteriumtumefaciens-mediated transformation,ATMT)的遗传转化技术,以其特有的优点成为研究真菌与其寄主互作的有力工具。 本研究利用ATMT技术,创建了玉米大斑病菌突变体,并对部分突变体进行了分析,具体结果如下: (1)本文对玉米大斑病菌遗传转化的关键条件、因素和参数进行了摸索和优化,确定了最适筛选转化子的潮霉素浓度为50gg/mL,头孢噻肟钠与羧卞青霉素对农杆菌有效抑制的浓度为200/200μg/mL。确定了共培养最佳方式是将萌发的玉米大斑病菌分生孢子与农杆菌混合物25℃共培养于Fries培养基中,共培养的最佳时间为2d,从接种病斑上分离并萌发的分生孢子作为转化受体其转化效率最高。应用最适的转化条件,试验最终平均从10~5个分生孢子中可获得40~60个玉米大斑病菌转化子。 (2)试验对所获得的部分转化子进行PCR及Southern blot验证。根据T-DNA上已知潮霉素基因序列设计引物进行PCR,检测结果发现所检测的转化子均含有目的潮霉素基因片段。随机选取其中4个转化子进行Southern blot验证,结果发现其中2个转化子有杂交信号且为单拷贝插入。 (3)将所获得的转化子接种于PDA培养基上,25℃培养7~10d,观察其菌落形态和显微特征,获得了2株菌落形态发生变异的突变体(L-32、L-55)、1株生长速度减慢的突变体(L-14)、3株致病能力丧失的突变体(L-3、L-9、L-43),未发现孢子形态发生变化的突变体。其中,突变体L-55的产孢能力也完全丧失。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S435.131

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【引证文献】
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1 郭靖;抗玉米粗缩病RNA干扰载体的构建和农杆菌介导的遗传转化[D];四川农业大学;2011年
2 张娇;灰葡萄孢T-DNA插入突变体的筛选及分析[D];河北农业大学;2010年
3 闫海;一个稻瘟菌新型锌指蛋白基因突变体的生物学特性分析[D];吉林大学;2013年
【参考文献】
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1 李林;玉米大斑病菌生理小种鉴定初报[J];山东农业科学;1995年02期
2 焦成松,周永兴,朱德生,冯志华,贾战生;显微注射法建立含荧光素酶和HCV-C基因细胞模型[J];第四军医大学学报;2000年07期
3 晋齐鸣,任金平,张秀文,庞志超;1991年吉林省中部地区玉米病害发生危害情况[J];吉林农业科学;1992年02期
4 卢萍;王宝兰;;基因枪法转基因技术的研究综述[J];内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版);2006年01期
5 方卫国,张永军,杨星勇,裴炎;根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展[J];中国生物工程杂志;2002年05期
6 廖鸣娟,董爱华,王正栋,朱睦元;植物转座子及其在功能基因组学中的应用[J];遗传;2000年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 刘路宁;玉米大斑病菌有性杂交后代的生物学特性及其毒素组分分析[D];河北农业大学;2004年
2 曹志艳;玉米大斑病菌黑色素性质与功能研究[D];河北农业大学;2006年
【共引文献】
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1 张玉芹;高俊平;张晋;王芙蓉;张军;;棉花T-DNA标签雄性不育突变体的遗传分析[J];山东农业科学;2010年01期
2 程娜;晓军;赵民安;张文明;姚大年;;农杆菌介导遗传转化宿主的研究进展[J];安徽农业科学;2006年24期
3 王葵娣;郑服丛;;一种快速·有效分离T-DNA插入位点的侧翼序列的方法——DW-ACP-PCR技术[J];安徽农业科学;2007年28期
4 孙小东;王爱东;陈甲法;李晶晶;王瑞霞;韩娅楠;吴建宇;丁俊强;;玉米穗粒腐病抗性研究进展[J];安徽农业科学;2008年35期
5 祁洋;李燕;王永智;尉亚辉;;扩增T-DNA插入位点侧翼序列的方法及其应用进展[J];安徽农业科学;2009年17期
6 王章建;高伟;杨宝;常泓;;植物功能基因组学研究方法[J];安徽农业科学;2009年20期
7 陈东亮;李纪元;范正琪;范妙华;;根癌农杆菌介导真菌遗传转化的影响因素及应用[J];安徽农业科学;2010年07期
8 王伯华;许杨;李燕萍;;红曲菌转化系统的研究进展[J];安徽农业科学;2010年29期
9 胡凯;王微;;紫杉二烯合成酶基因转化红豆杉内生真菌XT5的研究[J];安徽农业科学;2011年02期
10 陈凤;王坤;银超;李德明;任楠;李俊星;;根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统的构建[J];安徽农业科学;2012年16期
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1 高剑;肖苏生;曾涛;曾会才;;农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号生理小种高效遗传转化体系的建立及影响因子的优化[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
2 李欣龙;张敏;段霞瑜;周益林;;丝状真菌遗传转化系统的研究进展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
3 李国田;杨合同;周红姿;;根癌农杆菌介导的木霉插入转化及其应用[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
4 刘菊华;金志强;徐碧玉;;植物功能基因组学研究技术及其在热带作物上的应用前景[A];中国热带作物学会第七次全国会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2004年
5 贺春萍;林春花;廖奇亨;郑服丛;;稻瘟病菌T-DNA插入突变体的构建及表型分析[A];中国热带作物学会2005年学术(青年学术)研讨会论文集[C];2005年
6 姚强;刘岩;任鹏飞;任海霞;曲玲;李瑾;宫志远;;分子生物学技术在食用菌中的应用研究进展[A];第二届全国食用菌中青年专家学术交流会论文集[C];2008年
7 王成树;吕丁丁;李琳;;虫生真菌致病与退化机理研究[A];中国菌物学会第四届会员代表大会暨全国第七届菌物学学术讨论会论文集[C];2008年
8 王伟伟;李桂华;刘金亮;张世宏;张艳华;潘洪玉;;玉米大斑病菌T-DNA插入突变体库的创建及致病相关基因克隆[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
9 宋立秋;王振营;何康来;白树熊;;玉米上主要害虫为害与玉米穗腐病的发生关系及其籽粒中霉菌毒素产毒为害的研究进展[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
10 董怀玉;张明会;徐秀德;姜钰;王丽娟;曲晓丽;李慧斌;;杀菌剂对玉米大斑病菌的抑菌效果测定[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
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1 曾建新;拟南芥隐花素CRY1在亚细胞结构的功能分析及激活标签突变体库的构建[D];湖南大学;2010年
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5 秦毅;表达苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3Aal的球孢白僵菌工程菌株的构建及其对斜纹夜蛾幼虫的肠道与体壁侵染力[D];浙江大学;2010年
6 刘倩;胞内海藻糖对球孢白僵菌耐热力的贡献及其代谢相关基因的功能鉴定[D];浙江大学;2010年
7 刘缙;银杏种仁抗菌蛋白基因工程研究及小麦胚乳特异启动子的鉴定和评估[D];西北农林科技大学;2010年
8 冯宝珍;辣椒疫霉(Phytophthora capsici)诱导坏死蛋白基因克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
9 张艳华;根癌农杆菌介导申克氏孢子丝菌T-DNA插入突变的研究[D];吉林大学;2011年
10 梁硕;pshuttle-Egr1-hSmac基因—放射治疗乳腺癌的体外抑瘤效应研究[D];吉林大学;2011年
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1 李琦;红色红曲菌交替氧化酶基因Mraox1克隆与功能初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 兰楠;利用天南星科凝集素构建内生工程真菌及其抗虫防病效果研究[D];华中农业大学;2010年
3 王萍萍;盾壳霉产孢相关基因的克隆及腺苷脱氨酶(CMADA)基因的初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 潘方;高产柚苷酶菌株的选育及发酵过程研究[D];安徽工程大学;2010年
5 王威;玉米瘤黑粉病抗性的遗传特点及生化特性研究[D];甘肃农业大学;2010年
6 钟浩;Mariner-like转座子在竹亚科的分布、多态性、进化及转座特性的研究[D];浙江农林大学;2010年
7 王红;稻瘟病菌亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MoMET13)功能的初步研究[D];浙江大学;2011年
8 张新明;大麦坚黑粉菌遗传转化体系优化及其侵染机制初探[D];浙江大学;2010年
9 张玉净;灰葡萄孢T-DNA插入突变菌株的致病性分析[D];河北农业大学;2011年
10 詹旭;玉米大斑病菌漆酶基因StLAC在黑色素合成中的功能分析[D];河北农业大学;2011年
【同被引文献】
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1 张蕾;王福银;李阳春;陈秀蓉;;仙客来灰霉病的病原鉴定及其生物学特性研究[J];安徽农学通报;2008年01期
2 张从宇,张巨全,胡能兵,张晓红;番茄灰霉病菌寄主范围及致病力分化研究[J];安徽技术师范学院学报;2003年03期
3 马继芳,范永山,张静柏,董金皋;玉米大斑病菌原生质体的制备[J];河北农业大学学报;2003年03期
4 邸垫平,苗洪芹,路银贵,田兰芝;玉米抗粗缩病接种鉴定方法研究初报[J];河北农业大学学报;2005年02期
5 赵文生;;水稻稻瘟病发病规律与防治措施[J];科技创新与应用;2012年01期
6 余晓丹;锌指蛋白结构和功能研究进展[J];国外医学(卫生学分册);2004年03期
7 王桂华;;稻瘟病的发生与防治[J];现代农业科技;2012年22期
8 于海燕;赵兵;徐环宇;贾云峰;;水稻稻瘟病的发生与防治[J];现代农业科技;2012年24期
9 周毓君,郭明申,朱宝成,梁伯潘;草莓灰霉菌毒素的稳定性及致病力的研究[J];河北大学学报(自然科学版);1995年03期
10 陈义红;阮龙;王俊;张玮;陈洪俭;;玉米粗缩病抗病育种研究进展[J];河北农业科学;2010年06期
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1 丁胜利;一个新的锌指蛋白作为稻瘟菌的致病力因子[D];中国农业大学;2004年
2 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
3 付桂明;橙色红曲菌pksCT gene的敲除和长同源臂置换型打靶载体的构建[D];南昌大学;2007年
4 梁慎;一个新的稻瘟菌致病相关基因MgLDB1的鉴定与功能分析[D];浙江大学;2008年
5 江燕;水稻和拟南芥TFⅢA型锌指蛋白基因家族的鉴定及ZFP207基因的功能研究[D];南京农业大学;2007年
6 刘丽华;稻瘟病菌几丁质酶和丝氨酸蛋白酶之水稻受体研究[D];福建农林大学;2009年
7 张冬梅;稻瘟病菌Rab蛋白功能研究[D];福建农林大学;2009年
8 曹志艳;玉米大斑病菌黑色素合成途径相关基因的克隆及功能分析[D];河北农业大学;2009年
9 方敏彦;稻瘟菌对三唑类杀菌剂丙环唑敏感性检测及农杆菌介导的稻瘟菌转化—致病缺陷突变体筛选[D];甘肃农业大学;2009年
10 汪滢;稻瘟菌候选致病相关基因的功能验证[D];浙江大学;2010年
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1 王琦;稻瘟病菌转录因子Moswi6的功能研究[D];南京农业大学;2010年
2 王葵娣;稻瘟菌四个致病相关突变位点的定位及侵染钉缺陷突变体的初步研究[D];华南热带农业大学;2007年
3 牛安莉;玉米大斑病菌REMI插入突变体的获得及筛选[D];河北农业大学;2008年
4 孔慧敏;农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病突变体的筛选[D];浙江大学;2008年
5 郑蒙;根癌农杆菌介导灰葡萄孢遗传转化及T-DNA侧翼序列分析[D];河北农业大学;2009年
6 韩绍辉;农杆菌介导的大丽轮枝菌的遗传转化[D];河北农业大学;2009年
7 晁跃辉;紫花苜蓿锌指蛋白基因的克隆及初步鉴定[D];重庆大学;2009年
8 林成增;稻瘟病菌假定几丁质酶基因功能分析[D];福建农林大学;2010年
9 陈东亮;根癌农杆菌介导的千年桐SAD基因对产油酵母的遗传转化[D];中国林业科学研究院;2010年
10 李永生;抗真菌双T-DNA植物表达载体构建及农杆菌介导的玉米茎尖遗传转化[D];甘肃农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘国胜,董金皋,黄梧芳;植物组织培养技术在抗玉米小斑病育种中的应用[J];河北农业大学学报;1990年01期
2 董金皋;朱晞;;真菌毒素生物测定方法研究概况 Ⅰ.植株和组织器官水平的生物测定[J];河北农业大学学报;1992年04期
3 李贺年,齐巧丽,赵来顺,李济宸,苑凤瑞,李君阁,程起;玉米黄斑病研究Ⅳ.品种抗病性鉴定[J];河北农业大学学报;1998年04期
4 安鑫龙,董金皋,韩建民;玉米大斑病菌的RAPD分析Ⅰ.应用CTAB法提取玉米大斑病菌DNA[J];河北农业大学学报;2001年01期
5 张利辉,邢继红,董金皋;玉米大斑病菌2号小种毒素的生物测定与组分分析[J];河北农业大学学报;2001年01期
6 李朝灿,杨惠杰,甘代耀,韦刚;水稻抗稻瘟病突变体的离体筛选与鉴定[J];福建省农科院学报;1987年02期
7 石洁,刘玉瑛,邵艳军,张玲;玉米品种(品系)对弯孢菌叶斑病抗病性分析[J];华北农学报;2000年S1期
8 王利国,李玲,彭永宏;植物真菌致病基因的研究进展[J];华南师范大学学报(自然科学版);2003年01期
9 宁华;工程菌所产黑色素对生物大分子光保护作用的研究[J];华中师范大学学报(自然科学版);2001年01期
10 晋齐鸣,任金平,张秀文,庞志超;1991年吉林省中部地区玉米病害发生危害情况[J];吉林农业科学;1992年02期
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1 范永山;玉米大斑病菌MAPK基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2004年
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1 谷守芹;玉米抗大斑病相关基因表达片段的分离和克隆[D];河北农业大学;2004年
2 侯晓强;玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)有性杂交后代的生理分化和遗传多态性[D];河北农业大学;2004年
3 刘路宁;玉米大斑病菌有性杂交后代的生物学特性及其毒素组分分析[D];河北农业大学;2004年
4 孙淑琴;玉米大斑病菌F_2代菌株的寄生适合度变异与遗传多态性[D];河北农业大学;2005年
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1 董金皋,周宗山,李正平;玉米大斑病菌HT-毒素组分Ⅱ的化学结构[J];植物病理学报;2000年02期
2 邢继红;董金皋;;玉米大斑病菌菌丝蛋白单克隆抗体制备[J];植物病理学报;2006年02期
3 董金皋,康绍兰,王艳霞,和有杰,黄梧芳;玉米大斑病菌Helminthosporium turcicum致病毒素产生的条件及其特性[J];河北农业大学学报;1993年02期
4 桂秀梅,董金皋,侯晓强;中国2001年玉米大斑病菌生理小种鉴定[J];河北农业大学学报;2003年04期
5 韩建民,姜丽,王惠哲,董金皋;玉米大斑病菌HT-毒素对玉米叶片木质素含量的影响[J];沈阳农业大学学报;2000年05期
6 马继芳,范永山,张静柏,董金皋;玉米大斑病菌原生质体的制备[J];河北农业大学学报;2003年03期
7 张建成,范永山,董金皋;玉米大斑病菌毒素对玉米叶肉细胞脂氧合酶活性的影响[J];植物病理学报;2003年05期
8 纪伟波;何海军;赵松涛;焉山;付东波;;黑龙江玉米大斑病菌生理分化研究[J];玉米科学;2010年01期
9 ;玉米大斑病国外文献汇编[J];天津农业科学;1974年01期
10 兰光燮,王宗明,陆宁,李雷松,周建华,周艳;黔西北地区玉米大斑病菌(Helmithosporium turcicum Pass)生理小种研究[J];西南农业学报;1993年04期
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1 宋庆涛;张国珍;董金皋;;玉米大斑病菌原生质体的制备与再生[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
2 张桂珍;王伟伟;刘金亮;张世宏;张艳华;潘洪玉;;吉林省玉米大斑病菌交配型的检测[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
3 郝志敏;李志勇;董金皋;;玉米大斑病菌磷酯酶C基因(StPLC-1)的克隆与功能分析[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
4 董金皋;张建成;韩建民;赵光耀;;玉米大斑病菌HT-毒素与玉米细胞LOX酶活性的关系[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
5 王茜;王苗苗;郝志敏;董金皋;;不同碳源对玉米大斑病菌PKA-C基因表达规律的影响[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
6 王伟伟;张桂珍;刘金亮;张世宏;赵文生;彭友良;潘洪玉;;玉米大斑病菌T-DNA插入突变体库构建及致病相关基因的克隆[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 王伟伟;李桂华;刘金亮;张世宏;张艳华;潘洪玉;;玉米大斑病菌T-DNA插入突变体库的创建及致病相关基因克隆[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
8 曹志艳;温雷蕾;刘士伟;董金皋;;玉米大斑病菌黑色素合成酶基因3hnr的克隆与功能分析[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 赵巍;王青;郝志敏;韩建民;董金皋;;玉米大斑病菌PKC基因同源重组载体的构建及启动子序列分析[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
10 刘建光;董金皋;;利用ATMT技术对玉米大斑病菌进行遗传转化及条件的优化[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
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1 通讯员郭鸿涌 记者刘廉君;河北自然科学基金攻关农业病虫害[N];科技日报;2003年
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1 申珅;玉米大斑病菌cAMP磷酸二酯酶基因调控病菌发育的功能研究[D];河北农业大学;2013年
2 曹志艳;玉米大斑病菌黑色素合成途径相关基因的克隆及功能分析[D];河北农业大学;2009年
3 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
4 郝志敏;玉米大斑病菌G蛋白和磷脂酶C基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
5 赵辉;玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)生理分化和遗传多态性研究[D];沈阳农业大学;2009年
6 谷守芹;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的STK基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2007年
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1 姚晓霞;光调控与玉米大斑病菌黑色素合成途径基因的表达关系研究[D];河北农业大学;2010年
2 张桂珍;玉米大斑病菌生理小种鉴定及球毛壳菌对其生防作用研究[D];吉林大学;2012年
3 郝杰;玉米大斑病菌2A型蛋白磷酸酶基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2010年
4 郭丽媛;中国北方玉米产区玉米大斑病菌生理小种监测及遗传多样性分析[D];河北农业大学;2013年
5 申珅;玉米大斑病菌腺苷酸环化酶基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2010年
6 高金欣;东北地区玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)生理分化和遗传多态性研究[D];沈阳农业大学;2011年
7 辛媛媛;黄顶菊内生细菌对玉米大斑病菌拮抗机理初探[D];河北农业大学;2012年
8 李青为;玉米大斑病菌黑色素合成酶基因St4HNR功能分析和胞外黑色素研究[D];河北农业大学;2010年
9 赵巍;PKC调控玉米大斑病菌致病性的机理研究[D];河北农业大学;2011年
10 王晶晶;StPP2A-c基因调控玉米大斑病菌致病性的机制研究[D];河北农业大学;2013年
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